端粒酶卡扎爾體蛋白1 和PIN2/TERF1 相互作用端粒酶抑制劑1在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中的表達(dá)及臨床意義△

楊海林，李炯，吳慧，肖琪，何麗，李斕，周洪亮，王琦#

重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院1胸外甲乳外科，2病理科，重慶 401120

乳腺癌是世界上最常見的一種惡性腫瘤，全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，2020 年世界范圍內(nèi)約有226 萬(wàn)乳腺癌新增病例，乳腺癌是全世界女性惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。通過對(duì)某些生物標(biāo)志物如激素受體、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）狀態(tài)及Ki-67 表達(dá)情況進(jìn)行分析，可以對(duì)乳腺癌進(jìn)行分型，分型的差異決定了治療方案的不同。端粒酶卡扎爾體蛋白1（telomerase cajal body protein 1，TCAB1）是新發(fā)現(xiàn)的端粒酶核心蛋白組分，研究證實(shí)，TCAB1 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，在宮頸癌、結(jié)直腸癌中均異常高表達(dá)[2-3]，抑制TCAB1 的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞衰老[4]。PIN2/TERF1 相互作用端粒酶抑制劑1（PIN2/TERF1 interacting telomerase inhibitor 1，PINX1）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與端粒酶關(guān)系密切的核仁蛋白，通過抑制端粒酶催化亞基人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）的活性抑制端粒酶活性[5]。研究顯示，PINX1 在口腔鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌中低表達(dá)，可作為腫瘤的預(yù)后預(yù)測(cè)因子，且可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[6-8]。本研究探討TCAB1 和PINX1 在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年1 月至2022 年1 月重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院收治的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理切片進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，由兩名病理科醫(yī)師閱片后確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；②術(shù)前未進(jìn)行放化療或其他治療；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他原發(fā)性惡性腫瘤；②哺乳期或妊娠期女性。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入45 例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者，年齡≤40 歲7 例，﹥40 歲38 例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24 例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21 例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅱ級(jí)23 例，Ⅲ級(jí)22 例；未絕經(jīng)15 例，絕經(jīng)30 例；非三陰性乳腺癌39 例，三陰性乳腺癌6例。另選取重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院同期收治的45例乳腺纖維腺瘤患者，年齡≤40 歲7 例，﹥40 歲38例；未絕經(jīng)15 例，絕經(jīng)30 例。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者和乳腺纖維腺瘤患者的年齡和絕經(jīng)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。收集乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織45 例和乳腺纖維腺瘤組織45 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測(cè)方法

采用免疫組化染色法檢測(cè)TCAB1 和PINX1 表達(dá)情況，TCAB1 和PINX1 抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。操作步驟：①取經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋的組織，制備成3～4 μm 的病理切片；②二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化；③3%過氧化氫處理，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；④應(yīng)用檸檬酸緩沖液對(duì)組織抗原進(jìn)行修復(fù)；⑤滴加抗體，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，封片后在顯微鏡下觀察。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

在染色均勻的區(qū)域隨機(jī)選取5 個(gè)高倍視野，由兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行判定。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例及染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，﹥75%為4 分。染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分相乘，≤6 分為低表達(dá)，﹥6 分為高表達(dá)。

1.4 觀察指標(biāo)

比較乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織與乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達(dá)情況；比較不同臨床特征乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 和PINX1 表達(dá)情況；分析乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 與PINX1 表達(dá)的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織與乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達(dá)情況的比較

免疫組化染色結(jié)果顯示，TCAB1 和PINX1 主要定位于細(xì)胞核中（圖1）。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 高表達(dá)率明顯高于乳腺纖維腺瘤組織，PINX1 高表達(dá)率明顯低于乳腺纖維腺瘤組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）（表1）。

表1 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織和乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達(dá)情況的比較[n（%）]

圖1 乳腺纖維腺瘤組織與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1和PINX1的表達(dá)情況（免疫組化染色，×200）

2.2 不同臨床特征乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1和PINX1表達(dá)情況的比較

