QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)軟體類中18 種酚類化合物

邢家溧，李 楊，鄭睿行，徐曉蓉，毛玲燕，胡 陵，沈 堅(jiān)，張書芬，承 海*

（1 寧波市產(chǎn)品食品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院（寧波市纖維檢驗(yàn)所） 浙江寧波 315048 2 浙江萬里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院 浙江寧波 315100 3 寧波工程學(xué)院理學(xué)院 浙江寧波 315211 4 浙江方圓檢測(cè)集團(tuán)股份有限公司 杭州 310013）

隨著人們生活水平的提高，在物質(zhì)生活基本滿足的當(dāng)下，人們對(duì)營(yíng)養(yǎng)健康的關(guān)注度日益上升，開始追求更高品質(zhì)的生活。水產(chǎn)品因較高的蛋白質(zhì)含量，較低的脂肪比例以及含有較多的人體必需氨基酸等特點(diǎn)[1]，而深受廣大消費(fèi)者的喜愛。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外對(duì)水產(chǎn)品的需求量逐年提升[2]。其中牡蠣、扇貝、魷魚和貽貝等軟體類水產(chǎn)品是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值非常高的優(yōu)質(zhì)食品，作為高生物價(jià)的蛋白、脂肪和脂溶性維生素來源，在人類的營(yíng)養(yǎng)供給方面具有重要作用。它們生活于水底泥沙中或附著在水中外物上，亦或用足絲附著在淺海巖生活，為濾食性生物，以硅藻、細(xì)小的浮游動(dòng)物和有機(jī)碎屑等為主要食料，因特殊的生活環(huán)境及生活習(xí)性，故軟體類水產(chǎn)品相比于魚類和甲殼類被污染的風(fēng)險(xiǎn)更高。張明月等[3]對(duì)市場(chǎng)上常見水產(chǎn)品進(jìn)行食用安全風(fēng)險(xiǎn)分析，其中軟體類水產(chǎn)品的污染情況較嚴(yán)重。對(duì)軟體類水產(chǎn)品中酚類化合物檢測(cè)方法的研究與開發(fā)具有重要的意義。

酚類化合物以毒性大、用途廣、污染程度深，且可長(zhǎng)期殘留于水和土壤環(huán)境中等特點(diǎn)而備受研究者的關(guān)注。環(huán)境中的酚類化合物主要來自煤焦油、塑料、染料、藥品、殺菌劑和防腐劑等產(chǎn)品，在生產(chǎn)過程中通過直接排放或以工業(yè)廢水的形式排放到環(huán)境中。土壤及水環(huán)境被酚類化合物污染后，一些酚類可以吸附在土壤中或變成溶解物殘留在水環(huán)境和土壤中。酚類化合物不僅會(huì)直接危害人體健康，還會(huì)通過食物鏈進(jìn)入人體內(nèi)并產(chǎn)生富集現(xiàn)象，進(jìn)而對(duì)人體的健康產(chǎn)生巨大的威脅。

然而，目前，對(duì)酚類化合物的研究主要集中在環(huán)境或水。例如，Kamal 等[4]使用固相萃取液相色譜法對(duì)木屑滲濾液中的酚類化合物進(jìn)行定量。趙開勇[5]利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)環(huán)境中的酚類化合物進(jìn)行定量分析。Sghaier 等[6]開發(fā)了一種通過固相萃取、衍生化和氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定水中酚類化合物的方法。Padilla 等[7]開發(fā)了一種從廢水中同時(shí)提取13 種酚類化合物的方法。王斌[8]使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)烘焙食品和原材料中的雙酚污染物。雖然軟體類水產(chǎn)品中酚類化合物的檢測(cè)方法也有一些報(bào)道，但是其檢測(cè)的酚類化合物種類單一、數(shù)量較少，且大多需要衍生化等繁瑣的前處理，耗時(shí)較長(zhǎng)，不能滿足水產(chǎn)品中酚類物質(zhì)日常檢測(cè)的要求。如黃會(huì)等[9]使用凝膠色譜結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)烏賊中3 種酚類化合物，該檢測(cè)方法雖涉及雙酚A、烷基酚等酚類化合物，但可同時(shí)檢測(cè)的酚類物數(shù)量較少，且在前處理過程中需要衍生，這極大地降低了檢測(cè)效率。徐英江等[10]同樣使用凝膠色譜結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中溴酚類物質(zhì)，雖然酚類物質(zhì)種類有所提高，但是此處檢測(cè)均為同一種類溴酚，不能滿足日常水產(chǎn)品酚類化合物多樣化檢測(cè)。鐘惠英等[11]開發(fā)了一種同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中19 種酚類物質(zhì)的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可同時(shí)檢測(cè)的酚類物質(zhì)數(shù)量得到顯著提高，然而，該方法使用液液萃取，不僅耗時(shí)費(fèi)力，而且會(huì)消耗大量的有機(jī)試劑，不能滿足日常水產(chǎn)品的快速檢測(cè)。

