超聲波輔助DES 提取肉蓯蓉多酚的工藝優(yōu)化、動(dòng)力學(xué)及抗氧化活性研究

魏玉萍，趙 巖，宋麗軍 ，潘磊慶，侯旭杰

（1.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾 843300；2.河北科技師范學(xué)院食品科技學(xué)院，河北秦皇島 066600；3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京 210095）

管花肉蓯蓉（Cistanche. tubulosa（Schrenk）. R.Wight）廣泛分布于中國(guó)西北荒漠地區(qū)，為列當(dāng)科（Orobanchaceae）根寄生植物，又名大蕓、金筍等[1]。管花肉蓯蓉具有與荒漠肉蓯蓉相似的化學(xué)成分和藥理活性，于2005 年被列入《中國(guó)藥典》，為“食藥同源”原料[2]。在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中，肉蓯蓉味甘、性溫，具有“主五勞七傷，補(bǔ)中，除莖中寒熱痛，養(yǎng)五臟，強(qiáng)陰，益精血”之功效，亦有“沙漠人參”之稱[3]。最新研究表明，肉蓯蓉具有抗衰老、抗氧化、潤(rùn)腸通便、降血脂、降血糖、保肝等藥理活性[4-8]。肉蓯蓉的藥理活性與其所含的多種功能性成分密切相關(guān)，如多酚類、多糖類、低聚糖類和糖苷類等[3,9-10]。研究表明，肉蓯蓉中含有松果菊苷、毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷等多酚類物質(zhì)，具有內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、抗神經(jīng)退行性疾病活動(dòng)、抗腫瘤、抗炎、保肝、抗氧化等生理功能[11-16]。

多酚的提取方式主要有溶劑浸提法、索氏提取法、超聲波輔助法等。其中超聲波輔助提取引入高頻波使溶質(zhì)-溶劑混合物發(fā)生擾動(dòng)、細(xì)胞壁破裂和溶劑擴(kuò)散；具有成本低，效率高，操作簡(jiǎn)等優(yōu)點(diǎn)。但是該方法普遍采用有機(jī)溶劑作為萃取劑，導(dǎo)致的溶劑殘留問(wèn)題與綠色化學(xué)的原則相悖[17]。低共熔溶劑（Deep eutectic solvents，DESs）由鹵化物鹽（即氫鍵受體）和一個(gè)或兩個(gè)氫鍵供體（HBDs）組成，具有生物降解性、低毒性和低成本等優(yōu)點(diǎn)，是分離、材料科學(xué)、生物催化和有機(jī)合成的領(lǐng)域的優(yōu)質(zhì)溶劑。目前，DESs已廣泛應(yīng)用于不同原料中多酚類、黃酮類、多糖類、蛋白質(zhì)類等成分的提取。Cvjetko 等[18]以草酸-氯化膽堿基為萃取溶劑，利用超聲輔助溶劑提取葡萄皮酚類化合物并取得了良好效果；Bajkacz 等[19]使用超聲波輔助低共熔溶劑提取大豆異黃酮，Bosiljkov 等[20]利用超聲輔助低共熔提取酒糟花青素。

目前采用超聲波輔助DES 提取肉蓯蓉多酚的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。利用超聲輔助DES 提取肉蓯蓉多酚，其提取效率受多種因素影響，為分析各因素的影響及相互作用，采用響應(yīng)面優(yōu)化對(duì)提取過(guò)程進(jìn)行數(shù)學(xué)分析及優(yōu)化。本文以新疆管花肉蓯蓉為原料，首先從19 種 DESs 中篩選最佳 DES 作為萃取溶劑，進(jìn)而在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助DES 提取肉蓯蓉多酚的最佳工藝，并進(jìn)一步研究提取動(dòng)力學(xué)及其體外抗氧化活性，為新疆管花肉蓯蓉多酚的綠色制備提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

