上皮性卵巢癌組織POSTN、COL11A1表達(dá)變化及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

侯海俠，劉忠杰，賈衛(wèi)靜，杜素果，李桂芬

衡水市人民醫(yī)院婦科，河北衡水053000

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，全球每年新發(fā)病例約24萬例、死亡病例達(dá)到15萬例［1］。上皮性卵巢癌（EOC）是卵巢癌最常見的病理類型，占90%以上。EOC起病隱匿，早期無明顯癥狀，大多數(shù)患者就診時已為中晚期，錯過了最佳治療時機(jī)，預(yù)后較差［2］。骨膜蛋白（POSTN）是一種分泌型細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，與整合素結(jié)合能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞的黏附和遷移，從而參與組織發(fā)育和骨再生、修復(fù)等生理過程［3］。有研究發(fā)現(xiàn)，POSTN能夠通過與腫瘤細(xì)胞表面的整合素受體結(jié)合，促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子C表達(dá)和淋巴管生成，繼而引起宮頸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移［4］。Ⅺ型膠原α1（COL11A1）蛋白是一種纖維狀膠原蛋白，也是細(xì)胞外基質(zhì)最重要的組成成分。近年研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌［5］、子宮內(nèi)膜癌［6］中均存在COL11A1高表達(dá)現(xiàn)象，并且其高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。但目前POSTN、COL11A1表達(dá)與EOC的關(guān)系尚不完全清楚。本研究探討了EOC組織POSTN、COL11A1表達(dá)變化及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1.料與方法

1.1.床資料 選擇2018年1月—2019年12月衡水市人民醫(yī)院婦科收治的EOC患者122例。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)檢查明確診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合EOC診斷標(biāo)準(zhǔn)；②初診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③接受外科手術(shù)治療；④臨床病理資料和隨訪資料完整；⑤年齡＞18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并子宮內(nèi)膜異位癥或多囊卵巢綜合征者；②合并其他部位惡性腫瘤者；③合并嚴(yán)重感染性疾病或自身免疫性疾病者；④妊娠期或哺乳期婦女。患者年齡30～78（56.67 ± 6.34）歲，其中≤60歲64例、＞60歲58例；病理類型：漿液性74例，非漿液性48例；腫瘤最大徑：＞3 cm 74例，≤3 cm 48例；FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期76例，Ⅲ期46例；組織分化程度：高中分化54例，低分化68例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例。同期另選在衡水市人民醫(yī)院婦科接受輸卵管切除術(shù)的輸卵管妊娠患者60例，年齡28～79（56.05 ± 6.11）歲，均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)檢查證實為正常輸卵管上皮組織，并排除子宮內(nèi)膜異位癥、多囊卵巢綜合征、嚴(yán)重感染性疾病、自身免疫性疾病及其他部位惡性腫瘤者。兩組年齡具有可比性。本研究經(jīng)衡水市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號：2018-0214）。所有研究對象或其家屬知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2.OSTN、COL11A1蛋白表達(dá)檢測 采用免疫組化法。取術(shù)中獲取的EOC組織和正常輸卵管上皮組織，10%中性甲醛固定16 h，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。在65 ℃烤箱中烤片2 h，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，在檸檬酸鹽抗原修復(fù)緩沖液中熱修復(fù)，3% H2O2去除內(nèi)源性過氧化物酶。5%正常山羊血清封閉2 h，分別滴加POSTN、COL11A1兔單克隆抗體，4 ℃孵育過夜。次日，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，室溫孵育2 h。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇分化，自來水沖洗返藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下拍照觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知POSTN、COL11A1蛋白陽性表達(dá)的宮頸癌組織切片作為陽性對照。

