姜酚純化前后對胰脂肪酶抑制活性、抗氧化活性比較研究

徐菁， 王秀芬， 劉曉燕，2*

（1.貴陽學(xué)院食品與制藥工程學(xué)院，貴陽 550005； 2.貴陽學(xué)院貴州省果品加工工程技術(shù)研究中心， 貴陽 550005）

小黃姜（Zingiber officinaleRoscoe）別名穿地龍，姜科姜屬植物，切面呈純黃色，辛辣味較濃，纖維較細(xì)[1]，是一種傳統(tǒng)的藥食兩用植物，姜酚是姜中具有生物活性的天然酚類化合物，主要包括6-姜酚、8-姜酚等[2]，其中6-姜酚含量最高。姜酚具有降血糖血脂、抗腫瘤、抗氧化、抑菌、降血壓等多種生理活性[3]。目前對姜酚生理活性研究多集中于生姜姜酚粗提物[4-5]，但姜酚粗提物中含有許多雜質(zhì)，會間接影響其生理活性，鑒于此，研究姜酚的分離純化對提高姜酚的利用附加值具有重要意義。

目前已有的分離純化姜酚技術(shù)主要有超臨界流體萃取[6]、柱層析法[7]等。但這些方法復(fù)雜、耗時(shí)、試驗(yàn)成本高。大孔吸附樹脂是新型高分子聚合物，具有吸附性好、穩(wěn)定性好、環(huán)保、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，故選擇大孔樹脂法對姜酚進(jìn)行初步分離純化。不同型號的大孔樹脂極性大小不同，對姜酚的吸附分離效果也不同，本研究采用4種不同極性的樹脂NKA-9（極性）、AB-8（弱極性）、D4020（非極性）和D101（非極性）對姜酚進(jìn)行純化分離，并對其最佳純化工藝進(jìn)行探討，比較姜酚純化前后對豬胰脂肪酶的抑制效果和抗氧化能力，為小黃姜姜酚的開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑 本研究所用試驗(yàn)材料為小黃姜姜酚粗提物凍干粉。

主要試劑：6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品（C10089550）購自上海麥克林生化科技有限公司；8-姜酚（No.718A022）、10-姜酚（No.718A022）標(biāo)準(zhǔn)品購自北京索萊寶科技有限公司；大孔樹脂AB-8、D101、NKA-9、D4020購自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；豬胰脂肪酶（CASNo:53608-75-6) 購自上海源葉生物科技有限公司；其余試劑均為分析純。

1.1.2 儀器設(shè)備 RC-FA-C型電子分析天平，北京瑞誠永創(chuàng)科技有限公司；TPL15型高速冷凍離心機(jī)，長沙安泰儀器有限公司；PU-ST-3C型pH計(jì)，湖北康電科學(xué)儀器有限公司；N-FC-104型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，浙江凱敏儀器有限公司；LC-20A型高效液相色譜儀，日本島津公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 大孔樹脂的預(yù)處理 取NKA-9、AB-8、D4020和D101共4種型號的大孔樹脂，用無水乙醇浸泡24 h后用蒸餾水沖洗至無味；先用5% HCl溶液浸泡樹脂8 h，蒸餾水反復(fù)沖洗至中性，后用5% NaOH溶液浸泡樹脂8 h，蒸餾水反復(fù)沖洗至中性，50 ℃烘干備用。

1.2.2 樹脂靜態(tài)吸附與解吸動力學(xué)研究 精密稱量經(jīng)預(yù)處理后的4種型號樹脂各3 g于錐形瓶內(nèi)，分別加入50 mL質(zhì)量濃度為0.55 mg·mL-1的小姜酚粗提液，于搖床112 r·min-1條件下振蕩吸附，1 h取樣測定1次姜酚濃度（C1），共測定10次，繪制4種樹脂的靜態(tài)吸附動力學(xué)曲線，達(dá)到平衡后，用蒸餾水反復(fù)沖洗4種吸附飽和樹脂，直至流出液無雜質(zhì)，用50 mL 95%乙醇溶液進(jìn)行振蕩洗脫，1 h取樣測定1次姜酚濃度（C2），繪制4種樹脂靜態(tài)解吸動力學(xué)曲線。從吸附和解吸2方面，確定最佳大孔樹脂型號。