管花肉蓯蓉 于2020 年4 月15 日采自新疆和田地區(qū)洛浦縣，采集大小均勻（直徑5 cm 左右，長(zhǎng)度20 cm 左右）、無(wú)病蟲(chóng)害及機(jī)械損傷的樣品。樣品經(jīng)切分并冷凍干燥，粉碎后過(guò)60 目篩，并于-18 ℃密封、避光保存?zhèn)溆?；氯化膽堿、葡萄糖、1,4-丁二醇、1,3-丁二醇、脯氨酸、木糖醇、甜菜堿、乳酸、乙酰丙酸、丙三醇 分析純，阿拉丁試劑公司；甲醇、乙腈、甲酸 色譜純，德國(guó)Merck 公司；抗壞血酸（≥98%）、2,2-聯(lián)氮-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS，≥98%）、二苯基苦味?；诫禄杂苫―PPH，≥98%）等試劑均為分析純 北京索萊寶科技有限公司。

KQ-50DB 數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；LGJ-25C 冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司；D-SY96S 全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 山東競(jìng)道廣電科技有限公司；BK-FD10P 高速冷凍離心機(jī)廣州吉迪儀器有限公司；752S 紫外分光光度計(jì) 上海棱光儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 低共熔溶劑的制備 根據(jù)Hadidi 等[21]的方法制備DESs：分別以氯化膽堿、甜菜堿、脯氨酸為氫鍵受體，以多元醇類（丙三醇、1,4-丁二醇、1,3-丁二醇、木糖醇）、酰胺類（尿素）、糖類（葡萄糖）和羧酸類（乳酸、乳糖、蘋(píng)果酸、乙酰丙酸）為氫鍵供體。將各組分溶劑按照不同摩爾比混合，在80 ℃條件下持續(xù)攪拌4～6 h，直至形成無(wú)色透明的均勻液體，冷卻至室溫即可制得不同類型的DESs（表1）。

表1 不同低共熔溶劑的組成及縮寫(xiě)Table 1 Composition and abbreviations of the studied DESs

1.2.2 低共熔溶劑的篩選 在溫度40 ℃、含水率40%、液料比50:1 g/mL、超聲時(shí)間30 min 條件下，分別采用不同DESs 提取肉蓯蓉多酚并計(jì)算提取率。

1.2.3 超聲輔助低共熔溶劑提取肉蓯蓉多酚

1.2.3.1 單因素實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取樣品粉末2.00 g，在固定超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、液料比50:1 mg/mL、含水量40%條件下，分別研究不同含水率（10%、20%、30%、40%、50%、60%），液料比（20:1、30:1、40:1、50:1、60:1、70:1 mg/mL），超聲溫度（25、30、40、50、60、70 ℃），超聲時(shí)間（10、20、30、40、50 min）對(duì)肉蓯蓉多酚的提取效果。提取完成后，混合液經(jīng)6000 r/min 離心10 min，取上清液減壓濃縮后定容至25 mL，測(cè)定其多酚含量。

1.2.3.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 在單因?qū)嶒?yàn)的基礎(chǔ)上（超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、含水率40%、料液比1:40 g/mL），采用Box-Behnken（BBD）進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇含水率（A）、溫度（B）、時(shí)間（C）、料液比（D）為自變量，多酚提取率（mg/g DW）為響應(yīng)值（Y）進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，其因素和水平如表2 所示。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 2 Factors and levels of response surface design

1.2.3.3 超聲輔助DESs 提取肉蓯蓉多酚的動(dòng)力學(xué)研究 根據(jù)二階吸附動(dòng)力學(xué)方程[22]對(duì)提取過(guò)程進(jìn)行擬合：

式中：KB為二級(jí)反應(yīng)速率常數(shù)（mL·mg-1·min-1）；Ceq為反應(yīng)平衡濃度（mg/L）；Ct是在t 時(shí)刻的提取濃度（mg/L）。

h 是t 接近0 時(shí)的初始提取率（g·L-1·min-1）：

因此，提取速率即簡(jiǎn)化為關(guān)于提取時(shí)間t 的函數(shù)：

1.2.4 肉蓯蓉多酚含量測(cè)定 總多酚含量采用Folin-Ciocalteu（FC）法測(cè)定：肉蓯蓉多酚提取物按一定比例稀釋后，取1.0 mL 與5.0 mL FC 試劑混合均勻，用蒸餾水稀釋10 倍，添加4.0 mL 碳酸鈉（7.5%，w/v）并充分混合，避光靜置30 min 后，在765 nm 處測(cè)定吸光度，結(jié)果以沒(méi)食子酸當(dāng)量表示（GAE/g DW）。多酚得率計(jì)算公式如下：

