硫色曲霉的生長(zhǎng)特性及其產(chǎn)赭曲霉毒素特性研究

孟月麗 管 樂 俞 蓓 王 龑

（浙江工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院， 浙江 杭州 310014）

硫色曲霉是在土壤、谷物殼上分離發(fā)現(xiàn)并在谷物貯藏期生長(zhǎng)繁殖產(chǎn)生赭曲霉毒素的一種絲狀真菌。赭曲霉毒素是由曲霉和青霉產(chǎn)生的一種真菌毒素，是各種食品和飼料中常見的生物污染物［1］。赭曲霉毒素包括7種結(jié)構(gòu)類似的化合物，其中赭曲霉毒素A（ochratoxin A，OTA）是毒性最大、污染最嚴(yán)重的化合物［2-3］。OTA 主要污染糧谷類［4］，也可能污染咖啡豆［5-6］、蘋果［7］、可可［8］、巧克力［9］、堅(jiān)果［10］、葡萄［11］、香腸［12］等。OTA 的產(chǎn)生菌有許多種［13］，其熔點(diǎn)為169 ℃，具有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，很難輕易去除，即使加熱至125 ℃也不會(huì)對(duì)OTA造成明顯破壞。這表明大多數(shù)食品加工條件不能去除OTA［14］，因此OTA預(yù)防難度非常大。

OTA廣泛存在于環(huán)境中，可以通過食物、皮膚和呼吸吸入進(jìn)入人體［15］，進(jìn)入人體后OTA 可引起腸道消化不良癥，包括增加腸道滲透性和細(xì)菌轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致肝細(xì)胞退化，腸道和淋巴組織壞死［16］。有研究發(fā)現(xiàn)，OTA 可誘發(fā)腎損傷、DNA 損傷反應(yīng)和腎細(xì)胞細(xì)胞循環(huán)阻斷，進(jìn)而導(dǎo)致多種病理［17］。OTA 還具有誘發(fā)致畸、胚胎毒性、致癌性、肝毒性、免疫毒性和腎毒性等有毒特性［18］，因此其受到國(guó)家和國(guó)際一級(jí)的法律監(jiān)管［13］。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將OTA 歸類為可能的人類致癌物質(zhì)［19］。歐盟規(guī)定未加工的糧谷物中OTA 的最高允許量為5 μg·kg-1，其他可直接食用加工制品的最高允許量為3 μg·kg-1。嬰幼兒及有特殊醫(yī)療目的的食物中OTA 含量不超過0.5 μg·kg-1，葡萄酒中OTA 含量不超過2 μg·L-1。我國(guó)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《GB 2761-2017 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》［20］規(guī)定谷物、豆類及其制品中OTA 的最高允許量為5 μg·kg-1。鑒于OTA 的毒性和污染性，如何有效控制及預(yù)防其產(chǎn)生尤為關(guān)鍵，而OTA 的產(chǎn)生與所處環(huán)境和培養(yǎng)條件有很大關(guān)系［21-23］。因此，研究環(huán)境因子對(duì)OTA 生長(zhǎng)和毒素產(chǎn)生的影響，對(duì)控制OTA的產(chǎn)生具有重要意義。

赭曲霉毒素可由30多種曲霉和青霉產(chǎn)生［13，24］，近年來報(bào)道的有赭曲霉［25］、硫色曲霉［26］、蜂蜜曲霉、黑曲霉、韋氏曲霉［27］以及炭黑曲霉［28］等。劉菲等［29］研究了不同培養(yǎng)基對(duì)赭曲霉生長(zhǎng)及產(chǎn)毒能力的影響，通過比較不同培養(yǎng)基上赭曲霉產(chǎn)毒和生長(zhǎng)的差異性，篩選到赭曲霉生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的最佳條件。陳倫佳等［30］研究了不同條件對(duì)炭黑曲霉產(chǎn)赭曲霉毒素A 能力的影響，通過單因素分析和響應(yīng)面優(yōu)化法研究炭黑曲霉在不同條件下的產(chǎn)毒能力，得到了炭黑曲霉產(chǎn)毒的最佳條件。朱柳楊等［31］研究了黑曲霉產(chǎn)赭曲霉毒素A 在不同環(huán)境因素下的產(chǎn)量，確定了黑曲霉產(chǎn)赭曲霉毒素A 的最佳條件。然而，目前關(guān)于在不同條件下研究硫色曲霉產(chǎn)赭曲霉毒素的報(bào)道很少，硫色曲霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒特性也不清楚。