參照劉軍偉等[8]方法，以香草醛質(zhì)量濃度為X軸、吸光度為Y軸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：

y=0.0624x-0.1266，相關(guān)系數(shù)R2=0.998，由此標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算姜酚質(zhì)量濃度。

式中，C0為初始姜酚質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；C1為上樣液過柱吸附后流出液中的姜酚質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；C2為解析液洗脫吸附樹脂后流出液中姜酚的質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；V1為粗提液體積（mL）；V2為洗脫液體積（mL）；M為樹脂質(zhì)量（g）。

為了更好的描述上述吸附過程，采用準(zhǔn)一級動力學(xué)模型、準(zhǔn)二級動力學(xué)模型和顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型對靜態(tài)吸附動力學(xué)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析論證。

準(zhǔn)一級動力學(xué)模型如下。

準(zhǔn)二級動力學(xué)模型如下。

顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型如下。

式中，Qe為樹脂對姜酚吸附平衡時(shí)的吸附量（mg·g-1）；Qt為t時(shí)刻樹脂吸附量（mg·g-1）；K1、K2為動力學(xué)參數(shù)；Kd為顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型的吸附速率常數(shù)；C為顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型的常數(shù)（mg·g-1）。

1.2.3 樹脂靜態(tài)吸附等溫線 分別在25、30、35 ℃恒溫?fù)u床中，精確稱量3 g最佳樹脂于錐形瓶內(nèi)加入50 mL不同質(zhì)量濃度的粗提液，使其振蕩至飽和吸附后，測定不同恒溫條件下上清液中姜酚的質(zhì)量濃度，以上清液姜酚質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)，以吸附平衡時(shí)的吸附量作為縱坐標(biāo)繪制樹脂等溫吸附曲線，同時(shí)利用Langmuir、Freundlich吸附模型，得出相應(yīng)等溫吸附方程。

Langmuir等溫吸附公式如下。

Freundlich吸附模型公式如下。

式中，Ce為吸附穩(wěn)定后流出液中姜酚的質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；Qe為吸附穩(wěn)定時(shí)的吸附量（mg·g-1）；Qm為最大吸附量（mg·g-1）；Ka為朗格繆爾（Langmuir）方程中大孔樹脂和多酚作用力強(qiáng)弱的系數(shù)，Kb為弗蘭德里希（Freundlich）方程中與大孔樹脂吸附量相關(guān)的系數(shù)。

1.2.4 AB-8樹脂動態(tài)吸附和解吸條件優(yōu)化 吸附條件的優(yōu)化：稱取樹脂11 g，濕法裝柱，考察不同上樣質(zhì)量濃度（0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 mg·mL-1）姜酚粗提液對吸附率的影響。在最佳上樣質(zhì)量濃度條件下，采用NaOH和HCl調(diào)上樣液pH，考察上樣液不同pH（4、5、6、7、8）對吸附率的影響。在最佳質(zhì)量濃度和pH條件下，將上樣液分別以1.0、1.5、2.0 mL·min-1的流速上柱，按每管5 mL收集流出液，分別測定每管流出溶液的姜酚質(zhì)量濃度。

解吸條件的優(yōu)化：吸附完畢后，用蒸餾水反復(fù)沖洗柱子去除雜質(zhì)，沖洗液為無色透明時(shí)用乙醇溶液進(jìn)行洗脫，分別選擇體積分?jǐn)?shù)為50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，控制1.5 mL·min-1洗脫流速，對吸附飽和后的樹脂進(jìn)行洗脫，直至洗脫完全，收集洗脫液，測定姜酚質(zhì)量濃度，計(jì)算各自解吸率。以最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)，分別以1.0、1.5、2.0 mL·min-1的洗脫速度過柱解吸，每次收集流出液5 mL為1管，測定各管流出液的姜酚質(zhì)量濃度。

1.2.5 小黃姜姜酚純度效果檢驗(yàn) 純化前后純度測定：將小黃姜姜酚粗提液及純化后的洗脫液減壓蒸餾除去溶劑，冷凍干燥后得小黃姜姜酚粗品與精制品，分別準(zhǔn)確稱取80 mg，無水乙醇定容至50 mL，即為測試液，測定多酚質(zhì)量濃度，采用下面公式計(jì)算粗多酚與精制多酚的純度。