采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)師獨立閱片，結(jié)果不一致時協(xié)商解決。POSTN、COL11A1蛋白陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜或細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。染色強度評分：以陽性細(xì)胞呈色反應(yīng)為準(zhǔn)，無色為0分、淺棕黃色為1分、深棕黃色為2分。隨機(jī)選取5個200倍視野，計數(shù)每視野陽性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)，計算陽性細(xì)胞比例。陽性細(xì)胞比例評分：無為0分，＜25%為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分。根據(jù)染色強度和陽性細(xì)胞比例半定量分析，染色強度評分與陽性細(xì)胞比例評分乘積≥2為陽性。

1.3.訪 所有EOC患者出院后采取電話或門診復(fù)查形式定期隨訪3年，第1年每個月隨訪1次，第2年每3個月隨訪1次，第3年每3～6個月隨訪1次。隨訪截至2023年1月1日，隨訪終點為患者死亡或至隨訪截至日期，記錄患者生存時間。

1.4.計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.果

2.1.OC組織與正常輸卵管上皮組織POSTN、COL11A1蛋白表達(dá)比較 EOC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達(dá)率分別為69.67%（85/122）、67.21%（82/122），正常輸卵管上皮組織分別為26.67%（16/60）、30.00%（18/60）。EOC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達(dá)率均高于正常輸卵管上皮組織（χ2分別為30.118、22.499，P均＜0.01）。

2.2 EOC組織POSTN、COL11A1蛋白表達(dá)的關(guān)系 Spearman秩相關(guān)分析顯示，EOC組織POSTN蛋白表達(dá)與COL11A1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.722，P＜0.05）。

2.3.OC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

表1.OC組織POSTN、COL11A1蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.4.OC組織POSTN、COL11A1蛋白表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 122例EOC患者隨訪期間死亡41例，失訪3例，3年總體生存率為65.55%（78/119）。POSTN蛋白陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者3年累積生存率分別為65.60%、77.30%，二者生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Log-rankχ2=14.291，P＜0.05）。COL11A1蛋白陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者3年累積生存率分別為68.80%、79.60%，二者生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Log-rankχ2=13.870，P＜0.05）。見圖1。

圖1.OC組織不同POSTN、COL11A1蛋白表達(dá)者的生存曲線

3.論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，在我國每年新發(fā)病例達(dá)5.2萬例、死亡病例達(dá)2.3萬例［7］。EOC是卵巢癌最常見的病理類型，占90%以上。由于卵巢位于盆腔深部，卵巢癌早期無特異性癥狀，大多數(shù)患者就診時已為中晚期，錯過了最佳治療時機(jī)，預(yù)后較差［2］。近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)進(jìn)步，EOC無論是在外科手術(shù)治療方案上還是在藥物治療方案上都在不斷優(yōu)化，使患者預(yù)后得到明顯提升。但仍有部分患者出現(xiàn)腫瘤耐藥或治療抵抗，術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后不良［2］。目前，臨床上主要根據(jù)FIGO分期、組織分化程度等臨床病理特征評估EOC患者預(yù)后，尚無有效評估EOC預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。因此，深入研究EOC的發(fā)病機(jī)制，尋找能夠預(yù)測EOC治療結(jié)局的腫瘤標(biāo)志物，具有重要的臨床意義。

