對(duì)畜禽水產(chǎn)中藥物殘留檢測(cè)方法的探索研究

虞葉道

磺胺類、喹諾酮類藥物（恩諾沙星）是人畜共用藥物，近些年被廣泛用于畜禽水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)?，F(xiàn)在針對(duì)畜禽水產(chǎn)中磺胺類、喹諾酮類的檢測(cè)方法較少，有些前處理步驟相對(duì)繁瑣，有些還需要用到同位素內(nèi)標(biāo)，成本較高。本文采用MCX小柱凈化-液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法，測(cè)定畜禽水產(chǎn)中磺胺類等15種獸藥殘留。通過(guò)對(duì)萃取凈化條件的優(yōu)化，減少組分浸提損失；通過(guò)改變液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法儀器條件，篩選最佳儀器條件，對(duì)磺胺類等獸藥進(jìn)行快速組分分離。結(jié)果表明，該方法具有普適性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單易上手、靈敏度好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，可作為畜禽水產(chǎn)中獸藥殘留檢測(cè)的備用方法。

一、材料與實(shí)驗(yàn)

1.主要儀器和試劑。（1）儀器。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，島津LC30AD-LCMS8050；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，步琦B-100；旋渦混合儀，金壇區(qū)白塔金昌實(shí)驗(yàn)儀器JC2500；電子天平，梅特勒-托利多PL2002。（2）試劑。乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、甲醇（色譜純）、氯化鈉（優(yōu)級(jí)純）、鹽酸（優(yōu)級(jí)純）、氨水（優(yōu)級(jí)純）、0.5%酸化乙腈（甲酸+乙腈：5+995）、MCX小柱（150mg，6mL）。（3）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所所制的單標(biāo)，磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹啉、磺胺噻唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲異唑、恩諾沙星、鹽酸環(huán)丙沙星，濃度均為100μg/mL。

2.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀工作條件。（1）流動(dòng)相組成。流動(dòng)相A：0.1%甲酸，流動(dòng)相B：乙腈+甲醇（6+4）；進(jìn)樣量：1.0μL，流速：0.2mL/min，柱溫：35℃；色譜agilentC18 plus，色譜柱規(guī)格1.8μm×0.3×5cm。梯度洗脫程序如表1所示。

（2）質(zhì)譜工作條件。離子源類型：ESI，離子源溫度：300℃，離子源電壓：4.0kV；加熱氣流量：10L/min，霧化氣流量：3L/min，干燥氣流量：10L/min；脫溶劑管溫度：250℃，加熱塊溫度：300℃；碰撞氣壓力：270kPa。監(jiān)測(cè)離子對(duì)選擇參數(shù)詳見表2。

3.樣品處理。（1）樣品制備。選取普通市售的雞肉、牛肉、淡水魚、淡水蝦各1000g，并分別取可食部分用制樣機(jī)充分勻漿，備用。

（2）提取。稱取5g均勻樣品于50mL離心管中，先加3g氯化鈉，再加0.5%酸化乙腈10mL，放入多孔位旋渦振蕩儀3000r/min旋渦提取10min（或手動(dòng)用力振搖5min），然后置于離心機(jī)3000r/min離心5min，吸取上清液于梨形瓶中。再次加入10mL酸化乙腈重復(fù)上述浸提步驟，并合并浸提液于同一梨形瓶。將梨形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，將浸提液旋轉(zhuǎn)濃縮至約1mL。

（3）MCX小柱凈化。先用5mL甲醇和0.1%鹽酸活化MCX小柱（150mg，6mL），再將MCX小柱吹干。用3mL的0.1%鹽酸復(fù)溶梨形瓶中濃縮液，將復(fù)溶液移入已活化的小柱中，用3mL的0.1%鹽酸重復(fù)洗一次梨形瓶，一并移入小柱中。待小柱復(fù)溶液流盡后，用6mL甲醇分兩次洗小柱，然后吹干。最后用20mL的10%氨化甲醇洗脫小柱，將洗脫液收集于梨形瓶中，再置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干（中間可用甲醇溶液置換溶劑一至兩次），然后用1mL乙腈+水（9+1）復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)相濾頭后，待液相質(zhì)譜上機(jī)測(cè)試。

（4）空白樣制備。同時(shí)按照相同的操作步驟，不加樣品制備空白試樣。

4.樣品測(cè)定。（1）儀器準(zhǔn)備。用島津指定的調(diào)諧液對(duì)儀器作自動(dòng)調(diào)節(jié)，使質(zhì)譜儀各方面參數(shù)處于最佳匹配狀態(tài)。

（2）色譜圖?；前奉惣班Z酮（恩諾沙星）等15種獸藥殘留譜圖如圖1所示。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別吸取濃度為100μg/mL的各個(gè)單標(biāo)物質(zhì)100μL到同一容量瓶中，用0.5%酸化乙腈定容至刻度，配制成1.0μg/mL的混標(biāo)。用混標(biāo)依次稀釋配制濃度為1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.00μg/L、50.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，用0.5%酸化乙腈定容至1mL。經(jīng)分析測(cè)試后，相關(guān)系數(shù)均為0.995-0.999。

二、結(jié)果與討論

1.方法的定量限測(cè)定。按照實(shí)驗(yàn)步驟，對(duì)市售的雞肉、牛肉、淡水魚、淡水蝦等空白基質(zhì)分別進(jìn)行6平行加標(biāo)測(cè)試，經(jīng)計(jì)算取1.0μg/kg作為本方法定量限。

2.方法的準(zhǔn)確度和精密度測(cè)試。對(duì)市售的雞肉、牛肉、淡水魚、淡水蝦等空白基質(zhì)，分別在定量限水平做6平行加標(biāo)，以測(cè)試方法的準(zhǔn)確度和精密度。測(cè)試結(jié)果詳見表3。

綜上所述，本文建立了MCX小柱凈化-液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定畜禽水產(chǎn)中磺胺類等15種獸藥殘留的分析方法。此方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單、靈敏度高、凈化效果好、基質(zhì)適用性廣，且檢測(cè)成本相對(duì)較低，為開展畜禽水產(chǎn)中磺胺類等獸藥殘留的研究提供了有效的測(cè)試方法。

作者簡(jiǎn)介：虞葉道（1982-），男，漢族，江蘇常州人，中級(jí)工程師，大學(xué)本科，研究方向?yàn)檗r(nóng)藥獸藥殘留檢測(cè)。