式中，C為根據(jù)香草醛標(biāo)曲[9]計(jì)算得到的姜酚質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；V為溶液體積（mL）；m多酚質(zhì)量（g）；n為稀釋倍數(shù)。

高效液相色譜法測定純化前后6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚含量。色譜條件：流動相A（0.1%磷酸水）-流動相B（乙腈）；柱溫30 ℃；流速0.7 mL·min-1；檢測波長280 nm，流動相洗脫方法見表1。準(zhǔn)確稱取6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚對照品20 mg，用60%甲醇溶液定容至10 mL容量瓶，分別以3種姜酚對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到3種姜酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為：y=4235124x+220589，R2=0.9988（6-姜酚）；y=8698048x+3413，R2=0.9972（8-姜酚）；y=900412x+1546.5，R2=0.9981（10-姜酚）。根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算純化前后3種姜酚含量。

表1 高效液相色譜法梯度洗脫程序Table 1 HPLC gradient elution schedule

1.2.6 抗氧化活性的研究 還原能力的測定參照巫永華等[10]的方法；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine，DPPH）自由基清除能力的測定參照譚敏華等[11]的方法；2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽[2，2-diazo-bis (3-ethyl-benzothiazole-6-sulfonic acid)diammonium， ABTS]自由基清除能力的測定參照任旭等[12]的方法；羥基自由基清除能力測定參照劉文穎等[13]的方法。以上測定方法按吸光度大小合理范圍，試劑略微調(diào)整。

1.2.7 胰脂肪酶活性測定 參照裴文清等[14]方法并做調(diào)整，各反應(yīng)物劑量見表2，依次加入pH 8.0的Tris-HCl緩沖液、抑制劑溶液和酶溶液，混合均勻，于37 ℃培養(yǎng)箱恒溫反應(yīng)10 min后，加入底物溶液對硝基苯磷酸二鈉六水合物（p-nitropheny/phosphate， PNPP）在相同反應(yīng)條件下反應(yīng)20 min。最后于405 nm處測定其吸光值，計(jì)算各樣品對胰脂肪酶的抑制率，陽性對照為奧利司他，計(jì)算公式如下。

表2 反應(yīng)體系各溶液加入量Table 2 Amount of each solution in the reaction system（μL）

式中，A1為樣品組；A0為樣品對照組；B1為對照組；B0為空白對照組。

1.3 數(shù)據(jù)分析與處理

所有試驗(yàn)重復(fù)3次，數(shù)據(jù)采用Origin 8.5繪圖，用SPSS 25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 樹脂靜態(tài)吸附-解吸動力學(xué)研究結(jié)果

2.1.1 靜態(tài)吸附動力學(xué)曲線繪制 由圖1可知，4種型號樹脂在1～3 h時(shí)樹脂吸附量增幅較大，3～5 h時(shí)樹脂吸附量增幅逐漸平穩(wěn)，5 h時(shí)樹脂吸附基本達(dá)到飽和狀態(tài)。以平衡時(shí)吸附量Qe為指標(biāo)，4種樹脂吸附能力的大小順序一致為AB-8＞D101＞D4020＞NKA-9，說明樹脂AB-8對姜酚的吸附性能較好，相比其他3種樹脂來說更適合于姜酚的純化。

圖1 AB-8、D101、D4020和NKA-9樹脂靜態(tài)吸附動力學(xué)曲線Fig. 1 AB-8、D101、D4020 and NKA-9 resin static adsorption kinetic curve

采用顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型、一級和二級動力學(xué)模型對動力學(xué)曲線試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析論證，結(jié)果見表3。從表3可知，4種樹脂二級動力學(xué)模型R2均大于0.998，高于顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型和準(zhǔn)一級動力學(xué)模型，且平衡時(shí)吸附量Qe值的大小順序?yàn)锳B-8＞D101＞D4020＞NKA-9，與圖1吸附動力學(xué)曲線分析結(jié)果一致，說明準(zhǔn)二級動力學(xué)模型能更好地描述4種樹脂對小黃姜姜酚吸附過程。

表3 AB-8、D101、D4020和NKA-9大孔樹脂多酚吸附動力學(xué)方程和參數(shù)Table 3 Adsorption kinetic equations and parameters of polyphenols on AB-8， D101， D4020 and NKA-9 macroporous resins

