黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖同步優(yōu)化提取及體外抗氧化分析

徐福飛 龐佳慧 吳雨龍 江海濤 李盛杰 霍光明 華 春

（1．南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210046；2．南京曉莊學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 211171；3．江蘇省高校特殊生物質(zhì)廢棄物資源化利用重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 211171）

菌質(zhì)是一種以藥食兩用真菌為發(fā)酵菌株，以中藥材或中藥渣為藥性基質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵的產(chǎn)物[1]。在發(fā)酵過程中，藥性基質(zhì)為真菌的生長(zhǎng)代謝提供營(yíng)養(yǎng)成分，而真菌代謝所產(chǎn)的酶反作用于藥性基質(zhì)改變其結(jié)構(gòu)與成分，從而生成新的活性成分，其含量高于真菌與藥性基質(zhì)的疊加，藥性基質(zhì)毒性得到降低[2]。竹黃菌是一種藥食兩用真菌，含黃酮、萜類等活性成分，具有抗氧化[3]、保肝[4]、抗菌、提高免疫力[5]等功效。

女貞子為木樨科植物女貞的果實(shí)[6]，經(jīng)90%乙醇提取后的女貞子渣中還含有黃酮、多糖、氨基酸等活性成分，可以作為藥性基質(zhì)[7-8]。黃貞菌質(zhì)是以女貞子渣為藥性基質(zhì)，以竹黃菌為發(fā)酵真菌，經(jīng)固體雙向發(fā)酵技術(shù)獲得的產(chǎn)物，該產(chǎn)物含有女貞子渣基質(zhì)、竹黃菌菌絲以及竹黃菌在女貞子渣基質(zhì)上的代謝產(chǎn)物。黃酮和天然多糖在抗氧化[9]、抗菌、抗炎[10]、抗病毒[11]、抗腫瘤[12]等方面均表現(xiàn)出較好的生物活性。傳統(tǒng)工藝是對(duì)同一物質(zhì)中黃酮和多糖常采用分批分次提取，存在提取過程煩瑣、效率低、成本高、費(fèi)時(shí)費(fèi)力等特點(diǎn)。本研究采用超聲波輔助液體雙相滲透法從黃貞菌質(zhì)中同步提取總黃酮與多糖，以響應(yīng)面CCD法優(yōu)化提取工藝條件，并測(cè)定黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖的體外抗氧化活性，為開發(fā)黃貞菌質(zhì)類飼料添加劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃貞菌質(zhì)由南京曉莊學(xué)院食品科學(xué)學(xué)院藥用菌物研究所提供。蘆丁和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海源葉生物有限公司；DPPH、ABTS、乙酸乙酯和無水乙醇購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

KQ.250B 超聲波清洗儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；RE-3000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；臺(tái)式冷凍干燥機(jī)（美國(guó)Labconco公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)熱電公司）。

1.3 試驗(yàn)條件

1.3.1 黃貞菌質(zhì)的制備

參考文獻(xiàn)[13-14]方法制備黃貞菌質(zhì)。稱取粉末狀女貞子渣53.3 g裝入發(fā)酵菌袋中，加入66.7 mL純凈水，攪拌均勻，于121 ℃滅菌30 min 后冷卻。竹黃菌菌種在馬鈴薯瓊脂固體培養(yǎng)基平板上活化，從活化的竹黃菌平板上挑取生長(zhǎng)良好的竹黃菌菌苔接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基，置于恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱，設(shè)置溫度27 ℃，轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)3 d。取一定量竹黃菌種子液接種于滅菌后的女貞子渣菌袋內(nèi)，采用無菌玻棒攪拌均勻，于27 ℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)30 d，直至菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)菌袋，發(fā)酵完成。將黃貞菌質(zhì)從菌袋中取出，40 ℃烘干，粉碎后裝入密封袋中，于-20 ℃保存。

1.3.2 ULDPM提取黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖

準(zhǔn)確稱取黃貞菌質(zhì)粉末10 g 于燒杯中，加入一定體積的乙酸乙酯（上相）和純凈水（下相），使用玻棒攪拌均勻，封上保鮮膜，轉(zhuǎn)移到超聲波儀中，設(shè)置一定的超聲功率、超聲溫度和超聲時(shí)間進(jìn)行處理，結(jié)束后將混合物以4 500 r/min 離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置至上相和下相分離。上層溶液和下層溶液分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)除去溶劑，下層濃縮液加入4 倍體積的95%乙醇醇沉，離心收集沉淀，隨后上相和下相沉淀經(jīng)真空冷凍干燥得黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖。