因此，本研究分別探討了不同固體培養(yǎng)基以及不同天然培養(yǎng)基對(duì)硫色曲霉生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的影響，為硫色曲霉產(chǎn)赭曲霉毒素的研究填補(bǔ)了空白，以期為控制硫色曲霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌株 本試驗(yàn)所用硫色曲霉分離自水稻種植的土壤樣品，通過形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定方法確定為硫色曲霉GZ-R1。

1.1.2 試劑 馬鈴薯購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；葡萄糖、蔗糖購(gòu)自北京化工廠；定量濾紙購(gòu)自杭州特種紙業(yè)有限公司；微纖維濾紙購(gòu)自北京北化黎明膜分離技術(shù)有限責(zé)任公司；甲醇分析純AR、甲醇色譜純購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher 公司；吐溫80、甘油、瓊脂粉、乙酸以及酵母提取物購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.3 儀器與設(shè)備 HR60-IIA2型生物安全柜，青島海爾特種電器有限公司；LS-B50L-I 型立式壓力蒸汽滅菌器，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；ZWY-2102C 型雙層恒溫培養(yǎng)振蕩器，上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；B5-2型恒溫磁力攪拌器，上海司樂儀器有限公司；YP3002 型電子天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司；DGG-9053A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；SHZ-III 型循環(huán)水真空泵，上海亞榮生化儀器廠；SC18G 型冷凍離心機(jī)，美國(guó)Sigma 公司；1DW-86LZ86 型超低溫保存箱，日本三洋公司；1260 型高效液相色譜儀（high performance liquid chromatography，HPLC）、熒光檢測(cè)器（fluorescence detection， FLD）、TCC18 色譜柱，英國(guó)安捷倫公司；ULTRA-TURRAX T 25 digital型分散器，德國(guó)IKA 公司；SZ2-1LST型電子顯微鏡，日本Olympus 公司；氮?dú)獯祾邇x，杭州奧威儀器有限公司；微量進(jìn)樣瓶，英國(guó)安捷倫公司；0.22 μm 微孔濾器，天津科藝隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；SK06G型超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；循環(huán)水真空泵，上海亞榮生化儀器廠。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基配制 酵母浸膏蔗糖（yeast extract with supplements，YES）培養(yǎng)基（1 L）：酵母提取物20 g、蔗糖150 g、瓊脂20 g。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基（1 L）∶200 g馬鈴薯浸出液、葡萄糖20 g、瓊脂20 g。

察氏酵母膏瓊脂（czapek yeast extract agar，CYA）培養(yǎng)基（1 L）：蔗糖30 g·L-1、NaNO33 g·L-1、K2HPO41.0 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1、KCl 0.5 g·L-1、FeSO40.01 g·L-1、酵母膏1 g·L-1、瓊脂15 g·L-1。

哥倫比亞瓊脂（columbia agar，CA）培養(yǎng)基（1 L）：NaNO32 g、K2HPO41 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、KCL 0.5 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1 000 mL，pH值自然。

氯硝胺孟加拉紅瓊脂（double rich broth with charcoal，DRBC）培養(yǎng)基（1 L）：購(gòu)于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。

