犬馬拉色菌性皮炎的研究進(jìn)展

沈思思 陳 亮 馮萬宇 秦平偉 蘭世捷 李 丹 苗 艷 張 蕾 于辰龍 黃寶銀 王 歡 張國(guó)華 楊昊天 王 巖 張 艷 薛沾枚 劉 文 金振華 王麗坤

一、概述

馬拉色菌最初被認(rèn)為是一個(gè)單一物種，現(xiàn)在已形成了一個(gè)獨(dú)特的菌群，由18個(gè)物種組成，完全生活在溫血脊椎動(dòng)物的皮膚和黏膜里。在過去十年中，對(duì)馬拉色菌酵母菌基因組的分析表明，它們的祖先是生活在植物或土壤中，逐漸轉(zhuǎn)移到皮膚生態(tài)系統(tǒng)中。馬拉色菌于1889 年第一次在人類皮膚病中被檢測(cè)到，慢慢地從不同的溫血脊椎動(dòng)物中也檢測(cè)到馬拉色菌酵母菌，并根據(jù)最初分離出酵母菌的動(dòng)物名稱命名：山羊毛癬菌、馬毛癬菌、兔子毛癬菌、鸚鵡毛癬菌，以及最近的蝙蝠毛癬菌等。一些馬拉色菌具有廣泛的宿主范圍，而另一些則具有宿主特異性，能夠密切適應(yīng)單一物種或系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)動(dòng)物的皮膚生態(tài)系統(tǒng)。

最近，Lorch 等從美國(guó)東部和西部的9 種蝙蝠皮膚中分離出一種新的馬拉色菌。另外七個(gè)位點(diǎn)的生理特征和分子特征明確表明，所有蝙蝠馬拉色菌分離株都代表一個(gè)新的物種。除其他特征外，新物種能夠在廣泛的溫度范圍生長(zhǎng)（7～40℃），最佳生長(zhǎng)溫度為24℃。

馬拉色菌屬是脂質(zhì)依賴性的，因?yàn)椴荒軓念^合成長(zhǎng)鏈（C14 或C16）脂肪酸。不同物種之間的脂質(zhì)依賴性存在一些差異，這種差異已被用于開發(fā)特定的鑒定試驗(yàn)。過去，厚皮分枝桿菌被認(rèn)為是“親脂但不依賴脂質(zhì)”，因?yàn)樗窃搶僦形ㄒ辉谏呈掀咸烟黔傊仙L(zhǎng)的。最近，基因組測(cè)序證實(shí)，厚皮分枝桿菌與該屬的其他成員一樣缺乏脂肪酸合酶基因，但能夠獨(dú)特地利用沙氏葡萄糖瓊脂蛋白胨中的脂質(zhì)成分進(jìn)行生長(zhǎng)，因此厚皮分枝桿菌現(xiàn)在也被視為“脂質(zhì)依賴性”。

二、檢測(cè)

為了更好地了解馬拉色菌在健康皮膚和皮膚損傷情況下的狀態(tài)，在人類和動(dòng)物（尤其是犬）身上進(jìn)行了培育研究。由于使用不同的采樣程序、培養(yǎng)基和鑒定技術(shù)，研究結(jié)果各不相同。然而，基于培養(yǎng)研究清楚地表明，在健康犬和患有馬拉色菌皮炎或中耳炎的犬中，厚皮分枝桿菌是主要的皮膚酵母菌。幾名研究人員探索了馬拉色菌在不同品種的健康成年犬的不同區(qū)域定植情況，這些研究得出的結(jié)論是，在不同品種的健康犬中，口周區(qū)和指間皮膚經(jīng)常被厚皮分枝桿菌定植（高達(dá)80%），而在腋窩、腹股溝和背部的皮膚上很少檢測(cè)到（＜25%）。

基于培養(yǎng)的方法可能會(huì)遺漏馬拉色菌，而下一代測(cè)序（NGS）技術(shù)可以更好地描述動(dòng)物皮膚上發(fā)生的復(fù)雜微生物群落。Courtney 等報(bào)告說，犬的皮膚真菌生物群受到各種因素的影響，包括暴露的環(huán)境、與其他寵物接觸以及皮膚健康狀況等，馬拉色菌并不是健康犬皮膚上最豐富的真菌。此外，這些研究人員無法檢測(cè)到健康犬和過敏性犬之間馬拉色菌酵母相對(duì)豐度的顯著差異。可能是在過敏性犬中，馬拉色菌物種水平（不是厚皮分枝桿菌的數(shù)量）存在生物失調(diào)。Courtney 等人最近對(duì)這一假設(shè)進(jìn)行了研究，他們從健康、自然受影響的過敏性和實(shí)驗(yàn)致敏的過敏性犬身上采集了皮膚樣本，使用NGS 和馬拉色菌物種熒光定量實(shí)時(shí)PCR（qPCR）進(jìn)行檢測(cè)，證實(shí)球形酵母菌在健康犬皮膚上的含量最多（通過NGS），在自然過敏性皮膚（通過NGS）和過敏原誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮膚損傷（通過qPCR）中，厚皮分枝桿菌的數(shù)量最多。

