藥對紫蘇-干姜揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析①

鄭千業(yè),李淑賢

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

藥對是中藥配伍的核心內(nèi)容,是構(gòu)成復(fù)方的基本單位[1]。配伍,即為有選擇性的將兩種或兩種以上的具有協(xié)同作用的單味藥混合在一起使用,從而達(dá)到提高藥用療效的效果。紫蘇是唇形科一年生草本植物,它是早期常用的中草藥之一,全草都具有很好的藥用價(jià)值,是一種多功能的草本植物[2],在臨床中發(fā)揮重要作用。紫蘇葉油為紫蘇葉子經(jīng)過水蒸氣蒸餾法提取后的具有揮發(fā)性不溶于水的液體,紫蘇揮發(fā)油不僅具有抑制細(xì)菌產(chǎn)生,防止疾病危害身體健康,還具有抗癌抗炎、解熱鎮(zhèn)靜、止血等作用[3～6]。干姜為姜科姜屬多年生草本植物,它干燥的根莖形狀是扁平狀、香味特殊、味道辛辣、有些微溫[7]。干姜的屬性辛、溫、大熱類,干姜可驅(qū)散體內(nèi)寒氣、打通血脈,還可治療嘔吐、止瀉、四肢寒冷、腹部冷痛、痰多喘咳類疾病[8]。關(guān)于紫蘇和干姜單味藥中揮發(fā)油化學(xué)成分已有許多報(bào)道,但對紫蘇-干姜藥對配伍揮發(fā)油化學(xué)成分分析未見報(bào)道,本次實(shí)驗(yàn)首次采用GC-MS分析藥對揮發(fā)油,對單味藥中揮發(fā)油和藥對揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行比較以及新生成的化學(xué)成分藥理作用進(jìn)行討論,為臨床上藥物配伍治療提供科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A/5975C型氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國安捷倫科技公司);揮發(fā)油提取器(廈門海標(biāo)科技有限公司);正己烷(分析純)(南京東方之珠工貿(mào)有限公司);無水硫酸鈉(廊坊鵬彩精細(xì)化工有限公司);正己烷(色譜純)(濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工有限公司); 蒸餾水(實(shí)驗(yàn)室自制);用于提取揮發(fā)油的中藥材紫蘇和干姜,采購于佳木斯市寶泰大藥房,并經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)化學(xué)實(shí)驗(yàn)中心宗希明高級實(shí)驗(yàn)師鑒定。

1.2 揮發(fā)油提取與供試液制備

將紫蘇和干姜粉碎,過40目篩,用天平分別精密稱量紫蘇藥材粉末50g,干姜藥材粉末50g,將兩種藥粉混合,裝入1000mL的圓底燒瓶中按照2020版《中國藥典》(四部)“揮發(fā)油提取法”甲法進(jìn)行提取,提取5h,得到淡黃色的透明液體,用無水硫酸鈉干燥,靜置,得到紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油。

1.3 GC-MS測定

1.3.1色譜條件

色譜柱為HP-5MS(5%苯甲基聚硅氧烷)彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm);載氣為高純氦氣;以每分鐘1.0mL的氦氣為載氣的流速;分流進(jìn)樣的比例為10∶1;進(jìn)樣口溫度250℃;采用升高溫度的辦法升高色譜柱的溫度:開始的溫度為50℃柱溫,以4℃每分鐘速率升高至160℃恒溫15min,再以4℃每分鐘速率升高溫度至280℃;以2μL進(jìn)樣。

1.3.2質(zhì)譜條件

電離方法是電子的轟擊離子源(EI);70 eV的電子的能量;在270℃的傳輸?shù)木€路之中;離子源溫度230℃,四級桿溫度為150℃,掃描質(zhì)量范圍為20～600m/z;以全掃描的掃描模式進(jìn)行數(shù)據(jù)的整理與收集;溶劑延遲5min。

1.3.3程序升溫

開始的溫度為50℃,以4℃每分鐘升高溫度到140℃,保持3min,之后再以4℃每分鐘,從140℃升高溫度到260℃,保持15min。

1.3.4揮發(fā)油的測定與分析

在質(zhì)譜工作站中,分析完整的色譜峰并通過NIST08譜庫進(jìn)行匹配。

2 結(jié)果

2.1 紫蘇-干姜揮發(fā)油分析

通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測藥對紫蘇-干姜的揮發(fā)油化學(xué)成分,得到了紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS總離子流色譜圖,見圖1。

