靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法在校正EDTA依賴性假性血小板減少癥血小板計(jì)數(shù)中的應(yīng)用研究

袁磊　黃平香　王煒艷　潘錢　嚴(yán)桃群

【摘要】? 目的? ? 探討靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法在校正乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）的血小板（PLT）計(jì)數(shù)中的應(yīng)用效果。方法? ? 選擇2021年7月—2022年5月分宜縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科根據(jù)實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)篩選出確診的假性血小板減少癥患者（PTCP）30例作為研究對(duì)象，采集入組患者血氧標(biāo)本，并分別采用EDTA法、靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法在不同時(shí)間段測(cè)定PLT計(jì)數(shù)，對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果? ? EDTA法檢測(cè)PLT水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)（P<0.05），而靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法隨著時(shí)間的延長(zhǎng)PLT測(cè)定值變化不明顯（P>0.05），靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法檢測(cè)1 h、2 h及3 h的PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。兩種校正方法PLT差值不同時(shí)間點(diǎn)存在明顯差異，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)（P<0.05）。通過(guò)外周血涂片鏡檢，所有靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法測(cè)定的全血標(biāo)本隨著時(shí)間推移均發(fā)生血小板聚集，但聚集程度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)變化不明顯。結(jié)論? ? 與EDTA法檢測(cè)結(jié)果相比，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法獲得的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果在3 h內(nèi)穩(wěn)定性相對(duì)較高，可用于EDTA-PTCP血小板計(jì)數(shù)測(cè)定中的校正，具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，該檢查方法對(duì)檢驗(yàn)員專業(yè)技能要求較低，可在基層醫(yī)院推廣。

【關(guān)鍵詞】? 乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥； 血小板計(jì)數(shù)； 真空采血管預(yù)稀釋法； 應(yīng)用分析

中圖分類號(hào)：R446.11+2? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1721（2023）16-0089-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.16.030

乙二胺四乙酸（EDTA）是臨床上血液分析儀測(cè)定過(guò)程中首選的抗凝劑，不會(huì)對(duì)細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)目和大小等產(chǎn)生影響[1]。但是，該抗凝劑實(shí)際使用過(guò)程中亦存在少許病例在檢測(cè)過(guò)程誘導(dǎo)血小板在體外發(fā)生聚集，導(dǎo)致血液分析儀測(cè)定的血小板計(jì)數(shù)低于真實(shí)值的現(xiàn)象[2]。EDTA依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）臨床上雖然發(fā)生率較低，但是會(huì)增加臨床診斷難度，造成血小板輸注過(guò)度，影響患者身心健康[3]。因此，積極采取有效的措施快速糾正EDTA-PTCP，對(duì)提高臨床輸血安全性具有重要的意義。目前，臨床上校正EDTA-PTCP方法較多，包括[4]：稀釋模式法、微量離心法、更換抗凝劑法等；但實(shí)際使用過(guò)程中存在諸多不便，部分方法校正不徹底，導(dǎo)致臨床使用受到限制。真空采血管預(yù)稀釋法是一種新型的校正方法，可解決原稀釋模式上末梢血不方便、標(biāo)本不可靠及操作環(huán)節(jié)多等弊端，具有較強(qiáng)的可操作性[5]。本研究旨在探討靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法在校正EDTA-PTCP患者血小板（PLT）計(jì)數(shù)中的應(yīng)用效果，報(bào)道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 臨床資料? ? 選擇2021年7月—2022年5月分宜縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科根據(jù)實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)篩選出確診的PTCP患者30例作為研究對(duì)象，男18例，女12例，年齡18～86歲，平均年齡（59.18±7.43）歲；體重指數(shù)（BMI）18～29 kg/m²，平均（22.67±4.23）kg/m²；合并癥：高血壓3例，糖尿病2例，高脂血癥4例。本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2? ? 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)? ? 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合假性血小板減少癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢確診；（2）血常規(guī)儀器結(jié)果顯示血小板減少，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝后血小板聚集；（3）病情穩(wěn)定，未見(jiàn)皮膚紫癜、鼻出血及牙齦出血等癥狀。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）二次抽血監(jiān)測(cè)后血小板聚集現(xiàn)象得到糾正者（由于抽血不當(dāng)引起）；（2）血涂片檢查可見(jiàn)小紅細(xì)胞、大血小板或伴有紅細(xì)胞碎片者（血小板計(jì)數(shù)原因非單純抗凝劑引起）；（3）檢查前行放化療、生物免疫治療者或?qū)Ρ狙芯拷Y(jié)果可能產(chǎn)生影響者。