針對(duì)我國(guó)當(dāng)前軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物同時(shí)檢測(cè)的方法缺失，本研究擬開發(fā)一種方便、快速、靈敏度高且具有良好穩(wěn)定性的，能同時(shí)檢測(cè)軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物的方法，該方法的建立對(duì)于保障水產(chǎn)品的消費(fèi)安全等均具有重要的意義。

1 試驗(yàn)方法

1.1 儀器、試劑與材料

TSQ 8000 Evo 氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、TG-5MS 毛細(xì)管色譜柱（30m 色譜柱）、ST8高速離心機(jī)，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司；Vortex 3 自動(dòng)漩渦混合器，德國(guó)IKA 公司；Milli-Q Academic 超純水儀，美國(guó)Millipore 公司；KQ-500E 超聲波清洗儀，中國(guó)寧波海曙科盛超聲設(shè)備有限公司；VORTEX 1 多功能渦旋混合器，德國(guó)IKA 公司；TURBOVAP 96 多功能全自動(dòng)氮吹濃縮儀，瑞典Biotage 公司。

試驗(yàn)用的軟體類（魷魚、扇貝、牡蠣、貽貝、縊蟶、海參），購(gòu)于寧波市江北區(qū)路林市場(chǎng)。乙腈、丙酮，色譜純，購(gòu)自德國(guó)Merck 公司；正己烷，分析純，購(gòu)自中國(guó)天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；二氯甲烷，色譜純，購(gòu)自中國(guó)江蘇永華化學(xué)科技有限公司；無水硫酸鎂、氯化鈉，分析純，購(gòu)自中國(guó)國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司；十八烷基甲硅烷基（C18）、中性氧化鋁（AL-N）、Z-Sep+，購(gòu)自中國(guó)上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

辛基酚（OP），購(gòu)自北京百靈威科技有限公司；雙酚A（BPA），購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；2-溴苯酚（2-BP）、4-溴苯酚（4-BP）、2，4-二溴苯酚（2，4-DBP）、2，6-二溴苯酚（2，4-DBP）、2，4，6-三溴苯酚（2，4，6-TBP）、2-硝基酚（2-Nitrophenol）、4-甲基-2-硝基酚（4-Methyl-2-nitrophenol）、3-甲基-4-硝基酚（3-Methyl-4-nitrophenol）、2-硝基-3-甲基苯酚（3-Methyl-2-nitrophenol）、2，6-二甲基-4-硝基酚（2，6-Dimethyl-4-nitrophenol）、4-硝基酚（4-Nitrophenol）、3-硝基酚（3-Nitrophenol），購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；6-硝基間甲酚（5-Methyl-2-nitrophenol），購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司；2，4-二硝基苯酚（DNP）、4，6-二硝基鄰甲苯酚（2-Methyl-4，6-dinitrophenol）、壬基酚（NP），購(gòu)自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取18 種酚類標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg（精確至0.01 mg），分別用甲醇定容至10 mL，搖勻，配制成1 mg/mL 的儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱中保存、備用。

分別準(zhǔn)確吸取10 mL 2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4種酚類儲(chǔ)備液和1 mL 其余14 種酚類儲(chǔ)備液于10 mL 容量瓶中，混合均勻后用甲醇稀釋且定容至刻度，搖勻，配制成10/100 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，并置于4 ℃冰箱中密封保存，備用。（其中2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4 種酚類為100 μg/mL，其余酚類為10 μg/mL）。

1.3 樣品的制備及其前處理

提?。悍Q取粉碎后的軟體類樣品10 g，置于50 mL 塑料離心管中，添加2 mL 超純水和10 mL乙腈，渦旋分散40 s，隨后，向管中添加2 g NaCl和3 g MgSO4，渦旋振蕩5 min，然后超聲10 min，高速離心5 min。