圖1 紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS總離子流色譜圖

2.2 揮發(fā)油中的化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果

按照上述的測試條件下用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析,得到相應(yīng)的紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS總離子流色譜圖,結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索,將所分離化合物的質(zhì)譜圖與NIST08譜庫進(jìn)行匹配,參考質(zhì)譜的裂解規(guī)律和相關(guān)文獻(xiàn)的檢索解析化合物,運(yùn)用峰面積歸一化法計(jì)算其百分含量,對藥對的揮發(fā)油成分進(jìn)行鑒定和分離,得出紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油的化學(xué)成分及其含量,見表1。

表1 紫蘇-干姜藥對揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果

3 討論

藥對功效的物質(zhì)基礎(chǔ)不等于單味藥材的疊加,是配伍后化學(xué)成分變化的結(jié)果[9]。藥對配伍會出現(xiàn)一定的相互作用關(guān)系,藥對配伍適當(dāng)與否直接影響到藥物的治療效果,不同藥對配伍可以構(gòu)成不同功效的處方。紫蘇性溫、味辛,有解表散寒、行氣和胃的功效;干姜性熱、味辛,具有溫中散寒、回陽通脈的作用。兩種單味藥的性味相似,配伍使用時(shí)可能會相互促進(jìn),產(chǎn)生協(xié)同作用增強(qiáng)藥效。

本研究采用GC-MS技術(shù)對藥對紫蘇-干姜的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,一共得到藥對紫蘇-干姜揮發(fā)油的化學(xué)成分為70種,相對含量較高的是(1S-順)-1,2,3,5,6,8α-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲基乙基)-萘、(S)-6-甲基-1-異丙基-3-(1-甲基亞乙基)-6-乙烯基環(huán)己烯、桉葉油醇、α-柏木烯、香樹烯、莰烯、2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)雙環(huán)[3.1.1]-2-庚烯、α-人參烯、肉豆蔻酸、(1R,4aS,8aS)-7-甲基-4-亞甲基-1-丙基-2,3,4a,5,6,8a-六氫-1H-萘、(E)-7,11-二甲基-3-亞甲基-1,6,10-十二碳三烯、α-蒎烯、1,2,4a,5,6,8a-六氫-1-異丙基-4,7-二甲基萘,分別占揮發(fā)油總量的5.90%、4.31%、4.28%、3.86%、3.29%、2.16%、2.14%、1.68%、1.24%、0.98%、0.83%、0.81%、0.77%。在主要的揮發(fā)油成分中,桉葉油醇、α-柏木烯具有一定抗炎抑菌的作用,而桉葉油醇在哮喘中具有抗炎活性,并有望成為上、下呼吸道疾病的黏液溶解劑。查閱單味藥紫蘇和干姜的相關(guān)文獻(xiàn)可知,紫蘇揮發(fā)油的主要成分有乙酸龍腦酯、亞麻酸、(1S-順)-1,2,3,5,6,8α-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲基乙基)-萘、2,2'-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基)苯酚、鄰苯二甲酸二丁酯和肉豆蔻酸等。干姜揮發(fā)油的主要成分有姜烯、姜黃烯、β-水芹烯、α-柏木烯、月桂酸、莰烯、3-蒈烯和檜烯等。通過GC-MS技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)配伍使用后的藥物會出現(xiàn)單味藥中不存在的物質(zhì)。如(1S-順)-1,2,3,5,6,8α-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲基乙基)-萘、鄰苯二甲酸二丁酯、香葉基芳樟醇等。原因是在提取揮發(fā)油的過程中發(fā)生了一系列化學(xué)反應(yīng),也可能是兩種單味藥配伍的過程中,使得藥物之間相互促進(jìn)有效成分的溶出,或是由于加熱破壞了藥材的油室組織,從而導(dǎo)致在藥材中溶出一些新的化學(xué)成分。不同配伍比例的紫蘇與干姜也會對揮發(fā)油的成分產(chǎn)生一定的影響,目前對紫蘇和干姜配伍是否產(chǎn)生良好的藥理協(xié)同作用需進(jìn)一步探索,在其基礎(chǔ)上可進(jìn)一步研究藥對的配伍比例以達(dá)到最好的治療效果。由結(jié)果可知,對新生成的化學(xué)物質(zhì)是否具有協(xié)同作用、藥理作用以及單味藥中主要成分的變化還需進(jìn)一步研究。本研究通過GC-MS技術(shù)對藥對紫蘇-干姜的成分進(jìn)行了合理分析,為藥對的臨床應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ),一定程度上促進(jìn)了中藥藥對的配伍理論發(fā)展。