1.3? ? 方法? ? 采集入組患者血氧標(biāo)本，并分別采用EDTA法、靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法在不同時(shí)間段測(cè)定PLT計(jì)數(shù)，具體方法如下。（1）儀器及設(shè)備。Olympus血液細(xì)胞分析儀，購(gòu)自于日本奧林巴斯公司（采用廠家配套試劑）；DETA-K2抗凝管，購(gòu)自于江西科倫醫(yī)療器械有限公司；雙目顯微鏡，型號(hào)：BX41，購(gòu)自于日本奧林巴斯公司。（2）實(shí)驗(yàn)方法：①給予患者胳膊上綁上止血帶，進(jìn)一步確定靜脈血管的位置，對(duì)穿刺血管進(jìn)行常規(guī)消毒，采用預(yù)稀釋的真空采血管完成血液的采集。血液標(biāo)本采集過(guò)程中，一端連接患者，另一端連接真空采集管，達(dá)到預(yù)采血量后，迅速拔掉插在管塞上的采血針頭，并將采集的血液迅速顛倒5～8次，充分混合均勻后，獲得稀釋后的血液標(biāo)本。②借助全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，對(duì)EDTA稀釋后的血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，從而獲得血小板數(shù)量的測(cè)定值，測(cè)定值×血量體積校正因子U，從而最終獲得標(biāo)本的血小板數(shù)目的真實(shí)值。③具體檢測(cè)方法。常規(guī)采用EDTA-K2抗凝管，對(duì)患者真空采集靜脈血2 mL，倒置放正混合8次后，采用Sysmex全自動(dòng)血液分析儀，型號(hào)：xi-500i，在全血模式下完成PLT水平測(cè)定。同時(shí)，采用預(yù)稀釋真空采集管采集靜脈血1 mL，充分混合后，借助全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀BC-5300在全血模式下完成PLT水平測(cè)定，分別記錄患者1，2，3 h的PLT水平，并對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。對(duì)每份標(biāo)本完成涂片染色，并觀察血小板聚集情況。上述操作均嚴(yán)格遵循儀器和試劑盒相關(guān)說(shuō)明書完成。

1.4? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 使用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以x±s表示，行t檢驗(yàn)和方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 不同校正方法不同時(shí)間點(diǎn)PLT水平比較? ? EDTA法檢測(cè)PLT水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)（P<0.05）；而靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法隨著時(shí)間的延長(zhǎng)PLT測(cè)定值變化不明顯（P>0.05）；靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法檢測(cè)1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2? ? 不同時(shí)間點(diǎn)兩種校正方法PLT計(jì)數(shù)差值比較? ? 兩種校正方法PLT差值不同時(shí)間點(diǎn)存在明顯差異，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3? ? 外周血涂片鏡檢結(jié)果? ? 通過(guò)外周血涂片鏡檢顯示，所有靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法測(cè)定的全血標(biāo)本隨著時(shí)間推移均發(fā)生血小板聚集，但聚集程度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)變化不明顯，見(jiàn)圖1。

3? ? 討論

臨床血液常規(guī)檢查內(nèi)容相對(duì)較多，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等，常用儀器為全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀，檢測(cè)過(guò)程中使用的抗凝劑為國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦的EDTA，雖然能滿足臨床檢測(cè)需要，但是該抗凝劑使用時(shí)容易引起血小板聚集，導(dǎo)致血液分析過(guò)程中出現(xiàn)假性血小板減少現(xiàn)象（即EDTA-PTCP）。趙萌等[7]研究表明：血小板數(shù)量檢測(cè)是臨床實(shí)驗(yàn)室常用的診斷指標(biāo)，對(duì)于危重癥患者病情監(jiān)測(cè)、治療具有重要的意義。假性血小板減少如不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)，將會(huì)增加臨床誤漏診率，嚴(yán)重時(shí)可引起醫(yī)療糾紛。因此，臨床血液檢查過(guò)程中積極采取相應(yīng)的措施校正，對(duì)提高檢查準(zhǔn)確度有重要意義。