式中：W 表示多酚的得率mg/g；C 表示計(jì)算通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)出的溶液質(zhì)量濃度，mg/mL；V 表示溶液的體積，mL；m 表示肉蓯蓉取樣量，g。

1.2.5 肉蓯蓉多酚體外抗氧化活性研究

1.2.5.1 DPPH 自由基清除能力 參考Baba 等[23]的方法略加修改：分別取50 μL 不同濃度（0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10 mg/mL）的肉蓯蓉多酚提取液加入96 孔板中，分別加入150 μL 濃度為1 mmol/L 的DPPH·乙醇溶液，混勻后于37 ℃下避光靜置30 min。在517 nm 處測(cè)定其吸光度，根據(jù)式（6）計(jì)算：

式中：A1代表樣品的吸光度； A2為蒸餾水代替樣品的吸光度。

1.2.5.2 ATBS+自由基清除能力 參照Mejri 等[24]的方法略加修改：取19.2 mg ABTS 溶解于過(guò)硫酸鉀溶液（2.45 mmol/L），在室溫、黑暗條件下靜置12～16 h得即ABTS 儲(chǔ)備液（7 mmol/L）。用乙醇稀釋ABTS儲(chǔ)備液使其在734 nm 處吸光度為0.700±0.020。分別取10 μL 不同濃度（0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 mg/mL）的肉蓯蓉多酚提取液加入96 孔板中，然后分別加入150 μL ABTS 溶液，混勻后于37 ℃下避光靜置30 min，在734 nm 處測(cè)定其吸光度，根據(jù)式（7）計(jì)算：

式中： Ao代表樣品在734 nm 處的吸光值； Ai為蒸餾水代替樣品在734 nm 處的吸光值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)平行測(cè)定三次，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示。動(dòng)力學(xué)模型的參數(shù)通過(guò)非線性回歸擬合、決定系數(shù)R2和估計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)誤評(píng)估擬合效果。數(shù)據(jù)分析處理采用SPSS 17.0 進(jìn)行，使用Origin 2021對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 DESs 的篩選

圖1 為不同DESs 對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響。由圖1 可知：氫供體為多元醇和羧酸的DESs 表現(xiàn)出更佳的提取性能，DES-9（氯化膽堿:1,4-丁二醇=1:3）的得率最高，為37.15 mg/g DW；其次是DES-16（脯氨酸:丙三醇=2:5），得率為36.55 mg/g DW?？赡茉蚴且远嘣己汪人釣闅涔w的DESs對(duì)肉蓯蓉多酚具有更強(qiáng)的氫鍵作用力，且具有更低的粘度和更好的流動(dòng)性[25]。根據(jù)Wang 等[26]的研究，以羧酸為氫鍵供體的DESs 可以在高溫下與細(xì)胞壁發(fā)生反應(yīng)，增強(qiáng)對(duì)細(xì)胞壁的破壞作用。Zuo 等[27]研究發(fā)現(xiàn)，醇基DESs 具有更高的導(dǎo)電性，表現(xiàn)出更好的提取效率。顯著性分析發(fā)現(xiàn)，DES-9 和DES-16 差異不顯著，綜合考慮低共熔溶劑制備條件、經(jīng)濟(jì)等因素，選擇脯氨酸:丙三醇（摩爾比2:5）為提取溶劑進(jìn)行后續(xù)研究。

圖1 不同DESs 對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響Fig.1 Effect of various DESs on the yield of polyphenols

2.2 超聲波輔助提取條件優(yōu)化

2.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1.1 低共熔溶劑含水率對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響 在相同的超聲輔助提取條下加入不同比例的水，所制備的低共熔溶劑的粘度、極性及表面張力有所不同，會(huì)對(duì)多酚得率產(chǎn)影響。如圖2 所示：當(dāng)含水率達(dá)到40%，多酚的得率達(dá)到峰值，為36.97 mg/g；當(dāng)含水率大于40%時(shí)，多酚得率逐漸下降。分析認(rèn)為，隨著含水率的增大，DESs 溶劑的粘度減小，有利于酚類物質(zhì)的溶出，而過(guò)多的水則會(huì)削弱低共熔體系和各組分之間相互作用，從而降低提取效率[28]。故后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)最佳低共熔溶劑含水率為40%。