天然培養(yǎng)基：將玉米、小麥、水稻、花生進(jìn)行打碎處理，取處理和未處理的樣品各25 g，置于100 mL三角瓶中。

以上培養(yǎng)基均置于高壓蒸汽滅菌鍋中121 ℃滅菌20 min。

1.2.2 菌種活化及孢子液的制備 將封存于-80 ℃甘油管的菌株在PDA培養(yǎng)基上復(fù)蘇，28 ℃下培養(yǎng)6～8 d，活化備用。用滅菌棉簽刮下，放到滅菌的0.1%的吐溫80 中，渦旋震蕩制成均勻的孢子懸液，并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，稀釋到1×10-7個(gè)·mL-1備用。

1.2.3 固體培養(yǎng)基培養(yǎng)以及OTA 提取 取10 μL 硫色曲霉孢子液分別滴在YES、PDA、CYA、DRBC、CA 等固體平板中心，在不同溫度下（15、20、25、30、37 ℃）培養(yǎng)8 d，觀察菌落形態(tài)，測(cè)定菌落直徑。用5 mm 打孔器在距離接種點(diǎn)同等距離打孔，每個(gè)平板打孔取樣5個(gè)。將打孔樣品加入2 mL甲醇，充分振蕩混勻。用0.22 μm有機(jī)微孔濾器過濾至進(jìn)樣瓶，高效液相色譜-熒光（high performance liquid chromatography-fluorescence detection， HPLC-FLD）檢測(cè)OTA含量。

1.2.4 不同pH 值的培養(yǎng) 取10 μL硫色曲霉孢子液分別滴在YES培養(yǎng)基上，在不同pH 值下（4.5、6、8、10）培養(yǎng)9 d，觀察菌落形態(tài)，直徑大小。用5 mm 打孔器在距離接種點(diǎn)同等距離打孔，每個(gè)平板打孔取樣5個(gè)。將打孔樣品加入2 mL甲醇，充分振蕩混勻。用0.22 μm有機(jī)微孔濾器過濾至進(jìn)樣瓶，HPLC-FLD檢測(cè)OTA含量。

1.2.5 天然培養(yǎng)基培養(yǎng)和OTA 提取 取10 μL 硫色曲霉孢子液分別滴在花生、玉米、水稻、小麥天然培養(yǎng)基上，在不同水分活度（0.90、0.92、0.94、0.96、0.98）下培養(yǎng)9 d。磨碎，取1 g 粉碎的樣品加入2 mL 甲醇，充分振蕩混勻。用0.22 μm有機(jī)微孔濾器過濾至進(jìn)樣瓶，HPLC-FLD檢測(cè)OTA含量。

1.2.6 液相色譜檢測(cè) 提取液用0.22 μm 濾膜過濾到棕色液相進(jìn)樣瓶中，直接上樣。選用Agilent 1260型高效液相色譜儀、C18反向色譜柱（25 cm×4.6 mm，內(nèi)徑5 μm）和熒光檢測(cè)器；設(shè)定工作參數(shù)：激發(fā)波長(zhǎng)333 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm；進(jìn)樣量20 μL；流動(dòng)相為乙腈∶水∶酸（99∶99∶2）；流速1 mL·min-1；柱溫30 ℃［32］。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有處理均設(shè)3 個(gè)重復(fù)，數(shù)據(jù)處理采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）分析，使用最小顯著差異法（least significant difference，LSD）進(jìn)行顯著性分析（P＜0.05）；所有分析圖均采用GraphPad Prism 8.0軟件繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基下硫色曲霉的生長(zhǎng)情況

硫色曲霉在YES、PDA、CYA、DRBC、CA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)到第8 天時(shí)，菌落大小差異較大，顏色多呈黃、白色，孢子產(chǎn)量一般或極少，都有不同程度褶皺。菌落形態(tài)觀察如圖1-A所示。測(cè)量不同固體培養(yǎng)基上硫色曲霉的直徑，結(jié)果如圖1-B所示。

圖1 硫色曲霉在不同固體培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)8 d的生長(zhǎng)情況Fig.1 Growth of A. sulphureus in different culture medium after incubated eight days