POSTN基因定位于人染色體13q13.3，其編碼蛋白是一種可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，能夠與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合，從而參與炎癥、心血管疾病、腫瘤等病理生理過程［3］。近年研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織POSTN高表達(dá)，其高表達(dá)能夠促進(jìn)淋巴管生成以及腫瘤細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［4］。鑒于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是EOC較為常見的病理特征之一［8］。我們推測POSTN在EOC的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EOC組織POSTN蛋白陽性表達(dá)率顯著高于正常輸卵管上皮組織；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EOC組織POSTN蛋白陽性表達(dá)率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EOC組織。提示POSTN能夠參與EOC的發(fā)生、發(fā)展。在EOC組織中POSTN表達(dá)上調(diào)可能與轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常有關(guān)。有研究報道，EOC組織轉(zhuǎn)錄因子TWIST1表達(dá)明顯升高，TWIST1能夠通過與POSTN基因啟動子結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上促進(jìn)POSTN表達(dá)［9］。LIN等［10］研究報道，POSTN還能通過自分泌作用與EOC細(xì)胞表面的整合素β受體結(jié)合，激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶和核因子κB，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲。此外，POSTN還能趨化THP-1細(xì)胞，促進(jìn)其向M2型巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展［10］。本研究結(jié)果顯示，POSTN蛋白陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者3年累積生存率分別為65.60%、77.30%，二者生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示POSTN蛋白陽性表達(dá)的EOC患者預(yù)后相對較差。究其原因，POSTN蛋白表達(dá)升高能夠促進(jìn)EOC進(jìn)展和耐藥性形成，導(dǎo)致患者預(yù)后不良。有學(xué)者在原代漿液性卵巢癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)，對阿霉素和甲氨蝶呤耐藥的腫瘤細(xì)胞POSTN蛋白表達(dá)明顯升高，敲低POSTN后，腫瘤細(xì)胞恢復(fù)對化療藥物的敏感性［11］。因此，POSTN有可能成為評估EOC預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，并且以POSTN為靶點的治療有可能成為EOC新的治療策略。

COL11A1基因定位于人染色體1p21.1，其編碼蛋白屬于膠原蛋白家族成員，能夠參與構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)骨架及骨形成和發(fā)育等生物學(xué)過程。研究表明，在卵巢癌腫瘤微環(huán)境中COL11A1蛋白陽性的腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞浸潤增加并能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，導(dǎo)致腫瘤化療抵抗形成，與患者預(yù)后不良有關(guān)［12］。本研究結(jié)果顯示，EOC組織COL11A1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于正常輸卵管上皮組織；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EOC組織COL11A1蛋白陽性表達(dá)率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EOC組織。提示COL11A1能夠參與EOC的發(fā)生、發(fā)展。EOC組織COL11A1表達(dá)升高可能與miRNA表達(dá)調(diào)控有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-335能夠結(jié)合COL11A1 mRNA的3'非編碼區(qū)，降低COL11A1 mRNA穩(wěn)定性，抑制COL11A1蛋白表達(dá)，而在卵巢癌細(xì)胞中miR-335表達(dá)顯著降低，導(dǎo)致COL11A1蛋白表達(dá)升高［13］。有研究證實，在EOC中COL11A1能夠激活細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶，誘導(dǎo)p65易位進(jìn)入細(xì)胞核，p65與胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2啟動子結(jié)合，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長因子β表達(dá)，促進(jìn)EOC細(xì)胞增殖和侵襲［14］。本研究結(jié)果顯示，COL11A1蛋白陽性表達(dá)者與陰性表達(dá)者3年累積生存率分別為68.80%、79.60%，二者生存曲線比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示COL11A1蛋白陽性表達(dá)的EOC患者預(yù)后相對較差。究其原因，一方面是COL11A1蛋白表達(dá)升高能夠通過促進(jìn)EOC細(xì)胞TWIST1表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，繼而導(dǎo)致腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移［15］；另一方面，COL11A1蛋白表達(dá)升高能夠增強EOC細(xì)胞對化療藥物的耐藥性，降低化療效果，導(dǎo)致患者預(yù)后不良［16］。因此，COL11A1有可能成為評估EOC預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。

本研究Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，EOC組織POSTN蛋白表達(dá)與COL11A1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，提示二者在EOC的發(fā)生、發(fā)展中可能存在協(xié)同作用。PARK等［17］研究表明，在胰腺癌腫瘤微環(huán)境中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞能夠分泌POSTN和酸性分泌蛋白，促進(jìn)基質(zhì)結(jié)締組織COL11A1沉積，導(dǎo)致胰腺癌進(jìn)展。但目前二者在EOC中的協(xié)同作用機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，EOC組織POSTN、COL11A1高表達(dá)，二者表達(dá)變化與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)。但本研究尚存在一定不足之處，如樣本量較小、未對不同病理類型的EOC分層分析，有待于今后進(jìn)一步研究。