圖2 低共熔溶劑含水率對(duì)多酚得率的影響Fig.2 Effect of low eutectic solvent water content on the yield of polyphenols

2.2.1.2 液料比對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響 如圖3所示：當(dāng)液料比達(dá)到50:1 mg/mL，多酚的得率達(dá)到峰值38.74 mg/g；當(dāng)液料比大于50:1 g/mL，多酚得率逐漸下降。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果與欒朝霞[29]的研究結(jié)果一致，在提取過(guò)程中干物質(zhì)會(huì)吸收水分，液料比太小，吸水能力較低，會(huì)影響提取效率，但液料比過(guò)高，則會(huì)導(dǎo)致提取效果不明顯并造成溶劑的浪費(fèi)。隨著液料比的提高，溶劑的用量也會(huì)隨之增加，從而使超聲波與肉蓯蓉粉末的相互作用減弱[28]，因此后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)最佳液料比選擇50:1 g/mL。

圖3 液料比對(duì)多酚得率的影響Fig.3 Effect of liquid to material ratio on the yield of polyphenols

2.2.1.3 超聲溫度對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響 如圖4 所示：當(dāng)超聲溫度達(dá)到40 ℃，多酚的得率達(dá)到峰值（35.20 mg/g）；當(dāng)超聲溫度大于40 ℃時(shí)，多酚得率逐漸下降。隨著超聲溫度的不斷升高，乙醇溶液的粘性降低，分子的熱運(yùn)動(dòng)速度逐漸加快，多酚的得率也隨之增加；而多酚成分熱穩(wěn)定較差，高溫易導(dǎo)致部分熱敏性多酚類化合物降解[30]，故后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)最佳超聲溫度選擇為為40 ℃。

圖4 超聲溫度對(duì)多酚得率的影響Fig.4 Effect of ultrasonic temperature on polyphenol yield

2.2.1.4 超聲時(shí)間對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響 超聲時(shí)間時(shí)影響肉蓯蓉多酚得率得重要因素之一，從圖5可知，在10～30 min 的超聲時(shí)間與得率呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，超聲30 min 多酚的得率為37.45 mg/g。30 min 后，超聲時(shí)間與多酚得率下降。這可能是由于超聲波在水中的作用時(shí)間越久，產(chǎn)生的能量越大，在溶液中空穴作用也越大，對(duì)肉蓯蓉細(xì)胞壁的損傷越大，多酚得率也隨之增加，但是超聲波的產(chǎn)熱會(huì)導(dǎo)致多酚的分解，造成多酚得率降解[31]。故后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)最佳超聲時(shí)間選擇為30 min。

圖5 超聲時(shí)間對(duì)多酚得率的影響Fig.5 Effect of sonication time on the yield of polyphenols

2.2.2 模型的建立及檢驗(yàn) 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果如表3 所示，用多元線性回歸擬合得到多酚提取率率（Y）與DESs 含水率（A）、超聲溫度（B）、超聲時(shí)間（C）、液料比（D）的回歸方程：

表3 響應(yīng)面分析方案及試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Response surface analysis scheme and test results

模型方差分析結(jié)果如表4 所示：該模型極顯著（F值為30.19，P＜0.0001），失擬項(xiàng)不顯著（F=3.71，P=0.1092）。各項(xiàng)顯著性因素統(tǒng)計(jì)分析表明，其顯著性大小順序?yàn)椋篋＞B＞C＞A，即料液比＞超聲溫度＞超聲時(shí)間＞含水率，AC、AD、BC，A2、B2、C2、D2對(duì)肉蓯蓉多酚提取率影響顯著（P＜0.05）。模型的決定系數(shù)R2=0.9679，表明模型可以預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。校正決定系數(shù)R2adj=0.9359，變異系數(shù)C.V.=1.89%，結(jié)果表明模型具有可復(fù)制性。綜上所述，實(shí)驗(yàn)擬合的模型預(yù)測(cè)性良好。