1.3.3 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的測(cè)定

1.3.3.1 黃貞菌質(zhì)總黃酮得率的測(cè)定參考文獻(xiàn)[15]的方法測(cè)定黃貞菌質(zhì)總黃酮得率。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=6.308 6X+0.049 6，R2=0.998；計(jì)算黃貞菌質(zhì)總黃酮得率。

式中：c為黃貞菌質(zhì)總黃酮提取液的質(zhì)量濃度（g/mL）；V為樣品定容體積（mL）；N為測(cè)定時(shí)樣液的稀釋倍數(shù)；M為黃貞菌質(zhì)粉末的質(zhì)量（g）。

1.3.3.2 黃貞菌質(zhì)多糖得率的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[16]的方法測(cè)定黃貞菌質(zhì)多糖得率。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按苯酚-硫酸法測(cè)定吸光度，得回歸方程為Y=5.821 4X+0.092 5，R2=0.991；計(jì)算黃貞菌質(zhì)多糖得率。

式中：c為黃貞菌質(zhì)多糖濃度（g/mL）；V為黃貞菌質(zhì)多糖溶液體積（mL）；N為稀釋倍數(shù)；M為黃貞菌質(zhì)粉末質(zhì)量（g）。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

以乙酸乙酯和純凈水為提取溶劑，根據(jù)不同上相液料比（3、6、9、12、15、18 mL/g）、下相液料比（5、10、15、20、25 mL/g）、超聲功率（40、50、60、70、80、90 W）、超聲溫度（30、35、40、45、50、55 ℃）和超聲時(shí)間（15、25、35、45、55、65 min）考察對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖得率的影響，選擇最佳工藝條件，各試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.5 響應(yīng)面CCD法優(yōu)化提取工藝設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以上相液料比、下相液料比、超聲功率、超聲溫度和超聲時(shí)間為自變量，以黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖得率為響應(yīng)值設(shè)計(jì)試驗(yàn)，并采用響應(yīng)面CCD 法分析各因素之間的交互作用，以確定獲得較高黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖得率的最佳工藝條件。響應(yīng)面試驗(yàn)因素和水平見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)的因素與水平

1.3.6 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖的體外抗氧化活性

經(jīng)優(yōu)化提取獲得的黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖分別配成濃度為0.1、0.2、0.4、0.8、1.4、2.0 g/L的待測(cè)液，配制相同濃度的維生素C（VC）溶液為對(duì)照，分別測(cè)定黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖對(duì)DPPH和ABTS的清除率及還原力。

1.3.6.1 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖的DPPH自由基清除能力

參考文獻(xiàn)[17]的方法，稍作改進(jìn)。天平稱取DPPH試劑1 mg用10 mL的無水乙醇溶解，得到濃度為0.1 g/L的DPPH 工作液，搖勻，取100 μL DPPH 工作液和100 μL不同濃度的待測(cè)樣品于酶標(biāo)板中充分混合，靜置30 min，于酶標(biāo)儀中517 nm 測(cè)定其吸光度，以VC 作為對(duì)照組。重復(fù)操作3次，求出清除率。

式中：A0為100 μL 無水乙醇加100 μL DPPH 的吸光度；A1為100 μL 樣品溶液加100 μL DPPH 的吸光度；A2為100 μL樣品溶液加100 μL無水乙醇的吸光度。

1.3.6.2 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖的ABTS自由基清除能力

參考文獻(xiàn)[17]的方法，稍作改進(jìn)。準(zhǔn)確稱取3.841 mg的ABTS 溶于1 mL 純水中，配置成7 mmol/L 的ABTS 儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確稱取過硫酸鉀0.672 3 mg 溶于1 mL 水中，配制2.45 mmol/L 過硫酸鉀儲(chǔ)備液。取上述兩種儲(chǔ)備液各0.2 mL 混合，于暗處室溫下反應(yīng)12～16 h。反應(yīng)結(jié)束后，將混合液用蒸餾水稀釋至A734nm處值為（0.70±0.02），形成ABTS+工作液（約稀釋45～55倍）。