凈化：收集上清液至裝有305 mg C18、230 mg Z-Sep+、200 mg A-N 的15 mL 離心管中。渦旋振蕩約10 min 后，取5 mL 上清液，氮吹濃縮至約0.8 mL，乙腈定容至1 mL。最后，經(jīng)有機(jī)濾膜過濾，用GC-MS/MS 進(jìn)行測(cè)定。

1.4 儀器分析條件

GC 條件：進(jìn)樣口溫度為260 ℃；載氣為高純氦（純度≥99%），流速1.2 mL/min。程序升溫條件：初始柱溫70 ℃，維持1 min，然后以8 ℃/min 升至160 ℃，再以3 ℃/min 升至200 ℃，最后以40 ℃/min 升至300 ℃，保持3 min；進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1 μL。

MS 條件：電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度為240 ℃；傳輸線溫度為250 ℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲：10 min；選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方式。監(jiān)測(cè)特征離子見表1。

表1 18 種酚類化合物的保留時(shí)間、定量離子和定性離子Table 1 Retention time，quantitative ion and qualifier ion of 18 phenolic pollutants

1.5 統(tǒng)計(jì)方法及數(shù)據(jù)處理

使用儀器自帶的軟件Trace Finder SP1GQ計(jì)算各目標(biāo)物的方法檢出限，利用該軟件得到各酚類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)。處理后的數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，作圖采用Origin 8.6 軟件，響應(yīng)面分析使用Design-Expert.11.1 軟件。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)初期，為了節(jié)省初期調(diào)試每一種目標(biāo)化合物的最佳質(zhì)譜參數(shù)時(shí)間，在調(diào)試的過程中，氣相條件設(shè)置比較簡(jiǎn)單，進(jìn)樣口溫度260 ℃，迅速升溫，方便快速將酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)品吹出從而進(jìn)入質(zhì)譜分析。分別取18 種酚類單標(biāo)，采用全掃描模式進(jìn)樣，質(zhì)荷比掃描范圍為50～350，通過各個(gè)目標(biāo)物的峰質(zhì)譜譜圖與儀器自帶譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，初步確定18 種酚類化合物對(duì)應(yīng)的特征性定量離子及其保留時(shí)間，找出一到兩個(gè)豐度最高的離子碎片，以待后續(xù)優(yōu)化，如圖1 所示。

圖1 18 種酚類化合物的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatograms of 18 phenolic pollutants

在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)采用SIM 模式掃描分析樣品中的目標(biāo)酚類化合物，該模式只對(duì)待測(cè)組分物質(zhì)離子信號(hào)進(jìn)行定量定性采集，很大程度上提高了對(duì)目標(biāo)化合物的檢測(cè)靈敏度，減少了雜質(zhì)的干擾，從而使試驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。如圖1 所示，18 種酚類目標(biāo)物出峰良好，且都能較好地分離，響應(yīng)值也較高。

2.2 樣品前處理的優(yōu)化

2.2.1 提取劑種類及其體積的選擇 不同的提取溶劑對(duì)目標(biāo)物的提取效果不同，此外，使用不同的提取溶劑產(chǎn)生的雜質(zhì)也會(huì)不同，而這些雜質(zhì)會(huì)干擾后續(xù)的GC-MS/MS 檢測(cè)[12]，因此，選擇合適的提取溶劑是提取復(fù)雜基質(zhì)體系中酚類化合物的關(guān)鍵。本試驗(yàn)考察了4 種常作為提取劑的有機(jī)溶劑（二氯甲烷、乙腈、丙酮、正己烷）對(duì)酚類化合物回收率的影響，結(jié)果如圖2 所示。

圖2 不同提取溶劑對(duì)18 種酚類化合物回收率的影響Fig.2 Effects of different extraction solvents on the recoveries of 18 phenolic pollutants

通過試驗(yàn)結(jié)果可以看出，丙酮和正己烷作提取劑時(shí)，酚類化合物回收率分別為61.3%～83.9%和63.0%～91.5%，均低于乙腈和二氯甲烷。二氯甲烷和乙腈提取效果相當(dāng)，同時(shí)經(jīng)顯著性分析后發(fā)現(xiàn)18 種酚類化合物回收率無顯著性差異（P＞0.05）。但與乙腈相比，二氯甲烷沸點(diǎn)較低，在試驗(yàn)操作過程中易揮發(fā)，且平行性差，不利于大批量實(shí)際樣本的檢出，此外揮發(fā)的二氯甲烷不僅會(huì)損害實(shí)驗(yàn)者的健康，同時(shí)還易污染檢測(cè)器和色譜柱，從而降低了柱效和檢測(cè)靈敏度[13]。乙腈作為提取溶劑時(shí)，更易通過鹽析與水相分層[14]，從而最大限度地提取酚類化合物，而且乙腈沉淀蛋白效果好，提取的色素、脂肪等非極性雜質(zhì)含量較少，基質(zhì)干擾影響小[15]，綜上所述，本試驗(yàn)最終選擇乙腈作為提取溶劑。

