呼吸道病毒抗原、抗體檢測(cè)及二者聯(lián)合檢測(cè)在呼吸道感染老年患者中的臨床應(yīng)用價(jià)值

武志芳 張剛強(qiáng) 韓春滔

（安陽(yáng)市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 安陽(yáng) 455000）

呼吸道感染是人類致病和死亡的最主要原因之一，老年患者由于基礎(chǔ)疾病較多，各個(gè)系統(tǒng)功能降低，中樞性咳嗽反射降低導(dǎo)致氣道清除能力減弱，易誘發(fā)呼吸道感染。通常引起呼吸道感染的病原菌多種多樣，包括細(xì)菌、病毒、支原體等，其中病毒是較為多見的一種病菌，由于病菌種類不同，使得治療方法及用藥不盡相同[1]。

因此，快速、準(zhǔn)確的鑒別病原微生物的種類對(duì)疾病的診斷及治療有重要的意義，同時(shí)可用于流行病學(xué)的調(diào)查及后期預(yù)防措施的制定。呼吸道病毒分離培養(yǎng)是檢測(cè)診斷病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于培養(yǎng)較困難，操作繁瑣、結(jié)果判定耗時(shí)長(zhǎng)等原因受到諸多限制，無(wú)法做到快速評(píng)估[2]。直接免疫熒光法抗原檢測(cè)作為一種簡(jiǎn)便、快速且檢測(cè)成本較低的方法而應(yīng)用廣泛，可有效診出患者病毒類型，為臨床提供流行病學(xué)和診斷依據(jù)，通過(guò)有熒光素的抗病毒抗體直接與細(xì)胞或組織中的病毒抗原反應(yīng)，耗費(fèi)時(shí)間較短，但當(dāng)體內(nèi)攜帶病毒相對(duì)較少時(shí)，敏感性會(huì)相對(duì)較低，不容易監(jiān)測(cè)到體內(nèi)病毒量少的感染者[3]。

呼吸道抗體檢測(cè)可用血清學(xué)抗體檢測(cè)，根據(jù)病毒學(xué)和血清學(xué)檢查結(jié)果對(duì)呼吸道合胞病毒進(jìn)行診斷，但分離和鑒定病毒的方法復(fù)雜、耗時(shí)，有時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性，將其同呼吸道病毒抗原檢測(cè)聯(lián)合用于該類患者可能會(huì)提高診斷價(jià)值。故我院進(jìn)行呼吸道病毒抗原、抗體檢測(cè)及二者聯(lián)合判斷呼吸道感染檢測(cè)價(jià)值的研究。結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究所納入的患者為2019 年11 月至2021年11 月期間我院收治的85 例高危呼吸道感染老年患者，其中男45 例，女40 例， 平均年齡71.42±3.01 歲；平均體重指數(shù)（Body mass index BMⅠ）19.32±1.06kg·m-2；臨床表現(xiàn)：鼻塞43 例、咳嗽42 例、發(fā)熱23 例、精神不佳45 例。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所納入的老年患者均存在鼻塞、咳嗽、發(fā)熱等不良癥狀[4]；意識(shí)清醒能夠配合本次研究；血項(xiàng)結(jié)果中白細(xì)胞指數(shù)均有所升高。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在較為嚴(yán)重的基礎(chǔ)性疾病；合并其他呼吸道疾??；免疫系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

呼吸道病毒抗原檢測(cè)：運(yùn)用直接免疫熒光法，對(duì)呼吸道中的病毒抗體的含量判斷體內(nèi)是否有病毒。標(biāo)本采集：在患者入院時(shí)，采鼻咽分泌物1-2 mL 分泌物，加入PBS 6-8 mL 的磷酸鹽緩沖液（Phosphate buffered saline，PBS）旋渦混合器中，進(jìn)行3-5 min，12000 轉(zhuǎn)離心10 min。