表4 模型方差分析結(jié)果Table 4 Model analysis of variance

2.2.3 各因素的交互作用對(duì)多酚提取率的影響 通過(guò)3D 響應(yīng)面圖可以直觀地解釋不同變量相互作用對(duì)多酚得率的影響。由圖6a 可知：隨著含水率和超聲溫度的增大，肉蓯蓉多酚得率也逐漸升高。較高的溫度可以減少植物次生代謝產(chǎn)物與基質(zhì)之間的物理吸附和化學(xué)相互作用，增加DES 的滲透性，促進(jìn)多酚從植物基質(zhì)內(nèi)部向DES 溶劑的傳質(zhì)[32-33]。但當(dāng)溫度超過(guò)39 ℃，含水率超過(guò)40%時(shí)，多酚得率開(kāi)始下降。多酚得率隨著含水率和提取時(shí)間的增大而逐漸增加，但當(dāng)提取時(shí)間超過(guò)27.5 min 時(shí)，多酚得率開(kāi)始下降（圖6b）。類似的結(jié)果如圖6c 所示：隨著含水率和液料比的增加，多酚得率隨之上升，但當(dāng)液料比超過(guò)45 g/mL 時(shí)，得率開(kāi)始下降。

圖6 不同因素交互作用對(duì)肉蓯蓉多酚得率的影響Fig.6 Effect of interaction of different factors on the yeild of polyphenols

綜上所述，為了從肉蓯蓉中獲得最高的多酚得率，利用Designe Expert 軟件中的優(yōu)化模塊得到了肉蓯蓉多酚的最佳提取條件為：超聲溫度39.13 ℃，液料比45.28 g/mL、含水率39.92%、超聲時(shí)間27.57 min，此條件下預(yù)測(cè)多酚得率為37.84 mg/g。

2.3 超聲輔助DESs 提取肉蓯蓉多酚的動(dòng)力學(xué)分析

2.3.1 提取溫度對(duì)肉蓯蓉多酚提取動(dòng)力學(xué)的影響圖7 為不同溫度下DESs 提取肉蓯蓉多酚的擬合曲線。由圖7 可知：多酚浸出率在提取初期增長(zhǎng)迅速；當(dāng)提取時(shí)間超過(guò)25 min 后，多酚浸出率增長(zhǎng)速率減緩。管花肉蓯蓉多酚最初的快速浸出可歸因于水的驅(qū)動(dòng)力[34]。

圖7 不同溫度下DESs 提取肉蓯蓉多酚的擬合曲線Fig.7 Fitting curve of polyphenols extracted at different temperatures using DESs

根據(jù)二級(jí)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)繪制二級(jí)浸出模型，圖8為“t/Ct-浸出時(shí)間”的關(guān)系圖。由圖可知：二級(jí)浸出模型與實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性證實(shí)了如下假設(shè)：即在管花肉蓯蓉多酚的浸出過(guò)程中，主要有兩種現(xiàn)象：最初階段（0～25 min）多酚存在強(qiáng)烈的溶解作用，期間發(fā)生了最大程度的浸出；第二個(gè)階段（25～70 min）多酚浸出主要取決于外部擴(kuò)散，與基質(zhì)中殘留多酚的量有關(guān)，因此其提取速率緩慢[22]。

圖8 不同溫度下DESs 提取肉蓯蓉多酚動(dòng)力學(xué)Fig.8 Kinetics of polyphenols extracted at different temperatures using DESs

表5 為不同溫度下DESs 提取肉蓯蓉多酚的二級(jí)動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括飽和時(shí)浸出多酚含量Ceq、浸出速率常數(shù)kB、初始浸出速率h 和決定系數(shù)R2。由表5 可知：初始浸出速率h 隨溫度升高而增加，變化范圍為15.68 至25.85 g·L-1·min-1；溫度從30 ℃升高到60 ℃過(guò)程中，速率常數(shù)kB也從0.0108 增加到0.200 mg·g-1·min-1，二級(jí)浸出速率常數(shù)隨溫度增加而增加。

表5 不同溫度下DESs 提取肉蓯蓉多酚的二級(jí)動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 5 Secondary kinetic parameters of polyphenols extraction using DESs at different temperatures

