高效液相色譜在食品農(nóng)獸藥殘留中的檢測(cè)應(yīng)用

劉姝

摘 要：近年來，我國食品安全問題日益突出，食品農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)作為保證食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。高效液相色譜法是一種迅速、靈敏、選擇性高的檢測(cè)方法，因操作簡(jiǎn)便、分離效率高等特點(diǎn)，在食品農(nóng)獸藥殘留分析中得到廣泛應(yīng)用。本文綜述了高效液相色譜法在農(nóng)藥獸藥殘留分析中的應(yīng)用，主要介紹了高效液相色譜在食品中農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)中的作用和檢測(cè)方法，以供相關(guān)人員參考。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；食品；農(nóng)獸藥殘留；檢測(cè)

Abstract： In recent years， China’s food safety issues have become increasingly prominent， the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid， sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues， mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food， for the reference of?relevant personnel.

Keywords： high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection

近年來，隨著人們對(duì)食品安全關(guān)注度的不斷提高，食品中農(nóng)獸藥殘留問題成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。農(nóng)獸藥廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，雖然能有效提高農(nóng)作物和畜禽的產(chǎn)量，但其殘留會(huì)對(duì)人體健康造成潛在危害。高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）技術(shù)具有分辨率高、靈敏度高和準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢(shì)，已被廣泛用于食品中農(nóng)獸藥物殘留的檢測(cè)。

1 高效液相色譜技術(shù)

高效液相色譜技術(shù)是一種基于溶液流動(dòng)相和固定相之間的相互作用原理，通過樣品溶液在固定相上的分配與再分配實(shí)現(xiàn)分離和檢測(cè)的方法[1]。其具有分析時(shí)間短、分離性能好、重現(xiàn)性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，相對(duì)于傳統(tǒng)的液相色譜方法，高效液相色譜柱直徑在2～6 mm，顆粒直徑在10 mm以下，采用高壓輸運(yùn)的流動(dòng)相，不但可以實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)，而且可以大大縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間[2]。通過HPLC技術(shù)可以對(duì)樣品中的目標(biāo)化合物進(jìn)行分離、檢測(cè)，有效分析食品中的農(nóng)獸藥殘留物。與傳統(tǒng)的氣相色譜法相比，HPLC方法具有選擇性高、操作簡(jiǎn)單、流動(dòng)相變化靈活等優(yōu)點(diǎn)，在糧食、蔬果、畜禽肉類等食品檢測(cè)中具有廣闊的應(yīng)用前景[3]。

HPLC檢測(cè)食品農(nóng)獸藥殘留物的過程一般包括以下步驟。①樣品的前處理。樣品通常需要進(jìn)行預(yù)處理，如樣品的提取和凈化，以去除干擾物[4]。②色譜柱的選擇。根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)和分析要求，選擇適當(dāng)?shù)纳V柱，常用的有反相色譜柱、離子交換柱等。③流動(dòng)相的選擇。根據(jù)目標(biāo)化合物的特性，選擇合適的流動(dòng)相，并進(jìn)行流動(dòng)相配制。④樣品上機(jī)。將經(jīng)過前處理的樣品注入色譜儀中進(jìn)行分析。⑤分離和檢測(cè)。通過控制流動(dòng)相的流速和梯度，目標(biāo)化合物會(huì)在色譜柱中分離出來，并通過檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)和定量。⑥數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析。對(duì)檢測(cè)到的信號(hào)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到目標(biāo)化合物的定量結(jié)果，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析[5]。