同時(shí)，本試驗(yàn)還考察了提取劑用量（7～10 mL）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，結(jié)果顯示，10 mL 乙腈足以完全提取基質(zhì)中的目標(biāo)物（各酚類化合物平均加標(biāo)回收率達(dá)到最優(yōu)，在90.6%～108.6%之間），如果提取溶劑用量過多，基質(zhì)中共萃取干擾物往往也會(huì)不斷增多，從而導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)也不斷增強(qiáng)[16]，因此，本試驗(yàn)最終選擇提取劑的用量為10 mL。

2.2.2 鹽析劑的選擇 使用氯化鈉作為鹽析劑時(shí)，各待測(cè)物提取回收率見表2，整體酚類化合物的回收率隨著氯化鈉添加量的增加而增加，當(dāng)氯化鈉添加量達(dá)到2 g 時(shí)，回收率基本保持不變。部分酚類化合物如4-硝基酚、2，4-二硝基苯酚和4，6-二硝基鄰甲苯酚，在NaCl 為3 g 時(shí)有下降的趨勢(shì)，并隨著氯化鈉添加量的增加，回收率不斷降低，這說明過量的氯化鈉會(huì)使部分酚類化合物回收率降低。其中當(dāng)氯化鈉添加量為2 g 時(shí)，回收率最高的酚類化合物種類相對(duì)最多，其回收率為80.8%～100.4%，因此，本試驗(yàn)選擇2 g 氯化鈉作為鹽析劑。

表2 不同量鹽析劑對(duì)18 種酚類化合物回收率的影響Table 2 Effect of different amount of salting out agent on the recovery of 18 phenolic pollutants

在選擇2 g 氯化鈉為鹽析劑的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步考察加入除水劑無水MgSO4對(duì)沉淀蛋白的效果。試驗(yàn)結(jié)果見表3，從試驗(yàn)結(jié)果中可以看出，在添加一定的吸水劑無水MgSO4后，除6-硝基間甲酚、2，6-二甲基-4-硝基酚之外的個(gè)別硝基酚的回收率變化不明顯外，酚類化合物總體回收率均有所提高，由此可以得出，單獨(dú)使用鹽析劑效果不如混合搭配使用除水劑效果好。但隨著無水MgSO4用量的增加，酚類化合物回收率在逐漸下降，這可能是因?yàn)殡S著無水MgSO4量的增多，在除水的過程中放出大量的熱，導(dǎo)致提取劑揮發(fā)，從而降低了酚類化合物的提取效果，進(jìn)而影響了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，這與劉勇濤等[17]得出的結(jié)果一致。當(dāng)無水硫酸鎂添加量為3 g 時(shí)，酚類化合物達(dá)到峰值的種類相對(duì)最多，因此，最終選擇3 g 無水硫酸鎂作為除水劑。

表3 添加無水硫酸鎂對(duì)18 種酚類化合物回收率的影響Table 3 Effect of adding anhydrous magnesium sulfate on the recovery of 18 phenolic pollutants

2.2.3 凈化劑的選擇 本試驗(yàn)采用響應(yīng)面法研究分析不同凈化劑用量及其不同組合對(duì)蝦肉的凈化效果，根據(jù)響應(yīng)曲面法（RSM）原理，使用Design-Expert 軟件中心復(fù)合設(shè)計(jì)（CCD）進(jìn)行了三因素和三水平試驗(yàn)，以對(duì)比3 種凈化劑對(duì)酚類化合物回收率的影響，除去極端值（＜70%和＞110%）的各酚類化合物的均值為響應(yīng)值。以酚類化合物回收率為指標(biāo)，分別考察單獨(dú)使用C18、A-N、GCB 所對(duì)應(yīng)的凈化效果，分別考察C18 用量（100，200，300，400，500，600 mg），A-N 用量（100，200，300，400，500，600 mg），GCB 用量（20，40，60，80，100，120 mg）對(duì)回收率的影響，試驗(yàn)設(shè)置3 組平行，結(jié)果取平均值。