最近，NGS 方法還被用于犬外耳道中的菌群研究。收集6 頭中耳炎犬和5 頭臨床健康犬的樣本。在外耳炎犬中，真菌群主要以馬拉色菌為主。與健康犬相比，中耳炎樣本中真菌的多樣性、豐富度和均勻度均顯著降低。

三、免疫反應(yīng)

馬拉色菌與犬的相互作用機(jī)制最近取得了重大進(jìn)展。馬拉色菌在皮膚上生長(zhǎng)的結(jié)果(共生或炎癥疾病)取決于酵母菌的代謝活動(dòng)(細(xì)胞壁的表達(dá)和分泌的毒力屬性)以及宿主的先天性和適應(yīng)性免疫防御反應(yīng)。與其他皮膚共生菌(特別是葡萄球菌)的相互作用也可能在決定動(dòng)物定植中發(fā)揮作用。角質(zhì)層中馬拉色菌的存在使宿主暴露于一系列化學(xué)物質(zhì)、免疫原和過敏原中，包括真菌細(xì)胞壁相關(guān)的碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，產(chǎn)生一系列刺激性代謝副產(chǎn)物。

馬拉色菌細(xì)胞壁碳水化合物被認(rèn)為是特應(yīng)性皮炎患者的IgE 結(jié)合表位，但最近的研究強(qiáng)調(diào)了它們?cè)诒凰拗魍淌杉?xì)胞識(shí)別中的重要性。C 型凝集素是通過高度保守的碳水化合物識(shí)別域以鈣依賴性方式結(jié)合碳水化合物的蛋白質(zhì)。Mincle 是一種C 型凝集素，由激活的吞噬細(xì)胞表達(dá)，可結(jié)合厚皮分枝桿菌和叢生分枝桿菌的葡糖基和甘露糖基糖脂，可選擇性識(shí)別馬拉色菌，但不能識(shí)別其他真菌。最近報(bào)道了從厚皮分枝桿菌中合成的復(fù)合β-1,2-甘露酰氧基甘露醇糖脂，這是人類Mincle 信號(hào)傳導(dǎo)的有效激動(dòng)劑；這些研究結(jié)果可能與進(jìn)一步了解抗真菌免疫有關(guān)。雖然犬可能存在類似的機(jī)制，但需要進(jìn)行物種特異性研究來驗(yàn)證這一點(diǎn)。

厚皮分枝桿菌能夠激活芳香烴受體（AhR），這是一種具有多效性效應(yīng)的核受體和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器，包括下調(diào)免疫刺激、修飾黑色素生成和表皮細(xì)胞功能，以及拮抗微生物抑制的作用等。在80 株來自犬中耳炎的厚皮分枝桿菌的研究中未檢測(cè)到吲哚產(chǎn)生，厚皮分枝桿菌激活A(yù)hR 可能與吲哚以外的代謝物釋放的化合物有關(guān)。

皮膚上的馬拉色菌無論正常數(shù)量還是過量都可以激活犬的皮膚免疫系統(tǒng)。馬拉色菌抗原可以刺激先天性抗體、細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和觸發(fā)超敏反應(yīng)。在生物體過度生長(zhǎng)的動(dòng)物中，或在易過敏的個(gè)體中，隨后的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致皮炎和瘙癢等臨床癥狀。人類特應(yīng)性皮炎中馬拉色菌或葡萄球菌的IgE 水平升高與皮膚嚴(yán)重性指數(shù)相關(guān)，為了評(píng)估犬是否存在類似的關(guān)聯(lián)，Khantavee 等人研究了針對(duì)厚皮分枝桿菌和假絲酵母菌的過敏原特異性IgE、IgG1和IgG2水平與總IgG 水平，并將其與犬特應(yīng)性皮炎的病變嚴(yán)重程度相關(guān)聯(lián)，報(bào)告表明，在所有年齡的特應(yīng)性犬中，針對(duì)酵母菌和細(xì)菌的特異性IgE 和總IgG 顯著增加。但是，兩種微生物類型的臨床評(píng)分與任何特定免疫球蛋白水平之間均沒有發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)系。

