一例大口黑鱸混合感染錨頭蚤和諾卡氏菌病的診治

趙良煒,徐赟霞,王 禹,馮守明,張振國(guó)

(天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,天津 300400)

大口黑鱸(Micropterussalmoides),俗稱加州鱸魚,隸屬鱸形目(Perciformes),鱸亞目(Percoidei),太陽魚科 (Centrarchidae),黑鱸屬 (Micropterus),已經(jīng)成為中國(guó)淡水養(yǎng)殖中非常重要的養(yǎng)殖品種[1],天津地區(qū)具有一定的養(yǎng)殖規(guī)模。由于大口黑鱸肉質(zhì)鮮美、養(yǎng)殖利潤(rùn)相對(duì)較高等,備受養(yǎng)殖戶的青睞,因此養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大,養(yǎng)殖密度較高,隨之帶來養(yǎng)殖環(huán)境的惡化,細(xì)菌病、病毒病、寄生蟲病、真菌病接踵而來,嚴(yán)重威脅著大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。大口黑鱸常見細(xì)菌病有諾卡氏菌病、爛鰓病、白皮病、腸炎病等,病毒性疾病主要有虹彩病毒和彈狀病毒病,寄生蟲病主要有錨頭蚤、車輪蟲、杯體蟲等,真菌病主要有水霉病和綿霉病[2]。

2022年7月,天津市某養(yǎng)殖戶反映,其養(yǎng)殖的大口黑鱸不吃食,有死亡的現(xiàn)象,死亡率達(dá)到10%以上。筆者接到養(yǎng)殖戶求助,趕赴現(xiàn)場(chǎng),詢問情況,觀察魚在池塘的活動(dòng)情況,將瀕死大口黑鱸帶回實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步的檢測(cè)。

1 臨床癥狀

患病大口黑鱸反應(yīng)遲鈍,游動(dòng)緩慢,浮于水面,攝食量減少,每天有少量的死亡。病魚體表、頭部及鰭條有大量點(diǎn)狀的出血點(diǎn),呈小紅斑狀,個(gè)別出血點(diǎn)有潰爛傾向,頭部肉眼可見大量錨頭蚤附著(見封三圖1)。打開腹腔,可見肝臟腫大、發(fā)白,顏色不均,腹腔內(nèi)有腹水,但未見明顯結(jié)節(jié)(見封三圖2)。

2 細(xì)菌檢測(cè)

2.1 細(xì)菌分離

在無菌條件下,從瀕死的大口黑鱸肝臟、脾臟等部位劃線于腦心浸液瓊脂(見封三圖3)和血平板上(見封三圖4),置于恒溫培養(yǎng)箱中,28 ℃下培養(yǎng)7 d,選取優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行純化。菌落形態(tài)干燥、邊緣不規(guī)則,一碰即落,與諾卡氏菌形態(tài)非常相似,命名為L(zhǎng)Y-1。

2.2 細(xì)菌鑒定

采用細(xì)菌的16S rDNA通用引物對(duì)細(xì)菌LY-1的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到1 398 bp的擴(kuò)增片段,PCR產(chǎn)物送蘇州金唯智生物科技有限公司測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在NCBI進(jìn)行BLAST比對(duì)分析,分離菌株LY-1與鰤?mèng)~諾卡氏菌(Nocardiaseriolae)同源性最高。因此選擇水產(chǎn)養(yǎng)殖中報(bào)道的鰤?mèng)~諾卡氏菌(Nocardiaseriolae)、殺鮭諾卡氏菌(N.salmoncide)、星形諾卡菌(N.asteroides)、豚鼠耳炎諾卡氏菌(N.otitidiscavianon)做系統(tǒng)發(fā)育樹分析,結(jié)果LY-1與鰤?mèng)~諾卡氏菌聚為一支(見圖5),結(jié)合分離菌株形態(tài)及16S rDNA鑒定結(jié)果將其鑒定為鰤?mèng)~諾卡氏菌。

圖5 LY-1基于16S rRNA 系統(tǒng)發(fā)育樹

3 病毒檢測(cè)

近幾年,大口黑鱸感染虹彩病毒的報(bào)道較多。2008—2011年,廣東佛山養(yǎng)殖的大口黑鱸頻發(fā)疾病,王慶等[3]從發(fā)病大口黑鱸體內(nèi)檢測(cè)并分離到腫大細(xì)胞病毒屬和蛙病毒屬虹彩病毒。筆者參考其腫大細(xì)胞病毒屬和蛙病毒屬引物序列,提取瀕死大口黑鱸肝脾腎基因組DNA,并進(jìn)行了虹彩病毒PCR檢測(cè),患病魚體內(nèi)未檢測(cè)到虹彩病毒基因片段,故排除虹彩病毒引起的死亡。

4 治療方案

經(jīng)過現(xiàn)場(chǎng)問詢、魚塘觀察、臨床解剖、細(xì)菌分離、病毒PCR檢測(cè)等手段,初步診斷為發(fā)病大口黑鱸為錨頭蚤感染,體表受傷后進(jìn)一步感染鰤?mèng)~諾卡氏菌,但屬于早期感染,還未形成病理性結(jié)節(jié)等癥狀,因此診斷為錨頭蚤和諾卡氏菌混合感染。參考康振亞等[4]的研究, 約20%的諾卡氏菌對(duì)氟苯尼考敏感,結(jié)合水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥明白紙(2020年),推薦治療方案為先使用聚維酮碘進(jìn)行消毒,然后用氟苯尼考拌喂,劑量按照使用說明書,一周后大口黑鱸死亡漸緩,10 d后基本恢復(fù)正常。