試劑：采用北京貝爾生物工程有限公司免疫球蛋白M（Ⅰmmunoglobulin M；ⅠgM）、免疫球蛋白G（Ⅰmmunoglobulin G；ⅠgG）抗體檢測(cè)試劑盒（武漢賽培）。判定標(biāo)準(zhǔn)：在熒光顯微鏡下呼吸道陽(yáng)性病毒細(xì)胞中，細(xì)胞核內(nèi)可觀察到綠色熒光，陰性細(xì)胞未呈現(xiàn)綠色熒光，鏡下只呈現(xiàn)紅色，若孔板內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量超過(guò)200 感染，同時(shí)胞核染色陽(yáng)性超過(guò)2%，則診斷為病毒感染，若呼吸道合胞病毒與副流感病毒為胞漿內(nèi)染色，流行性感冒病毒與腺病毒為核染色或漿內(nèi)染色。呼吸道病毒抗體檢測(cè)：通過(guò)間接免疫熒光薄片新技術(shù)對(duì)血清中病毒 ⅠgM 抗體進(jìn)行直接檢測(cè)，能夠?qū)Χ喾N下呼吸道感染常見病毒進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)。

標(biāo)本采集：采集患者空腹靜脈血2 毫升，離心取血清監(jiān)測(cè)。試劑：選擇Serodia-MycoⅡ試劑（賽樂(lè)迪亞-麥可）陽(yáng)性結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)：血清滴度升高超過(guò)正常值的4 倍，同時(shí)單份血清滴度≥1:160。

呼吸道病毒培養(yǎng)：采集患者的鼻炎分泌物，在處理后將其接種于干敏感細(xì)胞，并使用2%的胎牛血清培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)后，培養(yǎng)液為紅色則為陽(yáng)性。在患者檢查后由副高以上職稱的病理科醫(yī)師對(duì)經(jīng)呼吸道病毒的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)判。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

呼吸道病毒培養(yǎng)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，分析呼吸道病毒抗原和抗體檢測(cè)對(duì)呼吸道病毒的檢出率、兩種方式單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)與病理結(jié)果診斷的一致性以及對(duì)呼吸道病毒的診斷效能（敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率）。

敏感度=金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陽(yáng)性例數(shù)/(假陰性例數(shù)+金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陽(yáng)性例數(shù))×100%；特異度=金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陰性例數(shù)/(假陽(yáng)性例數(shù)+金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陰性例數(shù))×100%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陽(yáng)性例數(shù)/（金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100%；陰性預(yù)測(cè)值=金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陰性例數(shù)（金標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)真陰性例數(shù)/+假陰性例數(shù)）×100%；診斷準(zhǔn)確率=診斷準(zhǔn)確人數(shù)/總?cè)藬?shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)；一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

呼吸道病毒抗原、抗體檢測(cè)以及兩者聯(lián)合與病理結(jié)果診斷的一致性：Kappa值＜0.4 表示所選擇的檢測(cè)方式與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果一致性較差，0.4≤Kappa值＜0.75 表示所選擇的檢測(cè)方式與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果一致性尚可，0.75≤Kappa值≤1.0 表示所選擇的檢測(cè)方式與金標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果一致性較好。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道病毒培養(yǎng)結(jié)果對(duì)呼吸道感染的檢出率

85 例高危呼吸道感染者中，通過(guò)呼吸道病毒培養(yǎng)檢查發(fā)現(xiàn)，確診患者感染病毒為67 例，檢出率為67/85（78.82%），未感染病毒18 例，檢出率為18/85（21.18%）。

2.2 呼吸道病毒抗體檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值

呼吸道病毒抗體檢測(cè)對(duì)呼吸道病毒診斷價(jià)值與金標(biāo)準(zhǔn)一致性尚可（kappa=0.401），特異度、靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率分為44.44%（8/18）、83.58%（56/67）、84.84%（56/66）、42.11%（8/19）、75.29%（64/85），見表1。

表1 呼吸道病毒抗體檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值（例，（%））

2.3 呼吸道病毒抗原檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值

呼吸道病毒抗原檢測(cè)對(duì)呼吸道病毒診斷價(jià)值與金標(biāo)準(zhǔn)一致性尚可（kappa=0.482），特異度、靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率分為61.11%（11/18）、88.06%（59/67）、89.39%（59/66）、57.89%（11/19）、82.35%（70/85），見表2。

表2 呼吸道病毒抗原檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值（例，（%））

2.4 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值

聯(lián)合檢測(cè)對(duì)呼吸道病毒診斷價(jià)值與金標(biāo)準(zhǔn)一致性好（kappa=0.828），特異度、靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率分為88.89%（16/18）、97.01%（65/67）、95.58%（65/68）、94.11%（16/17）、94.11%（80/85），見表3。

