慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒脫氧核苷酸水平與乙型肝炎免疫學(xué)標(biāo)記物的相關(guān)性研究

尚文會(huì)，胡 林，王明霞，劉秀娟

（淄博市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 淄博 255000）

慢性乙型肝炎（以下簡稱“乙肝”）是由于乙型肝炎病毒持續(xù)感染所導(dǎo)致的肝臟慢性疾病，在傳染性肝炎中發(fā)病率較高[1-2]。乙型肝炎免疫學(xué)標(biāo)記物（HBV-M）是臨床對該病感染進(jìn)程進(jìn)行評估的常用指標(biāo)，能夠判斷患者是否處于感染期、是否有免疫抵抗能力及病毒是否大量復(fù)制，對該病的診療過程具有重要的指導(dǎo)意義[3-4]。近年來，隨著熒光檢測技術(shù)的發(fā)展及普及，通過測定病毒核酸來評估病情進(jìn)展情況逐漸成為臨床診療的新思路[5-6]。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）是在常規(guī)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測中加入熒光標(biāo)記探針來對病毒載量進(jìn)行定量檢測，具有高敏感度、高準(zhǔn)確度的優(yōu)點(diǎn)[7]。本研究為探討乙型肝炎病毒脫氧核苷酸（HBV-DNA）水平與HBV-M的相關(guān)性，對淄博市傳染病醫(yī)院收治的100例慢性乙肝患者進(jìn)行qPCR檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年3月至2023年3月淄博市傳染病醫(yī)院收治的100例慢性乙肝患者為研究對象進(jìn)行回顧性分析。根據(jù)不同HBV-M模式[8]分為1型組[35例，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）（+）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）（-）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）（+）、乙型肝炎E抗體（HBeAb）（-）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）（+）]、2型組[49例，HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（-）、HBeAb（+）、HBcAb（+）]、3型組[12例，HBsAg（+）、HBsAb（-）、HBeAg（-）、HBeAb（-）、HBcAb（+）]及4型組[4例，HBsAg（-）、HBsAb（+）、HBeAg（-）、HBeAb（-）、HBcAb（-）]。1型組患者中男性26例，女性9例；年齡30～64歲，平均年齡（48.20±5.26）歲。2型組患者中男性29例，女性20例；年齡32～63歲，平均年齡（48.25±5.40）歲。3型組患者中男性8例，女性4例；年齡30～63歲，平均年齡（48.23±5.40）歲。4型組患者中男性3例，女性1例；年齡32～65歲，平均年齡（48.36±5.42）歲。4組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)淄博市傳染病醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[8]中慢性乙肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②HBsAg陽性＞6個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并全身腫瘤、結(jié)核等疾病者；②合并原發(fā)免疫系統(tǒng)疾病者；③伴有其他類型感染者；④合并精神或意識(shí)障礙者。

1.2 研究方法 采集所有患者清晨空腹外周靜脈血4 mL，采用離心機(jī)（長沙湘銳離心機(jī)有限公司，型號(hào)：TG16-WS）以3 000 r/min進(jìn)行離心10 min，取血清，置于-60 ℃保存待檢，在48 h內(nèi)完成檢測。采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（日本希森美康，型號(hào)：HISCL-5000）測定HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb，然后依據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析定量判定檢測項(xiàng)目結(jié)果：HBsAg≥1.1 PEIU/mL、HBsAb≥11 PEIU/mL、HBeAg≥0.11 PEIU/mL、HBeAb＜0.9 PEIU/mL、HBcAb＜0.9 PEIU/mL判定為陽性[9]。采用熒光定量PCR儀（西安天隆科技有限公司，型號(hào)：Gentier96 E）和西安天隆科技有限公司乙肝DNA定量試劑盒測定HBV-DNA含量，HBV-DNA含量值最低檢出限值為10 IU/mL。以全自動(dòng)生化分析儀（博科控股集團(tuán)有限公司，型號(hào)：BK-400）測定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和前白蛋白（PA），正常值范圍分別為：AST 5～40 U/L，ALT 7～40 U/L，PA 17～42 mg/L[10]。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較不同HBV-M模式患者的HBVDNA陽性率及HBV-DNA水平。②分析HBeAg與HBVDNA水平的相關(guān)性。參照《亞太肝病學(xué)會(huì)慢性乙型肝炎管理指南（2008年版）》[11]將HBV-DNA水平、HBeAg（+）水平按照數(shù)值高低分為4個(gè)范圍，分析HBeAg與HBV-DNA水平的相關(guān)性。③分析HBeAg與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多個(gè)樣本率的多重比較采用Bonferroniχ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用 LSD-t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV-M模式患者的HBV-DNA陽性率及HBV-DNA水平比較 100例患者中檢出1型～4型4種HBV-M陽性模式，1型組患者HBV-DNA陽性率、HBVDNA水平均高于2型組、3型組、4型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同HBV-M模式患者的HBV-DNA陽性率及HBV-DNA水平比較