由表1 可知，硫色曲霉在YES 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最快，菌落直徑最大，為7.15 cm，且有褶皺，菌絲發(fā)達(dá)，適宜用于觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)情況。硫色曲霉在PDA 和CYA 培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度僅次于YES 培養(yǎng)基，菌落直徑分別為6.20 和5.75 cm，這兩種培養(yǎng)基適用于硫色曲霉生長(zhǎng)特性的研究，且CYA培養(yǎng)基孢子產(chǎn)量最高，適于孢子計(jì)數(shù)。硫色曲霉在DRBC和CA培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)較慢，且無褶皺，菌落直徑分別為4.10 和3.20 cm，DRBC 培養(yǎng)基上幾乎不產(chǎn)生孢子，這兩種培養(yǎng)基不適宜觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)特性，但可用于硫色曲霉的分離和計(jì)數(shù)。

表1 硫色曲霉在不同培養(yǎng)基上第8天的生長(zhǎng)情況Table 1 Growth situation of A. sulphureus on the eighth day in different medium

2.2 不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)間對(duì)硫色曲霉生長(zhǎng)情況的影響

由圖2-A 可知，在YES、PDA、CYA、DRBC、CA 培養(yǎng)基中，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，硫色曲霉的生長(zhǎng)直徑呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，菌落直徑越來越大，培養(yǎng)第8 天時(shí)，生長(zhǎng)直徑最大。由圖2-B可知，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，硫色曲霉的生長(zhǎng)速率呈現(xiàn)波動(dòng)降低的趨勢(shì)，均在第4 天時(shí)最大，此時(shí)生長(zhǎng)最快的是YES 培基，生長(zhǎng)速率為61%，最慢的是CA 培養(yǎng)基，生長(zhǎng)速率為33%；在不同培養(yǎng)基上，硫色曲霉生長(zhǎng)速率始終呈現(xiàn)正值，在第5、第6天時(shí)生長(zhǎng)速率在20%～30%左右，在第7、第8天時(shí)生長(zhǎng)速率為15%左右，在第8天時(shí)，除CA 培養(yǎng)基外，其他培養(yǎng)基的生長(zhǎng)速率均降至最低。

2.3 不同pH值對(duì)硫色曲霉生長(zhǎng)情況的影響

硫色曲霉在YES 培養(yǎng)基上有最大生長(zhǎng)直徑，因此在YES 培養(yǎng)基上培養(yǎng)硫色曲霉并觀察不同pH 值對(duì)硫色曲霉生長(zhǎng)情況的影響。培養(yǎng)到第8 天時(shí)，在YES 培養(yǎng)基上不同pH 值下硫色曲霉的生長(zhǎng)情況如圖3 所示。pH 值為4.5 時(shí)，硫色曲霉不生長(zhǎng)，隨著pH 值的增加，硫色曲霉的生長(zhǎng)直徑變大，在pH 值為8 時(shí)，有最大生長(zhǎng)直徑5.80 cm，在pH 值為10 時(shí)，生長(zhǎng)直徑又變小。表明偏中性和弱堿性環(huán)境適合硫色曲霉生長(zhǎng)，酸性環(huán)境抑制硫色曲霉生長(zhǎng)。

圖2 硫色曲霉在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)直徑（A）和生長(zhǎng)速率（B）Fig.2 Growth diameter （A） and Growth rates （B） of A. sulphureus on different media

圖3 在YES培養(yǎng)基下硫色曲霉在不同pH時(shí)培養(yǎng)第8天的生長(zhǎng)直徑Fig.3 Growth diameter of A. sulphureus in YES medium at different pH values after incubated eight days

2.4 不同培養(yǎng)基上硫色曲霉的產(chǎn)毒能力

硫色曲霉在不同固體培養(yǎng)基上的產(chǎn)毒差異明顯，由此可知硫色曲霉的產(chǎn)毒條件和外界環(huán)境是密不可分的。由圖4可知，培養(yǎng)9 d時(shí)硫色曲霉在PDA 培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量最高，OTA 含量為10.03 mg·kg-1，這是因?yàn)镻DA 培養(yǎng)基主要成分為馬鈴薯淀粉和葡萄糖，可以為硫色曲霉提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和碳源，提高其代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。其次是DRBC、CA 培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量較高，OTA含量分別為6.77 和6.16 mg·kg-1，而 在CYA 和YES培養(yǎng)基上未檢測(cè)到OTA毒素。