2.1.2 靜態(tài)解吸動力學(xué)曲線繪制 由圖2可知，4種樹脂在2 h后基本達(dá)到終點(diǎn)，且平衡時(shí)解吸量的大小順序?yàn)?AB-8＞D101＞D4020＞NKA-9，解吸量排序同吸附量一致，因此從靜態(tài)吸附和解吸2方面考慮，篩選出AB-8大孔樹脂最佳。

圖2 AB-8、D101、D4020和NKA-9樹脂靜態(tài)解吸動力學(xué)曲線Fig. 2 AB-8、D101、D4020 and NKA-9 resin static desorption kinetic curve

2.2 樹脂靜態(tài)吸附等溫曲線繪制

吸附等溫線有助于了解吸附劑與吸附質(zhì)之間的相互作用，優(yōu)化性能參數(shù)和節(jié)約能源[15]。由圖3可知，在25～35 ℃范圍內(nèi)，隨著溫度的逐漸升高，平衡時(shí)的吸附量依次降低，說明在高溫條件下，吸附質(zhì)容易向吸附劑表面遷移，導(dǎo)致溫度和吸附量成反比，由此可知吸附溫度在25 ℃時(shí)能更有效從樣液中吸附吸附質(zhì)。

圖3 AB-8大孔樹脂吸附等溫線Fig. 3 Adsorption isotherm of AB-8 macroporous resin

分別利用Langmuir和Freundlich方程對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，考察AB-8大孔樹脂對小黃姜姜酚吸附數(shù)據(jù)與2種熱力學(xué)模型的擬合程度，分別得到相應(yīng)的熱力學(xué)方程及參數(shù)，從表4和表5中可以看出，在25～35 ℃時(shí)，隨著溫度的升高，Ka、Qm逐漸降低，與吸附等溫線結(jié)論一致。Langmuir等溫方程的R2值均大于Freundlich等溫方程，表明Langmuir等溫方程對AB-8大孔樹脂對小黃姜姜酚等溫吸附過程的描述更合適。

表4 Langmuir 等溫吸附方程及相關(guān)參數(shù)Table 4 Langmuir isothermal adsorption equation and related parameters

2.3 AB-8樹脂動態(tài)吸附條件的優(yōu)化結(jié)果

2.3.1 上樣量優(yōu)化 由圖4可知，姜酚質(zhì)量濃度為0.80～1.60 mg·mL-1時(shí)，吸附率呈上升趨勢，當(dāng)上樣質(zhì)量濃度大于1.60 mg·mL-1時(shí)，吸附劑吸附逐漸飽和，部分吸附質(zhì)未被吸附就流出，導(dǎo)致吸附率下降[16]，綜合考慮，選擇1.60 mg·mL-1為最佳上樣質(zhì)量濃度。

圖4 上樣質(zhì)量濃度、pH、流速對吸附效果的影響Fig. 4 Effect of sample mass concentration ， pH and flow rate on adsorption effect

2.3.2 pH、流速對吸附效果的影響 樹脂的吸附率隨小黃姜姜酚上樣液pH的升高呈先上升后下降趨勢，當(dāng)pH＞4.0時(shí)，樹脂的吸附率降低，表明酸性條件能保持多酚的酚羥基結(jié)構(gòu)，更有利于AB-8樹脂對小黃姜姜酚的吸附（圖4）。因此，小黃姜姜酚上樣液最佳pH為4.0。

流出液中的多酚質(zhì)量濃度為初始上樣液多酚質(zhì)量濃度的1/10時(shí)，為樹脂的泄漏點(diǎn)[17]。泄漏點(diǎn)越早出現(xiàn)表明上樣液流經(jīng)大孔樹脂出現(xiàn)吸附不充分的現(xiàn)象越早，1.0 mL·min-1上樣流速時(shí)，達(dá)到樹脂吸附泄漏點(diǎn)的上樣體積為80 mL左右；1.5 mL·min-1上樣流速時(shí)，達(dá)到樹脂吸附泄漏點(diǎn)的上樣體積為55 mL左右；2.0 mL·min-1上樣流速時(shí)，達(dá)到樹脂吸附泄漏點(diǎn)的上樣體積為25 mL左右（圖4）。鑒于以上結(jié)果，得出最佳流速為1.5 mL·min-1。