2.2 HBeAg與HBV-DNA水平的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示，HBeAg與HBV-DNA水平呈正相關(guān)（P＜0.05），見表2、表3。

表2 HBeAg與HBV-DNA水平的關(guān)系[例(%)]

表3 HBeAg與HBV-DNA水平的相關(guān)性分析

2.3 HBeAg與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性分析 HBeAg陽性患者AST、ALT水平高于HBeAg陰性患者，PA水平低于HBeAg陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。相關(guān)性分析顯示，HBeAg與肝功能指標(biāo)不相關(guān)（P＞0.05），見表5。

表4 HBeAg陽性和陰性患者肝功能指標(biāo)比較（）

表4 HBeAg陽性和陰性患者肝功能指標(biāo)比較（）

注：HBeAg：乙型肝炎E抗原；AST：谷草轉(zhuǎn)氨酶；ALT：谷丙轉(zhuǎn)氨酶；PA：前白蛋白。

HBeAg例數(shù)AST(U/L)ALT(U/L)PA(mg/L)陽性3585.65±6.2065.36±4.5613.50±2.31陰性6563.45±7.2452.15±4.1219.52±3.20 t值15.35314.7299.826 P值＜0.05＜0.05＜0.05

表5 HBeAg與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

慢性乙肝是一種常見的病毒性肝炎類型，具有較強(qiáng)的傳染性和一定的致死率[12]。研究數(shù)據(jù)顯示，有50%～75%的慢性乙肝患者體內(nèi)存在活躍的病毒復(fù)制和肝臟炎癥反應(yīng)，病程通常超過6個(gè)月，體內(nèi)病毒持續(xù)存在未被清除[13]。HBV-M是臨床對本病進(jìn)行診斷、治療的主要依據(jù)，其表達(dá)情況可反映乙肝病毒的不同活動(dòng)狀態(tài)[14]。如今臨床對慢性乙肝的相關(guān)診斷中，將HBV-DNA的檢測作為一種了解病毒活動(dòng)情況的重要指標(biāo)，可采用qPCR對HBVDNA的水平進(jìn)行定量檢測，以此評估乙肝病毒的復(fù)制情況，qPCR能夠通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)探測熒光信號(hào)以獲得病毒定量結(jié)果，提供病毒數(shù)量，從而評估其復(fù)制狀態(tài)及活動(dòng)情況[15]。

本研究結(jié)果顯示，100例患者中檢出1型～4型4種HBV-M陽性模式，1型組患者HBV-DNA陽性率、HBVDNA水平均高于2型組、3型組、4型組，這提示HBV-DNA與HBV-M存在一定的聯(lián)系。相關(guān)性分析顯示，HBeAg與HBV-DNA水平呈正相關(guān)，這提示HBeAg與HBV-DNA的水平存在同種趨勢。HBeAg陽性提示乙肝病毒復(fù)制活躍，病毒載量高，患者處于乙肝活動(dòng)期，具有較強(qiáng)傳染性，需要接受治療，HBeAg轉(zhuǎn)為陰性或同時(shí)伴有HBeAb轉(zhuǎn)陽時(shí)，通常提示乙肝病毒在逐漸下降，肝功能在逐漸好轉(zhuǎn)，這與HBV-DNA的檢測水平變化相一致。但是也有相關(guān)研究中提出，HBeAg檢測陰性可能代表著病毒復(fù)制活動(dòng)微弱、HBV-DNA水平低，因此對單一測定HBV-M具有局限性[16-17]。

本研究顯示，HBeAg陽性患者AST、ALT水平高于HBeAg陰性患者，PA水平低于HBeAg陰性患者。相關(guān)性分析顯示，HBeAg與肝功能指標(biāo)不相關(guān)。這是由于單一的HBV-M檢測具有局限性，雖能夠提供病毒感染的時(shí)期，但對于病毒炎癥性浸潤與免疫損傷程度無直接的參考價(jià)值。并且由于受HBV病毒基因變異在內(nèi)的多種因素影響，有少數(shù)HBsAg變異無法被檢測試劑所識(shí)別，若HBV-DNA呈現(xiàn)出低水平復(fù)制，則給臨床診斷造成一定的困難。劉勇波等[18]研究中將HBV-M與病毒載量檢測及抗原定量進(jìn)行綜合評估，結(jié)果顯示其能夠更早、更精準(zhǔn)地反應(yīng)乙肝患者的病毒的感染水平、復(fù)制程度、傳染性，與本研究具有共通之處。因此在臨床對慢性乙肝患者的病情診斷中應(yīng)結(jié)合HBV-M、病毒核酸載量及肝功能指標(biāo)綜合評估。

綜上所述，慢性乙肝患者HBeAg與HBV-DNA具有一定的相關(guān)性，為臨床對本病的診療提供依據(jù)。