2 高效液相色譜法在農(nóng)藥獸藥殘留分析中的應(yīng)用

2.1 高效液相色譜法在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用

2.1.1 有機(jī)磷農(nóng)藥

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，有機(jī)磷農(nóng)藥應(yīng)用廣泛，如敵百蟲和敵敵畏。有機(jī)磷農(nóng)藥是一種乙酰膽堿抑制劑，因高效、廉價(jià)等特點(diǎn)而受到農(nóng)民的青睞，作用機(jī)制主要是對(duì)害蟲膽堿酯酶活性的抑制[6]。有機(jī)磷農(nóng)藥暴露于環(huán)境中可導(dǎo)致中毒，其過量使用對(duì)人、畜、環(huán)境等都有很大的危害。因此，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)尤為重要，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是目前廣泛采用的一種檢測(cè)方法。郭愛靜等[7]用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）測(cè)定葡萄酒中4種不同類型的有機(jī)磷農(nóng)藥，莎稗磷、抑草磷、哌草磷和甲基胺草磷的回收率均在69.3%～99.2%，5個(gè)樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3%～8.1%，顯示出高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)葡萄糖進(jìn)行快速、準(zhǔn)確測(cè)定的優(yōu)越性。鐘冬蓮等[8]采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)8種有機(jī)磷殺蟲劑在鐵皮石斛中的殘留量進(jìn)行了分析。采用QuEChERS預(yù)處理、Waters AtlantisT3柱層析，采用電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，通過預(yù)處理和液質(zhì)條件優(yōu)化，建立了一種具有較好重現(xiàn)性的分析方法，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～12.3%，可實(shí)現(xiàn)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的高靈敏、高靈敏、寬線性范圍（0.84～8.52 μg·kg-1）的檢測(cè)，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

2.1.2 有機(jī)氯農(nóng)藥

有機(jī)氯農(nóng)藥具有穩(wěn)定、不易分解、劇毒和生物富集的特性，可經(jīng)體內(nèi)的生物累積及食物鏈傳遞至人體內(nèi)，在肝臟、腎臟、心臟等組織中累積，并對(duì)神經(jīng)中樞產(chǎn)生興奮作用，引起慢性中毒。另外，該類殺蟲劑具有較強(qiáng)的脂溶性，易在生物體內(nèi)蓄積，會(huì)影響生物體的穩(wěn)態(tài)及調(diào)節(jié)功能，嚴(yán)重威脅人體健康及生態(tài)環(huán)境安全。因此，建立有效的定量檢測(cè)手段對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)意義重大。彭曉俊等[9]對(duì)4種有機(jī)氯殺蟲劑進(jìn)行了分析，并對(duì)其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)行探討。通過多壁碳納米管（Multi-Walled Carbon Nanotube，MWCNTs）進(jìn)行固相萃取，建立一種基于HPLC的高靈敏、高選擇性、高靈敏度的檢測(cè)方法，其溶劑用量少、回收率高（回收率為78%～104%）、穩(wěn)定性高（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%～7.6%），能快速、準(zhǔn)確地對(duì)大量樣品進(jìn)行分析。

2.1.3 氨基甲酸酯類農(nóng)藥

氨甲酸酯類農(nóng)藥具有降解速度快、殘留時(shí)間短、高效、選擇性高等優(yōu)點(diǎn)，在糧食、蔬菜、水果等農(nóng)作物中應(yīng)用廣泛。當(dāng)前對(duì)于氨基甲酸酯類農(nóng)殘的分析主要是通過液-液萃取、柱層析等進(jìn)行預(yù)處理，并通過氣相色譜或高效液相色譜法等進(jìn)行檢測(cè)。劉長武等[10]建立了一種測(cè)定蔬菜和水果中氨基甲酸酯類殺蟲劑的方法，并對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析。采用C18柱層析，以水、甲醇為流動(dòng)相，采用梯度洗脫的方法。用此法對(duì)8種氨基甲酸酯類殺蟲劑及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析，平均回收率為70%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差＜20%，可以滿足對(duì)多個(gè)農(nóng)藥殘留量同時(shí)測(cè)定的要求。