桑海強(qiáng)等[8]研究表明：PTCP在臨床上發(fā)生率較低，且多數(shù)患者是由于抗凝劑引起的血小板測(cè)定結(jié)果異常，加強(qiáng)血小板值檢測(cè)校正，對(duì)指導(dǎo)臨床診療具有重要意義。本研究中，EDTA法檢測(cè)PLT水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)（P<0.05），而靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法隨著時(shí)間的延長(zhǎng)PLT測(cè)定值變化不明顯（P>0.05），靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法檢測(cè)1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。由此可見(jiàn)，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法檢測(cè)PLT計(jì)數(shù)穩(wěn)定性較高，而EDTA法檢測(cè)時(shí)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)將會(huì)造成PLT測(cè)定水平呈下降趨勢(shì)，影響診斷效果。靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法臨床使用時(shí)能彌補(bǔ)常規(guī)采血時(shí)存在的不足，同時(shí)，該校正方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單，能實(shí)現(xiàn)靜脈全血的稀釋，亦可借助刻度線防止抗凝劑暴露血小板膜上糖蛋白中的自身抗體[9]。本研究中，EDTA法與靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法的PLT差值不同時(shí)間點(diǎn)存在明顯差異，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)（P<0.05）。由此可見(jiàn)，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法校正穩(wěn)定性較強(qiáng)，對(duì)于血小板具有良好的保護(hù)作用，能避免遮蔽抗原的暴露，通過(guò)1∶10固定比例，有助于降低抗體滴度，從而能拮抗抗凝劑誘發(fā)的血小板聚集。但是，無(wú)論何種校正方法，隨著靜脈血采集時(shí)間的延長(zhǎng)，均會(huì)對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。因此，血液標(biāo)本采集后應(yīng)盡早完成PLT檢測(cè)，避免長(zhǎng)時(shí)間放置而影響檢測(cè)結(jié)果。

靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法能降低真空采血管中凝血因子的濃度，避免凝血因子持續(xù)增加引起的靜脈血液標(biāo)本稀釋，從而影響測(cè)定結(jié)果；該方法能抑制凝血因子產(chǎn)生的鏈?zhǔn)交钚苑磻?yīng)，避免采集的血液標(biāo)本在真空管中凝固[10]。同時(shí)，PLT檢測(cè)時(shí)通過(guò)采血管上的精密刻度，能提高靜脈采血量的準(zhǔn)確性[11]。本研究中，通過(guò)外周血涂片鏡檢，所有靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法測(cè)定的全血標(biāo)本隨著時(shí)間推移均發(fā)生血小板聚集，但聚集程度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)變化不明顯。由此可見(jiàn)，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法測(cè)定血小板計(jì)數(shù)具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。Zhang H等[12]研究表明：靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法校正EDTA-PTCP血小板計(jì)數(shù)時(shí)，患者一次血液采集即可完成對(duì)標(biāo)本的保存、離心、檢測(cè)等步驟，能避免多次、重復(fù)采集。同時(shí)，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法具有操作簡(jiǎn)單、可靠等優(yōu)點(diǎn)，能保證檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性、合理性，且該稀釋法對(duì)儀器及設(shè)備要求較低，適合基層醫(yī)院使用。

綜上所述，與EDTA法檢測(cè)結(jié)果相比，靜脈血真空采血管預(yù)稀釋法測(cè)定的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果在3 h內(nèi)穩(wěn)定性相對(duì)較高，可用于EDTA-PTCP血小板計(jì)數(shù)測(cè)定中的校正，具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，且該檢查方法對(duì)檢驗(yàn)員專業(yè)技能要求較低，適合在基層醫(yī)院推廣。

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（收稿日期：2023-03-16）