2.4 AB-8樹脂解吸條件的優(yōu)化結(jié)果

由圖5可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)增大至80%后，解吸率開始逐漸平緩，乙醇體積分?jǐn)?shù)過大會導(dǎo)致與小黃姜姜酚的極性差距較大，解吸率會降低，部分吸附雜質(zhì)也會競爭脫附，所以綜合考慮確定乙醇體積分?jǐn)?shù)80%為最優(yōu)。隨著解吸劑流速增加解吸效果變差，這是因?yàn)樵谳^低解吸流速下解吸劑與樹脂接觸時(shí)間長，解吸下來的姜酚較多。相反，在較高解吸流速下解吸劑與樹脂接觸時(shí)間短，則解析下來的姜酚較少[18-19]。但是在較低解吸速率下生產(chǎn)周期太長，不利于生產(chǎn)。鑒于此，選擇中間流速1.5 mL·min-1為最佳解析流速。

圖5 解吸劑體積分?jǐn)?shù)和解吸流速對解析效果的影響Fig. 5 Effect of desorption agent volume fraction and desorption flow rate on resolution effect

2.5 AB-8大孔樹脂對小黃姜姜酚純化效果檢驗(yàn)

經(jīng)過AB-8大孔樹脂分離純化后，小黃姜姜酚純度由之前的24.25%提高到了80.99%，表明AB-8大孔樹脂對小黃姜姜酚有較好的純化作用，能夠?qū)崿F(xiàn)成分的富集。如圖6所示，純化前6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量分別為2.96%、0.28%和0.10%，純化后3種姜酚含量分別為14.18%、1.67%和0.18%，純化后3種姜酚的含量明顯提高。

圖6 樣品色譜圖Fig. 6 Sample chromatogram

2.6 姜酚純化前后體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果

小黃姜姜酚經(jīng)AB-8樹脂純化后，純化物對總還原力、DPPH、ABTS、羥基自由基自由基清除能力高于粗提物（圖7）。由此可知酚類化合物經(jīng)大孔樹脂純化后總酚含量升高導(dǎo)致抗氧化能力增強(qiáng)，這與巫永華等[20]采用AB-8樹脂純化山楂葉多酚的研究結(jié)果一致。

圖7 姜酚純化前后對還原力、DPPH、ABTS、羥基自由基清除能力Fig.7 Gingerol before and after purification on reducing power， DPPH， ABTS， hydroxyl radical scavenging ability

2.7 姜酚純化前后對胰脂肪酶抑制效果

由圖8可得出，在0～6 mg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，對胰脂肪酶抑制效果排序?yàn)椋航哟痔嵛铮冀蛹兓铮紛W利司他，而在較高質(zhì)量濃度4～6 mg·mL-1范圍內(nèi)，姜酚純化物對胰脂肪酶的抑制率明顯接近于陽性對照奧利司他，說明姜酚純化物對胰脂肪酶具有較好的抑制效果，姜酚粗提物抑制率（45.6±2.11)%，IC50（拮抗劑的半抑制濃度，值越小說明抑制效果越好）為6.69 mg·mL-1；姜酚純化物抑制率（60.4±1.83)%，IC50為4.45 mg·mL-1；奧利司他（陽性對照）抑制率（71.17±2.68)%，IC50為3.35 mg·mL-1。

圖8 姜酚純化前后對胰脂肪酶的抑制效果Fig. 8 Inhibitory effect of gingerol on pancreatic lipase before and after purification