表3 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值（例，（%））

2.5 不同診斷方法診斷效能指標(biāo)對(duì)比

聯(lián)合檢測(cè)在診斷特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率高于呼吸道病毒抗原檢測(cè)與呼吸道病毒抗體檢測(cè)（P＜0.05），三組靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值無(wú)顯著差異（P＞0.05），見表4。

表4 不同檢測(cè)方法診斷效能指標(biāo)對(duì)比（例，（%））

2.6 不同檢測(cè)方法應(yīng)用對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值

呼吸道病毒抗原檢測(cè)診斷呼吸道感染的曲線下面積為0.714，其敏感度為85.03%，特異度為73.49%，呼吸道病毒抗體檢測(cè)曲線下面積為0.753，其敏感度為79.21%，特異度為69.57%，聯(lián)合檢測(cè)的曲線下面積為0.821，其敏感度為91.30%，特異度為89.62%，聯(lián)合檢測(cè)相比較單獨(dú)檢測(cè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 不同檢測(cè)方法應(yīng)用對(duì)呼吸道感染的診斷價(jià)值

3 討論

呼吸道感染是一種常見的疾病，老年人身體機(jī)能減退且大多合并基礎(chǔ)性疾病。

因診斷失誤而延誤治療時(shí)機(jī)，為患者機(jī)體帶來(lái)較為嚴(yán)重的后果[5]。呼吸道病毒培養(yǎng)是診斷呼吸道病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，但其培養(yǎng)細(xì)胞耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，同時(shí)從分泌物中所分離的病毒在后期形成可視菌落過(guò)程較慢，無(wú)法作為臨床快速判斷的檢測(cè)方法[6]。

本研究中，聯(lián)合檢測(cè)在診斷特異度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值、診斷準(zhǔn)確率高于呼吸道病毒抗原檢測(cè)與呼吸道病毒抗體檢測(cè)，表明聯(lián)合檢測(cè)診斷價(jià)值更高。（1）呼吸道病毒抗原所運(yùn)用的直接免疫熒光法減少了間接法中二抗的非特異性反應(yīng)，有研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒(ADⅤ)、呼吸道合胞病毒(RSⅤ)等7 種病毒通過(guò)直接免疫熒光法均可在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出[8]。呼吸道病毒抗原檢測(cè)一方面能夠檢測(cè)出病毒是否存在，判斷病毒的種類，但在抗原檢測(cè)的過(guò)程中，當(dāng)體內(nèi)攜帶病毒相對(duì)較少時(shí)，敏感性會(huì)相對(duì)較低，不容易監(jiān)測(cè)到體內(nèi)病毒量少的感染者[9]。（2）在呼吸道病毒侵入后機(jī)體內(nèi)，吞噬細(xì)胞將抗原傳遞于T 細(xì)胞，T 細(xì)胞再將抗原傳遞于B 細(xì)胞，最終機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，特異性ⅠgG、ⅠgM 抗體是一類病毒感染時(shí)所出現(xiàn)的特異性抗體，當(dāng)ⅠgM 出現(xiàn)時(shí)可提示病毒感染，再次免疫應(yīng)答所產(chǎn)生的抗體為ⅠgG，主要發(fā)揮保護(hù)機(jī)體的作用，當(dāng)檢測(cè)到ⅠgG 時(shí)提示病毒感染已進(jìn)入中后期或最近出現(xiàn)過(guò)病毒感染，因此ⅠgM、ⅠgG 抗體檢測(cè)能夠作為病毒感染時(shí)期的重要證據(jù)之一，但不能作為病毒感染是否為急性期的診斷標(biāo)準(zhǔn)。一般認(rèn)為液相環(huán)境下反應(yīng)最為充分，直接免疫熒光法測(cè)抗原雖然快速但是由于受到層析的影響，可能導(dǎo)致反應(yīng)不充分，而且用人眼目測(cè)反應(yīng)條帶，對(duì)于微量病毒抗原含量的樣本，容易觀察不出來(lái)從而造成假陰性[10]。

綜上，呼吸道病毒抗原、抗體檢測(cè)均可對(duì)呼吸道感染進(jìn)行檢出，且聯(lián)合檢測(cè)診斷價(jià)值更高。本研究不足之處在于未將患者年齡和病程分組分析，今后研究將彌補(bǔ)上述不足，進(jìn)一步探討呼吸道病毒抗原、抗體檢測(cè)檢測(cè)呼吸道感染的價(jià)值。