取40 μL 不同濃度樣品溶液和160 μL ABTS+工作液，混勻后，于室溫下靜置6 min，在A734nm處測(cè)吸光值，以抗壞血酸作為對(duì)照組。重復(fù)操作3次，求出清除率。

式中：A0為40 μL 蒸餾水加160 μL ABTS+吸光度；A1為40 μL樣品溶液加160 μL ABTS+吸光度。1.3.6.3 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖還原力的測(cè)定

吸取0.5 mL 不同濃度的樣品溶液于5 mL 離心管中，依次加入0.2 mol/L 磷酸緩沖液（pH 值6.6）1.0 mL，1%鐵氰化鉀溶液1.0 mL，在50 ℃水浴反應(yīng)30 min 后冷卻。再加入10%三氯乙酸溶液1.0 mL，混勻后，4 000 r/min離心15 min。吸取離心后的上清0.5 mL 于2 mL 離心管中，加入等體積蒸餾水和0.1%三氯化鐵溶液100 μL，避光反應(yīng)30 min，于700 nm 下測(cè)定吸光值。其總還原力與吸光值的大小成正比。重復(fù)操作3次。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件和GP 6.0軟件進(jìn)行分析和處理，DE 8.0 響應(yīng)面軟件分析試驗(yàn)結(jié)果。P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 上相液料比對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖1）

圖1 上相液料比對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響

由圖1 可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率隨著上相液料比的降低先增加后降低，當(dāng)液料比為12 mL/g時(shí)，黃貞菌質(zhì)總黃酮得率達(dá)最高；當(dāng)液料比為9 mL/g 時(shí)，黃貞菌質(zhì)多糖得率達(dá)最高。原因可能是當(dāng)上相液料比較高時(shí)，提取系統(tǒng)黏度較大，不利于目標(biāo)物遷移，從而造成得率較低；而提取溶劑的量增加有利于目標(biāo)物溶出，導(dǎo)致得率增加。但當(dāng)提取溶劑繼續(xù)增加到一定值后，目標(biāo)物已基本提取完畢，若提取溶劑用量繼續(xù)增加會(huì)造成單位提取液中目標(biāo)物濃度的降低，也會(huì)造成提取試劑浪費(fèi)和能耗增加，同時(shí)增加了后續(xù)溶液處理難度，影響得率。此外，由于上相液料比為12 mL/g 時(shí)多糖得率與9 mL/g 時(shí)差異不大，選擇上相液料比12 mL/g用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.2 下相液料比對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖2）

圖2 下相液料比對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響

由圖2 可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮得率隨下相液料比的降低呈先增高后降低，在液料比為20 mL/g 時(shí)得率最高；黃貞菌質(zhì)多糖得率隨下相液料比的降低呈先增加后趨于平穩(wěn)。原因可能是隨著下相液料比的降低，提取溶劑量增加，目標(biāo)物溶出量增加，得率增加。但由于乙酸乙酯微溶于水，所以隨著水相（下相）增加，乙酸乙酯（上相）實(shí)際用于提取的量減少，從而導(dǎo)致黃貞菌質(zhì)總黃酮得率降低；而對(duì)于黃貞菌質(zhì)多糖，當(dāng)水相量達(dá)到一定值時(shí)多糖全部溶出，即使水相再增加對(duì)多糖得率也無明顯影響。因此，選擇下相液料比20 mL/g用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.3 超聲功率對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖3）

圖3 超聲功率對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響

由圖3 可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率隨著超聲功率的增大先增高后降低，當(dāng)超聲功率達(dá)60 W時(shí)，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率達(dá)最高。原因可能是超聲功率的增大導(dǎo)致空化效應(yīng)增強(qiáng)，黃酮和多糖大量溶出，但當(dāng)超聲功率過高時(shí)，過強(qiáng)的空化效應(yīng)導(dǎo)致黃酮和多糖活性物質(zhì)發(fā)生降解引起得率減少。綜合各因素考慮，選擇超聲功率60 W用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.4 超聲溫度對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖4）

圖4 超聲溫度對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響

由圖4 可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率隨著超聲溫度升高呈先增高后降低，當(dāng)超聲溫度為45 ℃時(shí)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率達(dá)到最高。原因可能是隨著超聲溫度的升高，水中的小氣泡（空化核）增多，對(duì)產(chǎn)生空化作用有利，黃貞菌質(zhì)細(xì)胞破裂加速，胞內(nèi)總黃酮和多糖大量溶出；但當(dāng)超聲溫度過高時(shí)，氣泡中的蒸氣壓太高，將增強(qiáng)氣泡閉合時(shí)的緩沖作用，導(dǎo)致空化作用減弱，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率減少。綜合各因素考慮，選擇超聲溫度45 ℃用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.1.5 超聲時(shí)間對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖5）