四、誘發(fā)因素

理想情況下，馬拉色菌共生酵母菌沒有臨床癥狀，并在表皮角質(zhì)層和毛囊漏斗部?jī)?nèi)占據(jù)其生態(tài)位，受宿主皮膚和外部環(huán)境的影響。通常情況下，與宿主免疫系統(tǒng)的持續(xù)相互作用將維持較低數(shù)量的酵母菌，而不會(huì)產(chǎn)生臨床上明顯的炎癥反應(yīng)。眾所周知，犬馬拉色菌皮炎與并發(fā)癥有關(guān)，這些疾病可能與皮膚免疫功能改變和皮膚表面化學(xué)劑、微氣候條件的變化有關(guān)。因此，在犬類中，過敏性疾?。ㄓ绕涫侨貞?yīng)性皮炎）、角質(zhì)化缺陷和內(nèi)分泌疾病通常被認(rèn)為是潛在因素，必須作為治療方案的一部分。皮膚皺褶通常是促進(jìn)馬拉色菌和細(xì)菌過度生長(zhǎng)的重要因素，這反映了當(dāng)?shù)氐臍夂虿町?，包括空氣流?dòng)減少、皮膚溫度和濕度增加、分泌物殘留和表面摩擦創(chuàng)傷等。雖然沒有對(duì)犬進(jìn)行專門研究，但人們也普遍認(rèn)為馬拉色菌皮炎在熱帶氣候中、溫暖潮濕的月份和溫帶緯度地區(qū)最常見，這反映了外部環(huán)境對(duì)皮膚微生物群的影響。這一因素在醫(yī)學(xué)中得到了充分證明，溫暖的熱帶氣候有利于高陽性培養(yǎng)率和更大的物種多樣性。

五、臨床癥狀

通常患病處皮膚表現(xiàn)為紅斑，有油膩的棕黑色物質(zhì)覆蓋在毛發(fā)下。主要特征是瘙癢，從輕微到嚴(yán)重不等。常見的是并發(fā)色素過度沉積、苔蘚化、異味、外傷性脫發(fā)和中耳炎。在中耳炎患者中，耳道分泌物通常為耵聹，很少有化膿性分泌物，炎癥通常延伸至耳郭。馬拉色菌甲溝炎病例表現(xiàn)為爪褶紅斑和腫脹、蠟狀或硬殼狀棕色滲出物、紅棕色爪染色，并可能與有毛皮膚的足皮炎共存。犬偶爾出現(xiàn)嚴(yán)重的面部瘙癢。

馬拉色菌皮炎的癥狀可能與犬特應(yīng)性皮炎相似或更為復(fù)雜。并發(fā)疾病的特征最初很明顯，但一旦繼發(fā)的馬拉色菌感染被治愈，它們通常會(huì)有很好的轉(zhuǎn)歸。馬拉色菌皮炎可能表現(xiàn)為過敏性皮膚病、特發(fā)性面部皮炎、痤瘡和嚴(yán)重的內(nèi)科疾病。盡管進(jìn)行了抗真菌治療，但殘留的皮膚病通常仍然存在。

六、診斷與治療

診斷方法有一般檢查、血常規(guī)檢測(cè)和涂片鏡檢。一般檢查通過觀察犬的精神狀態(tài)，體溫測(cè)量，觀察耳部有無皮屑、分泌物、異臭和瘙癢等癥狀，皮膚是否有紅斑、瘙癢和被毛脫落來進(jìn)行判斷；血常規(guī)陽性判斷結(jié)果是紅細(xì)胞數(shù)量減少、白細(xì)胞增多及單核細(xì)胞增多；鏡檢可見大量卵圓形、花生樣芽生酵母菌。通過以上即可確診馬拉色菌皮膚病。

治療馬拉色菌皮膚病，將犬患部剃毛，用消毒棉球擦拭，每日三次。皮下注射恩諾沙星，用含有酮康唑的洗發(fā)香波清洗患部，氯己定進(jìn)行藥浴治療?？诜燎颠?、氯苯那敏和復(fù)合維生素B。

馬拉色菌是條件致病菌，多發(fā)在梅雨季節(jié)和動(dòng)物機(jī)體免疫力下降時(shí)候，因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)犬的飼養(yǎng)管理和對(duì)皮膚病的預(yù)防，雖然現(xiàn)在有有效的方案去治愈，但仍需多加注意，防止復(fù)發(fā)。