圖4 硫色曲霉在不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)第9天的OTA含量Fig.4 The OTA content of A. sulphureus in different medium after incubated nine days

2.5 不同天然培養(yǎng)基上硫色曲霉的產(chǎn)毒能力

低水分活度的天然培養(yǎng)基不產(chǎn)生毒素。為了提高培養(yǎng)基的水分活度，向天然培養(yǎng)基中加入適量的水。表2顯示了加水后天然培養(yǎng)基上的水分活度（aw）變化，加水后24 h天然培養(yǎng)基上的水分活度大幅度增高，花生、玉米、小麥、水稻初始aw分別為0.26、0.34、0.33、0.33，加水3 d 后aw均穩(wěn)定在0.97～0.98 范圍內(nèi)，水分活度基本保持不變，此時(shí)可用于研究硫色曲霉的產(chǎn)毒能力。

表2 天然培養(yǎng)基上水分活度的變化Table 2 Variation of water activity on natural media

圖5 顯示了培養(yǎng)9 d 時(shí)，硫色曲霉在不同天然培養(yǎng)基上的OTA 產(chǎn)毒能力。用花生、玉米、小麥、水稻作為天然培養(yǎng)基進(jìn)行產(chǎn)毒試驗(yàn)，硫色曲霉在花生培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量最高，OTA 含量為14.04 mg·kg-1；其次是小麥培養(yǎng)基，OTA 含量為9.02 mg·kg-1；玉米和水稻培養(yǎng)基上產(chǎn)毒基本相當(dāng)，OTA含量分別為6.41和6.00 mg·kg-1。

圖5 硫色曲霉在不同天然培養(yǎng)基上培養(yǎng)第9天的OTA含量Fig.5 The OTA content of A. sulphureus in different natural media after incubated nine days

3 討論

3.1 不同固體、天然培養(yǎng)基中硫色曲霉的生長(zhǎng)情況

為研究硫色曲霉的生長(zhǎng)條件和產(chǎn)毒情況，本研究分別在不同固體培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基中培養(yǎng)硫色曲霉，觀察其菌落形態(tài)、生長(zhǎng)速率和產(chǎn)毒條件，結(jié)果表明，硫色曲霉在YES 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，菌絲發(fā)達(dá)，在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)僅次于YES 培養(yǎng)基，可能是因?yàn)閅ES 培養(yǎng)基上的酵母浸膏營(yíng)養(yǎng)豐富，含有多種有利于微生物分泌代謝產(chǎn)物的因子，如多肽、氨基酸、碳源、氮源和微量元素等，同時(shí)有蔗糖作為碳源，從而使硫色曲霉生長(zhǎng)較好［33］；而PDA 培養(yǎng)基中雖然碳源充足，但氮源與無機(jī)鹽較少，故長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)較弱，但兩者均可為菌體提供充足的營(yíng)養(yǎng)成分，用來觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)特性。前期研究表明，硫色曲霉在YES 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，因此選擇YES 培養(yǎng)基培養(yǎng)硫色曲霉并改變培養(yǎng)基中的pH值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同pH 中的硫色曲霉生長(zhǎng)差異較大，在pH 值為8 時(shí)，硫色曲霉有最大的生長(zhǎng)直徑，這可能是因?yàn)榄h(huán)境中不同的pH值會(huì)影響到細(xì)胞膜所帶的電荷，從而導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收也出現(xiàn)差異性［34］。Akkermans 等［35］在2017 年研究了pH 對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用，發(fā)現(xiàn)pH 為中性和弱堿性時(shí)，微生物的生長(zhǎng)速率較高。這與本研究中硫色曲霉在弱堿性條件下有最大生長(zhǎng)直徑，而在酸性和堿性條件下，其菌落直徑會(huì)減小的結(jié)果也較為一致。固體培養(yǎng)基中，硫色曲霉在PDA 培養(yǎng)基上產(chǎn)毒最佳，可能是因?yàn)镻DA 培養(yǎng)基中含有馬鈴薯和葡萄糖，而馬鈴薯中含有淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、粗纖維，還含有豐富的鈣、磷、鐵、鉀等礦物質(zhì)及VC、VA和B 族類維生素，營(yíng)養(yǎng)豐富［36］；其次是因?yàn)槠咸烟亲鳛閮?yōu)質(zhì)碳源可為硫色曲霉生長(zhǎng)提供豐富的碳源，進(jìn)而使其產(chǎn)毒量較高，所以PDA 是觀察硫色曲霉產(chǎn)毒的最佳培養(yǎng)基。硫色曲霉在CYA 和PDA 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好，僅次于YES培養(yǎng)基，但在CYA和YES培養(yǎng)基上不產(chǎn)毒，這是因?yàn)楸M管CYA培養(yǎng)基中所含有的碳源可以滿足硫色曲霉的生長(zhǎng)，但其培養(yǎng)基中所含有的硝酸鈉會(huì)抑制OTA 的產(chǎn)生［37］，所以CYA 和PDA 培養(yǎng)基可用于觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)，而PDA 培養(yǎng)基可同時(shí)用于觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒。