圖5 超聲時(shí)間對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響

由圖5 可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率均隨著超聲時(shí)間延長(zhǎng)先增高后降低，黃貞菌質(zhì)總黃酮得率在超聲時(shí)間為45 min 時(shí)達(dá)最大值，黃貞菌質(zhì)多糖得率在超聲時(shí)間為55 min時(shí)達(dá)最大值。原因可能是剛開始超聲處理時(shí)，由于超聲波的機(jī)械效應(yīng)、空化效應(yīng)和熱效應(yīng)使黃貞菌質(zhì)細(xì)胞總黃酮和多糖快速溶出，而超聲時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致總黃酮和多糖被破壞，影響得率。此外，超聲時(shí)間過長(zhǎng)增加耗能，提高成本。綜合各因素考慮，選擇超聲時(shí)間45 min用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率模型建立與分析

響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，運(yùn)用DE 8.0軟件進(jìn)行多元回歸擬合，建立以黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的響應(yīng)面二次回歸模型的回歸系數(shù)和方差分析（見表3、表4），得黃貞菌質(zhì)總黃酮（Y1）與多糖（Y2）的多元回歸分析方程。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果分析

表3 黃貞菌質(zhì)總黃酮得率回歸模型方差分析

表4 黃貞菌質(zhì)多糖得率回歸模型方差分析

由表3、表4可知，黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖的相關(guān)系數(shù)R2分別為0.942 3和0.955 6，校正復(fù)相關(guān)系數(shù)RAdj2和預(yù)測(cè)復(fù)相關(guān)系數(shù)RPred2 分別為0.907 2、0.867 7 和0.912 0、0.882 9，且兩系數(shù)值均較為接近，表明總黃酮和多糖的實(shí)際值和預(yù)測(cè)值之間存在高度相關(guān)性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，總黃酮和多糖的F值分別為15.08和21.71，兩者均具有極顯著性（P＜0.000 1），且失擬性P值均具有不顯著性（P＞0.05），表明該回歸模型精確性高。上述結(jié)果表明，Y1與Y2多元回歸分析方程可較好地預(yù)測(cè)與分析總黃酮和多糖的得率。此外，從5 個(gè)因素對(duì)總黃酮和多糖得率的影響來看，一次項(xiàng)中X1、X2、X3、X4、X5，二次項(xiàng)中，交互項(xiàng)中X1X3、X2X3、X2X4、X2X5對(duì)總黃酮得率影響顯著；一次項(xiàng)中X2、X4、X5，二次項(xiàng)中，交互項(xiàng)中X1X2、X1X4、X1X5、X2X3、X2X4、X2X5、X3X5、X4X5對(duì)多糖得率影響顯著。由F值可知，各因素對(duì)總黃酮和多糖得率的影響次序均為X2＞X5＞X4＞X1＞X3。

2.2.2 各因素對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖得率的影響（見圖6、圖7）

圖6 兩因素交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮得率的影響

圖7 兩因素交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)多糖的影響

由圖6 可知，上相液料比與超聲功率、超聲溫度、超聲時(shí)間以及超聲功率與超聲溫度的交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮得率具有顯著影響（P＜0.05），其余交互作用無顯著影響，且上相液料比與超聲溫度、超聲時(shí)間的交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)多糖得率的影響表現(xiàn)出類似的趨勢(shì)。

由圖7可知，上相液料比與下相液料比、超聲溫度、超聲時(shí)間以及下相液料比與超聲功率、超聲溫度、超聲時(shí)間以及超聲時(shí)間與超聲功率、超聲溫度的交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)多糖得率具有顯著影響（P＜0.05），但上相液料比與超聲功率以及超聲功率與超聲溫度的交互作用對(duì)黃貞菌質(zhì)多糖的率影響不顯著（P＞0.05）；超聲功率與上相液料比以及超聲溫度的交互作用不是影響黃貞菌質(zhì)多糖得率主要因素。