不同年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑、月經(jīng)狀態(tài)、乳腺癌分型的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 表達(dá)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.943、0.002、0.180、0.916、0.189、0.045，P﹥0.05）。不同年齡、腫瘤直徑、月經(jīng)狀態(tài)、乳腺癌分型的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中PINX1 表達(dá)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.322、2.163、2.205、0.022，P﹥0.05）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為Ⅱ級(jí)的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中PINX1 高表達(dá)率分別明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.504、8.222，P﹤0.01）。（表2）

2.3 TCAB1 與PINX1 表達(dá)的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 與PINX1 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.328，P=0.028）。

3 討論

目前臨床常根據(jù)雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、HER2 狀態(tài)及Ki-67 表達(dá)情況對(duì)乳腺癌進(jìn)行分型，分型的不同決定了治療方案的不同。本研究分析端粒酶相關(guān)指標(biāo)TCAB1 和PINX1 在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中的表達(dá)及臨床意義。端粒酶的激活是細(xì)胞惡變的必備條件，它是一種在細(xì)胞中負(fù)責(zé)端粒延長(zhǎng)的核糖核蛋白酶，為端粒DNA 延長(zhǎng)提供RNA 模板序列[9-10]。端粒酶能夠延長(zhǎng)已縮短的端粒，導(dǎo)致細(xì)胞處于無(wú)限增殖狀態(tài)[11]，TCAB1 在人類腫瘤細(xì)胞的端粒合成中起著至關(guān)重要的作用，能夠?qū)⒍肆Ｃ钢苯舆\(yùn)輸?shù)蕉肆Ｉ?，促進(jìn)端粒伸長(zhǎng)，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖，并增加腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[12-13]。研究表明，TCAB1 在宮頸癌、結(jié)直腸癌中高表達(dá)，抑制TCAB1 的表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞的形成和生長(zhǎng)[2-3]。但TCAB1 在乳腺癌中的研究較少且無(wú)明顯的臨床意義。本研究結(jié)果顯示，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TCAB1 高表達(dá)率明顯高于乳腺纖維腺瘤組織，提示TCAB1可能作為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的致癌基因，但能否作為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者預(yù)后的影響因素還需后續(xù)隨訪驗(yàn)證。

PINX1位于染色體8p23 區(qū)域，該區(qū)域在人類惡性腫瘤中經(jīng)常缺失。Ho 等[5]研究顯示，PINX1 可抑制端粒酶的活性，縮短端粒。但關(guān)于PINX1 在惡性腫瘤中的臨床意義仍存在爭(zhēng)議。有研究表明，PINX1 表達(dá)下調(diào)與非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌患者的預(yù)后不良密切相關(guān)[14-16]。但是在一些惡性腫瘤如腦膠質(zhì)瘤、食管鱗狀細(xì)胞癌和甲狀腺癌中，PINX1 被認(rèn)為是一種腫瘤促進(jìn)因子，其高表達(dá)與腫瘤患者的預(yù)后不良相關(guān)[17-19]。關(guān)于PINX1在乳腺癌中的研究報(bào)道較少，F(xiàn)eng 等[20]研究顯示，PINX1 低表達(dá)預(yù)示基底細(xì)胞樣乳腺癌惡性程度更高，其表達(dá)情況與乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中PINX1 高表達(dá)率明顯低于乳腺纖維腺瘤組織，且乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中PINX1 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，PINX1 低表達(dá)更多見于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的患者，這意味著PINX1 低表達(dá)可能與乳腺癌患者預(yù)后不良相關(guān)，但還需要擴(kuò)大樣本量及長(zhǎng)期隨訪進(jìn)一步研究。

本研究通過Spearman 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中TCAB1 與PINX1 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，它們之間可能存在某種通路誘導(dǎo)二者相互作用。Mahmoudi 等[13]研究顯示，TCAB1 能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活，并在多種腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，而TCAB1 表達(dá)下調(diào)可以通過線粒體途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。鄧璐等[6]研究表明，PINX1 可以調(diào)控磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）信號(hào)通路，從而抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和侵襲。但目前尚無(wú)TCAB1 和PINX1 相關(guān)信號(hào)通路的研究報(bào)道，還需進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究驗(yàn)證。

綜上所述，乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中TCAB1高表達(dá)率較高，PINX1 高表達(dá)率較低，二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，且PINX1 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，探究二者在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的分子機(jī)制可為其診斷和治療提供新策略。