3.2 硫色曲霉在天然培養(yǎng)基上的產(chǎn)毒量比較

天然培養(yǎng)基不適宜觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)情況，因?yàn)樘烊慌囵B(yǎng)基本身的成分會(huì)對(duì)硫色曲霉DNA和RNA的提取造成影響，也不利于觀察其孢子形態(tài)。硫色曲霉在天然培養(yǎng)基上的產(chǎn)毒量較高，在花生培養(yǎng)基上產(chǎn)毒量最高，可以達(dá)到14.04 mg·kg-1，小麥、玉米、水稻也會(huì)因?yàn)榱蛏沟奈廴径a(chǎn)生赭曲霉毒素，但花生中更容易因硫色曲霉污染而產(chǎn)生赭曲霉毒素，這可能是由花生中脂肪、蛋白質(zhì)含量最為豐富所致［38］。高婧等［39］研究不同群體密度的赭曲霉孢子侵染糧食的規(guī)律時(shí)發(fā)現(xiàn)，低密度和高密度赭曲霉污染花生、大豆、玉米、小麥等農(nóng)作物后，花生和大豆的發(fā)芽率下降最多，說明脂肪及蛋白質(zhì)含量高的糧食可能更容易受到赭曲霉的污染，這與本研究發(fā)現(xiàn)的硫色曲霉的侵染規(guī)律類似。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，固體培養(yǎng)基上，硫色曲霉在YES 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，菌絲最發(fā)達(dá)，但不產(chǎn)毒，可用于觀察硫色曲霉的生長(zhǎng)特性。改變YES 培養(yǎng)基的pH 發(fā)現(xiàn)，pH 值為8 時(shí)最適宜硫色曲霉生長(zhǎng)，偏中性和弱堿性環(huán)境適合硫色曲霉生長(zhǎng)，酸性環(huán)境抑制其生長(zhǎng)。在PDA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況僅次于YES 培養(yǎng)基，同時(shí)有最高產(chǎn)毒量，所以PDA 培養(yǎng)基可用于OTA 的生長(zhǎng)和產(chǎn)毒特性研究。谷物等農(nóng)產(chǎn)品會(huì)因?yàn)榱蛏沟奈廴径a(chǎn)生赭曲霉毒素，硫色曲霉在天然培養(yǎng)基上的OTA 產(chǎn)毒能力表現(xiàn)為花生＞小麥＞玉米＞水稻。