3 討論

3.1 姜酚大孔樹脂純化工藝研究

大孔樹脂的選擇需根據(jù)所分離化合物的結(jié)構(gòu)特征來確定，不同型號的大孔樹脂極性不同，對多酚的吸附分離效果也不同，劉軍偉等[8]比較了5種不同極性樹脂吸附率，得出AB-8更適合于生姜多酚的純化研究。劉偉等[21]比較了6種不同極性樹脂的吸附率、吸附量和解析率，得出D101樹脂更適合于6-姜酚的純化研究。為進(jìn)一步準(zhǔn)確篩選出合適的樹脂種類，除考察靜態(tài)、動態(tài)吸附量等指標(biāo)外，還應(yīng)進(jìn)行靜態(tài)的吸附動力學(xué)研究。張沛等[22]在研究大孔樹脂純化黃芪毛蕊異黃酮工藝過程中，除考察靜態(tài)吸附量和吸附率等指標(biāo)外，還進(jìn)行了靜態(tài)吸附動力學(xué)研究，認(rèn)為僅憑吸附量、吸附率而不考慮動力學(xué)吸附特征來評價(jià)某種樹脂合適與否是不全面的。本研究以小黃姜姜酚粗提物為原材料，對NKA-9、AB-8、D4020和D101共4種樹脂進(jìn)行了靜態(tài)吸附-解吸動力學(xué)研究并繪制靜態(tài)動力學(xué)曲線，在此基礎(chǔ)上采用準(zhǔn)一級、二級和顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型對靜態(tài)動力學(xué)曲線數(shù)據(jù)進(jìn)行分析論證，并采用解吸量來衡量樹脂解析性能，結(jié)果表明準(zhǔn)二級動力學(xué)模型R2值均大于其余2種動力學(xué)模型，說明其能更好地闡述4種樹脂對小黃姜姜酚的吸附機(jī)理，4種樹脂對小黃姜姜酚吸附量和解析量大小順序均為AB-8＞D101＞D4020＞NKA-9，通過靜態(tài)吸附和解吸2方面篩選出最佳樹脂型號為AB-8。

在整個純化工藝過程中吸附條件和解析條件的選擇直接影響樹脂吸附性能，影響樹脂吸附的因素主要包括上樣溶液的質(zhì)量濃度、上樣溶液的pH、上樣的流速和體積；影響樹脂解吸的因素主要包括洗脫劑的體積百分比、洗脫流速和體積。劉偉等[21]研究D101型大孔樹脂純化姜油樹脂中的6-姜酚，上樣液質(zhì)量濃度為2 mg·mL-1，上樣流速為2 mL·min-1，以80%乙醇流速2 mL·min-1洗脫，純化后的6-姜酚純度從1.54%提高到71.32%。于艷靜等[23]研究HPD-950大孔樹脂純化生姜中的6-姜酚，上樣質(zhì)量濃度為2.1 mg·mL-1，pH 6.5，上樣流速1 mL·min-1，以65%乙醇溶液流速0.5 mL·min-1洗脫，純化后的6-姜酚純度可達(dá)34.43%。本研究AB-8大孔樹脂的動態(tài)吸附-解吸試驗(yàn)結(jié)果表明，AB-8樹脂動態(tài)純化姜酚最佳條件為上樣質(zhì)量濃度1.6 mg·mL-1，pH 4.0，上樣流速1.5 mL·min-1，以80%乙醇溶液流速1.5 mL·min-1洗脫，經(jīng)純化后姜酚純度達(dá)到80.99%，高效液相色譜結(jié)果表明6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚3種酚類單體物質(zhì)含量相比純化前提高了3倍以上，說明AB-8樹脂對小黃姜姜酚有較好的分離純化作用，能夠?qū)崿F(xiàn)成分的富集。

3.2 姜酚純化前后對胰脂肪酶抑制活性研究及體外抗氧化活性研究

隨著生活水平的提高，人們每天獲取的熱量往往大于消耗的熱量，熱量進(jìn)入體內(nèi)后得不到及時(shí)的消耗會引發(fā)高血脂癥，研究表明，胰脂肪酶是催化脂肪水解的關(guān)鍵酶，抑制其活性可以降低脂肪水解，延緩脂肪被人體所吸收，從而達(dá)到降脂的目的。目前，國內(nèi)對胰脂肪酶抑制活性方面的研究主要集中在天然提取物中的黃酮化合物[24]、多糖[25]、多酚[26]等活性成分上，其中植物多酚對胰脂肪酶的抑制研究較多，但尚未見姜酚對胰脂肪酶抑制活性的相關(guān)報(bào)道，鑒于此本研究測定了經(jīng)AB-8大孔樹脂純化后的姜酚純化物對胰脂肪酶活性的抑制，并與純化前對胰脂肪酶的抑制活性進(jìn)行比較，結(jié)果表明，純化后的姜酚對胰脂肪酶的抑制率明顯接近于陽性對照奧利司他，說明純化后的姜酚對胰脂肪酶具有較好的抑制效果。小黃姜姜酚經(jīng)AB-8樹脂純化后，純化物對DPPH、ABTS、羥基自由基自由基清除能力明顯高于粗提物，說明小黃姜姜酚純化后具有較強(qiáng)的抗氧化性，具有開發(fā)為抗氧化劑的潛力，為小黃姜姜酚進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。