2.1.4 煙堿類農(nóng)藥

煙堿類農(nóng)藥具有殘留低、藥效持久、低毒、高效等特點(diǎn)，在水稻、蔬菜和果樹種植中應(yīng)用廣泛。吳潔珊等[11]采用HPLC-MS/MS方法測(cè)定7種新煙堿類殺蟲劑，檢出限在0.1～2.0 μg·kg-1，線性關(guān)系良好，樣品回收率在71%～117%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜1.8%，證明HPLC-MS/MS方法簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度高，能夠滿足食品中新煙堿類殺蟲劑的測(cè)定要求，保證食品的安全性。

2.2 高效液相色譜法在獸藥殘留分析中的應(yīng)用

2.2.1 氯霉素

氯霉素是一種廣譜的抗生素，可以抑制細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成，對(duì)G-、G+均有較好的抑制作用，但會(huì)對(duì)動(dòng)物的骨髓造血功能產(chǎn)生影響。彭莉等[12]利用HPLC對(duì)牛乳中的氯霉素殘留進(jìn)行了測(cè)定。試驗(yàn)中，用乙酸乙酯萃取牛乳中的殘留物，采用正己烷-氯仿（1+1，V/V）溶解法，以乙腈-0.005 mol·L-1磷酸氫二銨（18+82，V/V）作為流動(dòng)相，采用高效液相色譜紫外檢測(cè)器，于278 nm波段測(cè)定，平均回收率達(dá)94.8%。結(jié)果準(zhǔn)確度良好，變化系數(shù)低于12.0%。結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)單、回收率高、靈敏度高、可重復(fù)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適合于乳制品中氯霉素殘留量的測(cè)定。

2.2.2 四環(huán)素類

四環(huán)素是目前我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用最廣的一種抗生素，在畜牧業(yè)中廣泛使用，其在動(dòng)物源性食物中的殘留量較高?？股仡愃幬锊粌H會(huì)對(duì)人體造成不良影響，而且還會(huì)導(dǎo)致致敏劑的耐藥性。張素霞等[13]采用高效液相色譜-紫外光譜法對(duì)乳制品中的四環(huán)素進(jìn)行了測(cè)定。將試樣與C18、EDTA-2Na、草酸等粉碎后，制得半固態(tài)色譜柱，進(jìn)行淋洗，并進(jìn)行HPLC分析。測(cè)定結(jié)果的回收率為87.7%～90.2%，變異系數(shù)為2.4%～18.8%，測(cè)定下限0.02～0.05 μg·mL-1。秦燕等[14]采用HPLC方法測(cè)定了乳制品中四環(huán)素族抗生素的殘留量。用EDTA-Mcllvaine緩沖液提取樣品，離心，將上清液取到經(jīng)過預(yù)平衡的Sep-Pak Waters TMSep-Pak C18固相萃取柱中，以便純化，用10 mmol·L-1的草酸甲醇作溶劑，洗脫，在氮?dú)鉂饪s機(jī)中干燥，以0.5 mL流動(dòng)相溶解，用高效液相色譜法測(cè)定。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.05～0.10 mg·L-1，相關(guān)系數(shù)＞0.99，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤10%。呂振娥[15]利用高效液相色譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)了畜禽肉中四環(huán)素類抗生素的快速檢測(cè)，其中磷酸酯溶液+乙腈萃取技術(shù)制備的試樣檢出結(jié)果分別為0.06 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1，回收率為79%～85%，并在烏魯木齊地區(qū)一家聯(lián)營企業(yè)的雞群中進(jìn)行快速測(cè)定，結(jié)果顯示該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確率較高。

3 結(jié)語

HPLC方法具有分析速度快、靈敏度高、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，特別是可以對(duì)高沸點(diǎn)的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行有效分析，滿足對(duì)各種食品的檢測(cè)需求，為食品安全的質(zhì)量保證提供一種可靠性高的分析檢測(cè)方法。HPLC技術(shù)已成為食品農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)的重要手段。未來，相關(guān)研究人員可進(jìn)一步對(duì)該技術(shù)進(jìn)行研究和創(chuàng)新，推動(dòng)該領(lǐng)域的發(fā)展，從而提高食品安全監(jiān)管的水平。

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