通過以上單因素實(shí)驗(yàn)確定單一凈化劑C18、Z-Sep+、A-N 的最佳用量分別為300，200，200 mg，然后采用Design-Expert 軟件建立相應(yīng)回歸模型，最后根據(jù)響應(yīng)曲面法確定各凈化劑之間交互作用以及整體對(duì)酚類化合物的影響作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示，單一凈化劑最終確定了3 個(gè)不同的水平，如表4 所示。

表4 Box-Benhnken 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表Table 4 Box-Benhnken experimental factor level table

兩因素交互作用的響應(yīng)面結(jié)果如圖3～圖5所示。從圖中可以看出，A、B 兩因素的等高線趨于橢圓且最密集，曲面較陡峭，表明C18 添加量和Z-Sep+添加量交互作用最強(qiáng)，對(duì)酚類化合物回收率響應(yīng)影響較大；A、C 兩因素的等高線趨于圓，曲面最陡峭，表明C18 添加量和A-N 添加量交互作用最弱，對(duì)酚類化合物回收率響應(yīng)影響最大；B、C兩因素的等高線趨于橢圓，曲面較平緩，表明ZSep+添加量和A-N 添加量交互作用較強(qiáng)，對(duì)酚類化合物回收率響應(yīng)影響相對(duì)最小。

圖3 Z-Sep+和C18 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.3 A-response surface and contour plot of interaction between Z-Sep+ and C18

圖4 A-N 和C18 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.4 A-response surface and contour plot of interaction between A-N and C18

圖5 Z-Sep+和A-N 交互作用的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.5 A-response surface and contour plot of interaction between Z-Sep+ and A-N

利用模型對(duì)凈化劑種類及用量進(jìn)行優(yōu)化，得到酚類化合物凈化劑最佳搭配為C18 用量為305.31 mg，Z-Sep+用量為232.60 mg，A-N 用量為196.69 mg，為方便操作，將凈化劑搭配優(yōu)化為：C18 用量為305 mg，Z-Sep+用量為230 mg，A-N 用量為200 mg。按照此凈化條件，進(jìn)行3 次驗(yàn)證，酚類化合物實(shí)際平均回收率為107.38%，與預(yù)測(cè)值誤差僅為1.1%，表明模型有效可靠。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（Matrix Effect，ME）是由目標(biāo)化合物與基質(zhì)中的共提干擾物競(jìng)爭(zhēng)電離所致。非目標(biāo)化合物會(huì)在色譜分離過程中抑制信號(hào)或提高待測(cè)組分的電離效率[18]。對(duì)于肉制品這種高脂肪、高蛋白等復(fù)雜基質(zhì)的樣品，其基質(zhì)效應(yīng)會(huì)影響酚類化合物的電離，引起信號(hào)增強(qiáng)或抑制，從而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性[19]。因此在方法建立時(shí)均需要考察基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，并且采取有效的措施減弱或消除它的影響是非常有必要的?；|(zhì)效應(yīng)與很多因素有關(guān)，例如儀器種類、試驗(yàn)環(huán)境差異、樣品濃度等都會(huì)產(chǎn)生不同的基質(zhì)效應(yīng)。一般來說，ME＜0.8 表示基質(zhì)抑制，而ME＞1.2 表示基質(zhì)增強(qiáng)，當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)在0.8～1.2 之間時(shí)，基質(zhì)所帶來的基質(zhì)效應(yīng)可忽略[20-21]。使用陰性樣品基質(zhì)提取液和純?nèi)軇┡渲葡嗤瑵舛鹊幕|(zhì)匹配校準(zhǔn)液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，用陰性樣品（B）平均峰面積的響應(yīng)值與純?nèi)軇ˋ）平均峰面積的響應(yīng)值之比來體現(xiàn)其基質(zhì)效應(yīng)，通過以下公式計(jì)算：