2.3.2 含水率對(duì)肉蓯蓉多酚提取動(dòng)力學(xué)的影響 圖9為不同含水率DESs 提取肉蓯蓉多酚擬合曲線。根據(jù)二級(jí)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)繪制二級(jí)浸出模型，圖10 為t/Ct-浸出時(shí)間的關(guān)系圖。由圖9、圖10 可知：肉蓯蓉多酚的浸出率在提取初期增長(zhǎng)迅速，在浸出后期增速非常緩慢。

圖9 不同含水率DESs 提取肉蓯蓉多酚擬合曲線Fig.9 Fitting curve of polyphenols extracted using DESs with different moisture contents

圖10 不同含水率DESs 提取肉蓯蓉多酚動(dòng)力學(xué)Fig.10 Kinetics of polyphenols extracted using DESs with different moisture contents

表6 為不同含水率DESs 提取肉蓯蓉多酚的二級(jí)動(dòng)力學(xué)參數(shù)。由表6 可知：初始浸出率h 的變化范圍為8.9429 至10.4015 g·L-1·min-1，含水率為40%時(shí)初始浸出率最高。

表6 不同含水率DESs 提取肉蓯蓉多酚的二級(jí)動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 6 Secondary kinetic parameters of polyphenols extraction using DESs at different moisture contents

2.4 模型驗(yàn)證

基于預(yù)測(cè)模型得到的最佳提取條件，結(jié)合實(shí)際操作的可行性，將最佳提取條件修改為：超聲溫度39 ℃，液料比45 mL/g、含水率40%、提取時(shí)間28 min。在此條件下進(jìn)行三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，多酚提取率平均值為37.76±0.12 mg/g，與回歸模型預(yù)測(cè)值（37.835±0.996 mg/g）相符，表明本實(shí)驗(yàn)得到的最優(yōu)條件是可靠的。

2.5 肉蓯蓉多酚提取物的抗氧化活性

圖11、圖12 分別為肉蓯蓉多酚提取物對(duì)DPPH和ABTS+自由基清除能力。由圖可知：隨著提取物濃度的越大，其對(duì)DPPH 和ABTS+自由基的清除能力也越強(qiáng)。當(dāng)提取物的濃度為5 mg/mL 時(shí)，對(duì)兩種自由基的清除率分別達(dá)到73.69%和88.06%，隨后其清除能力趨于平緩，其IC50值分別為0.875 和0.501 mg/mL。在相同濃度條件下，多酚提取物對(duì)兩種自由基的清除能力均低于抗壞血酸。此結(jié)果與劉伯言[35]研究結(jié)果一致。多酚提取物的抗氧化作用可能與其結(jié)構(gòu)有關(guān)，肉蓯蓉多酚中酚羥基含量越豐富，生物活性就越強(qiáng)，同時(shí)分子中共軛體系增加，活性增強(qiáng)。

圖11 多酚提取物對(duì)DPPH 自由基的清除能力Fig.11 DPPH radical scavenging activity of polyphenol extracts

圖12 多酚提取物對(duì)ABTS+自由基的清除能力Fig.12 ABTS+ radical scavenging activity of polyphenol extracts

3 結(jié)論

本文建立了一種綠色、快速的從肉蓯蓉中提取多酚類化合物的方法。以脯氨酸-丙三醇（摩爾比2:5）制備的低共熔溶劑（DES）為萃取溶劑，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面法優(yōu)化了超聲波輔助低共熔溶劑（UAE-DES）提取肉蓯蓉多酚的最佳提取工藝：超聲溫度40 ℃，液料比45 mL/g、含水量40%、超聲時(shí)間28 min，在此條件下多酚得率為37.76 mg/g DW。UAE-DES 提取肉蓯蓉多酚的過(guò)程符合Fick 定律，并建立了肉蓯蓉多酚超聲波輔助提取的二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。肉蓯蓉多酚提取物對(duì)DPPH 和ABTS+自由基具有較強(qiáng)的清除能力，其IC50值分別為0.875 和0.501 mg/mL。UAE-DES 具有環(huán)境友好、成本低廉、萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)，后續(xù)將對(duì)UAE-DES 提取成本、環(huán)境污染等方面繼續(xù)進(jìn)行研究，為從植物材料中提取多酚類生物活性化合物提供了理論依據(jù)。