2.2.3 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖最佳提取工藝條件的確定和驗(yàn)證

根據(jù)二項(xiàng)回歸模型的預(yù)測(cè)，得出黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖最佳提取工藝條件為上相液料比10.71 mL/g、下相液料比15 mL/g、超聲功率68.7 W、超聲溫度48.5 ℃、超聲時(shí)間55 min?？紤]實(shí)際操作的便利性，修正黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖最佳提取工藝條件為上相液料比11 mL/g、下相液料比15 mL/g、超聲功率69 W、超聲溫度49 ℃、超聲時(shí)間55 min。

在此條件下，進(jìn)行3 次重復(fù)試驗(yàn)，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖的實(shí)際得率為142.00 μg/g和26.12 mg/g，與預(yù)測(cè)得率143.98 μg/g 和25.34 mg/g 接近，表明該模型與實(shí)際情況擬合較好，能夠用于預(yù)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果，可作為黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖同步提取工藝的回歸分析和參數(shù)優(yōu)化。

2.2.4 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果（見圖8）

圖8 黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

由圖8（a）、圖8（b）可知，隨著黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖濃度的升高，其對(duì)DPPH和ABTS自由基清除率不斷增強(qiáng)，當(dāng)濃度達(dá)2.0 g/L 時(shí)，黃貞菌質(zhì)總黃酮對(duì)DPPH、ABTS 的清除率分別為87.3%、80.3%；黃貞菌質(zhì)多糖對(duì)DPPH、ABTS的清除率分別為49.5%、43.3%。其中黃貞菌質(zhì)總黃酮對(duì)DPPH 和ABTS 的清除率高于黃貞菌質(zhì)多糖，接近抗壞血酸對(duì)DPPH 和ABTS 的清除率。結(jié)果表明，相對(duì)于黃貞菌質(zhì)多糖，黃貞菌質(zhì)總黃酮具有更好的體外抗氧化活性。

由圖8（c）可知，在對(duì)黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖還原力測(cè)試試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著二者濃度的增加，其還原力逐漸增強(qiáng)，在濃度為2.0 g/L時(shí)，二者的還原力分別為0.9和1.2。結(jié)果提示，相對(duì)于黃貞菌質(zhì)總黃酮，黃貞菌質(zhì)多糖具有較好的還原力。

3 討論

提取同一物質(zhì)中的不同目標(biāo)物常采用分批分次分溶劑提取，因此存在提取過程煩瑣[18]、效率低[19]、成本高[20]、費(fèi)時(shí)費(fèi)力[21]、提取不完全[22]等問題。Monteiro等[23]利用乙酸乙酯和乙醇雙相溶劑成功從黃桃中同時(shí)提取類胡蘿卜素和酚類物質(zhì)。Bu等[24]利用硫酸銨與純凈水雙相溶劑成功從黑醋栗中同時(shí)提取多酚和多糖。近年來，超聲波技術(shù)應(yīng)用于生物大分子的提取已成為一種新興的領(lǐng)域研究方向[25-26]。由超聲波產(chǎn)生的聲學(xué)效應(yīng)處理形成空化氣泡，氣泡破裂形成強(qiáng)大的沖擊波和強(qiáng)大的機(jī)械剪切力，進(jìn)而引起局部現(xiàn)象能量密度變化，加速溶劑和溶質(zhì)之間的傳質(zhì)[9,27]。

本研究采用ULDPM從黃貞菌質(zhì)中同步提取總黃酮和多糖，加之響應(yīng)面CCD 法優(yōu)化，形成了具有溶劑消耗少、操作簡(jiǎn)單、提取時(shí)間短、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)的創(chuàng)新提取方法。體外抗氧化研究表明，黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖具有較好的體外抗氧化活性和還原力，其中黃貞菌質(zhì)總黃酮具有更好的體外抗氧化活性，而黃貞菌質(zhì)多糖具有較好的還原力。因此，黃貞菌質(zhì)總黃酮和多糖可應(yīng)用于飼料添加劑以及天然活性抗氧化藥物的開發(fā)。

4 結(jié)論

采用ULDPM結(jié)合響應(yīng)面同步優(yōu)化提取黃貞菌質(zhì)中總黃酮和多糖能夠減少提取時(shí)間，簡(jiǎn)化提取流程，提高提取效率。黃貞菌質(zhì)總黃酮與多糖較好的體外抗氧化活性可為進(jìn)一步開發(fā)黃貞菌質(zhì)類飼料添加劑奠定基礎(chǔ)。