本試驗(yàn)分別選取6 種軟體類水產(chǎn)品（魷魚、扇貝、牡蠣、貽貝、縊蟶、海參），按照1.3 節(jié)方法進(jìn)行樣品前處理，配制成0.4/4 μg/mL 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，具體結(jié)果詳見圖6。18 種酚類化合物在軟體類水產(chǎn)品中基質(zhì)效應(yīng)因其種類的不同而存在較大差異，在魷魚和海參基質(zhì)中，18 種酚類化合物基質(zhì)效應(yīng)分別為1.53～2.62 和1.33～2.42，均呈現(xiàn)出基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；牡蠣中溴酚類化合物和雙酚A基質(zhì)效應(yīng)為0.44～0.73，呈現(xiàn)出弱基質(zhì)效應(yīng)，其余種類的酚類化合物均呈現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；縊蟶中，辛基酚、雙酚A、2，4，6-三溴苯酚基質(zhì)效應(yīng)為0.8～1.2，基質(zhì)效應(yīng)作用較弱，可忽略；其次，對(duì)于扇貝和貽貝而言，除2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、3-甲基-4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚外，均呈現(xiàn)基質(zhì)抑制作用。

圖6 不同種類軟體類水產(chǎn)品所對(duì)應(yīng)的基質(zhì)效應(yīng)Fig.6 Matrix effects of different kinds of soft aquatic products

2.4 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 線性范圍與方法檢出限 以空白魷魚基質(zhì)溶液作溶劑，配制18 種酚類化合物系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接進(jìn)樣分析。以酚類化合物的濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，經(jīng)計(jì)算得到2，4-二硝基苯酚、4-硝基酚、4，6-二硝基鄰甲苯酚、3-甲基-4-硝基酚4 種酚類線性范圍為1～20 mg/L；其余14 種酚類物質(zhì)線性范圍為0.1～2 mg/L。其中前4 種酚類物質(zhì)加標(biāo)濃度為0.2，0.8，4 mg/kg，其余14 種酚類物質(zhì)加標(biāo)濃度為0.02，0.08，0.4 mg/kg，以3 倍信噪比結(jié)合濃度外推法確定方法檢出限（LOD），具體結(jié)果見表5。

表5 酚類化合物的校準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)Table 5 Calibration curve and correlation coefficient of phenolic pollutants

2.4.2 加標(biāo)回收率與方法精密度 通過回收率試驗(yàn)，即在空白樣品中添加3 個(gè)加標(biāo)濃度（0.02/0.2，0.08/0.8，0.4/4 mg/kg）下評(píng)估了該方法的準(zhǔn)確性和精密度。對(duì)每個(gè)加標(biāo)水平進(jìn)行了6 次重復(fù)測(cè)試以檢查其重復(fù)性（RSD），結(jié)果如表6 所示，18 種酚類化合物的回收率在83.1%～107.7%之間，RSD 在1.9%～9.5%之間，這表明該方法具有較好的準(zhǔn)確度與精密度。

表6 酚類化合物的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）Table 6 Standard addition recovery and relative standard deviation of phenolic pollutants（%）

2.4.3 酚類化合物檢測(cè)在軟體類中的應(yīng)用 采用本方法對(duì)購(gòu)買的6 類48 份軟體類水產(chǎn)品進(jìn)行分析，以驗(yàn)證該方法的可行性。檢測(cè)結(jié)果顯示，扇貝和縊蟶酚類化合物檢出情況最嚴(yán)重，共檢出2-溴苯酚、2-硝基-3-甲基苯酚、6-硝基間甲酚、2，4-二溴苯酚、壬基酚等11 種酚類化合物，其中硝基酚類化合物檢出量最多，檢出率高達(dá)63.3%，壬基酚檢出量最大，達(dá)0.062 mg/kg；牡蠣、貽貝和海參次之，共檢出12 種酚類化合物，檢出質(zhì)量濃度在0.004～0.043 mg/kg 之間。魷魚中酚類化合物的含量相對(duì)較少，酚類化合物檢出率僅為21.6%，除2，6-二溴苯酚、2，4，6-三溴苯酚、雙酚A 外，未檢出其它酚類化合物。

3 結(jié)論

本研究采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，建立了軟體類水產(chǎn)品中18 種酚類化合物的檢驗(yàn)方法及確證技術(shù)，同時(shí)將建立的檢測(cè)方法應(yīng)用于實(shí)際水產(chǎn)品酚類化合物的檢測(cè)，所建立的檢測(cè)方法可同時(shí)完成多種類酚類化合物的定性定量分析。本方法優(yōu)化了前處理，省去了耗時(shí)費(fèi)力的衍生步驟，可以有效去除基質(zhì)中雜質(zhì)的干擾，具有靈敏度高、檢測(cè)效率高、簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)，適用于大批量樣本檢測(cè)。