野生和栽培巖陀藥材的質(zhì)量等同性研究

戚淑威 楊杰 周國華 王坤粉 楊少華 陳翠

摘要 ?［目的］比較不同產(chǎn)地野生巖陀和栽培巖陀的巖白菜素含量差異，探討野生巖陀與栽培巖陀是否具有質(zhì)量等同性，確定最佳栽培年限。［方法］采用高效液相色譜法對野生巖陀和栽培巖陀的巖白菜素含量進(jìn)行測定。［結(jié)果］麗江寧蒗縣的野生巖陀巖白菜素含量最高，為5.84%，曲靖馬龍縣野生巖陀巖白菜素含量最低，為4.32%，麗江栽培巖陀巖白菜素含量在3.93%～5.19%，且各基地間栽培巖陀巖白菜素含量差異明顯。相關(guān)性分析表明，同一鄉(xiāng)鎮(zhèn)的野生巖陀大多呈正相關(guān)，不同地區(qū)間野生巖陀相關(guān)性有很大差異，3年栽培巖陀與野生巖陀巖白菜素含量差別不大，不同基地相同年份栽培巖陀巖白菜素含量差異不大。聚類分析表明，所有巖陀樣品可分為3類，第1類均為栽培品，第2類均為野生品，第3類野生品、栽培品都有。栽培年限與巖陀巖白菜素含量分析表明，栽培年限與巖白菜素含量呈極顯著正相關(guān)。［結(jié)論］栽培巖陀可作為野生巖陀的替代資源使用，栽培巖陀最佳栽培年限為3～4年。

關(guān)鍵詞 ?野生巖陀；栽培巖陀；巖白菜素含量；質(zhì)量等同性

中圖分類號 ?R 284.1 ??文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ?A ??文章編號 ?0517-6611（2023）05-0186-05

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2023.05.042

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Study on the Quality Equivalence of Wild and Cultivated Yantuo Medicinal Materials

QI Shu-wei1， YANG Jie2， ZHOU Guo-hua3 et al

（1.Institute of Alpine Economic Plants， Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Lijiang，Yunnan 674100;2.Yunnan Longhai Natural Plant Pharmaceutical Co.，Ltd.，Kunming，Yunnan 650501;3.Yunnan Baiyao Group Chinese Medicinal Resources Co.，Ltd.，Kunming，Yunnan 650111）

Abstract ?［Objective］To compare the bergeninum contents between wild and cultivated Yantuo from different regions， and discuss whether the wild and cultivated samples had quality equivalence， and determined the best cultivation period. ［Method］The bergeninum contents of wild samples and cultivated samples were determined by HPLC. ［Result］The content of wild Yantuo bergenin in Ninglang County of Lijiang was the highest （5.84%）， while the content of wild Yantuo bergenin in Malong County of Qujing was the lowest （4.32%）， and the content of cultivated Yantuo bergenin in Lijiang was 3.93%-5.19%， and the content of cultivated Yantuo bergenin in different bases was significantly different.The correlation research showed that wild samples in the same township were mostly positively correlated， and the correlations of wild sampless in different regions were very different. The bergeninum contents of the three-year cultivated samples were not much different from the wild samples. Besides， the bergeninum contents of samples in different cultivated bases in the same year had little difference. The results of cluster analysis showed that all samples were divided into 3 categories. The first category was cultivated samples，the second category was wild samples and the third category contained wild samples and cultivated samples. Analysis of cultivation years and bergeninum content showed that there was a significant positive correlation between cultivation years and bergeninum content. ［Conclusion］The cultivated Yantuo could replace the wild Yantuo. The best cultivation period of cultivated products was 3-4 years.

Key words ?Wild Yantuo;Cultivated Yantuo;Bergeninum content;Quality equivalence

巖陀又名紅升麻、蛇疙瘩、毛青紅、毛七、毛頭寒藥、九月巖陀，為虎耳草科鬼燈檠屬西南鬼燈檠（Rodgersia sambucifolia Hemsl.var.Sambucifolia）和羽葉鬼燈檠（Rodgersia pinnata Franch.）的干燥根莖，是云南地區(qū)傈僳族、苗族、白族等民族的習(xí)用藥物，具有活血調(diào)經(jīng)、祛風(fēng)除濕、收斂止瀉的功效，用于治療跌打損傷、骨折、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、風(fēng)濕疼痛、外傷出血、腸炎、痢疾等［1-3］。1977 年版《中華人民共和國藥典》［4］、1998年版《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》［5］、2003 年版《貴州省中藥材民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》［6］對巖陀進(jìn)行了收錄。近年來研究表明巖陀含有鄰苯二酚、沒食子酸乙酯、巖白菜素、3，4-二羥基苯甲酸、3-O-甲基沒食子酸、4-O-甲基沒食子酸、胡蘿卜苷等成分，其中巖白菜素是巖陀的主要有效成分，巖白菜素具有消炎鎮(zhèn)痛、止咳平喘的作用，能對多種癌細(xì)胞有良好的抑制活性，常作為止咳、消炎藥的有效成分用于治療咳嗽、急慢性氣管炎、十二指腸潰瘍等病癥，目前巖白菜素片已作為上市藥物用于慢性支氣管炎的治療［7-12］。巖陀主要分布于云南、四川、貴州海拔1 000～3 800 m的林下、林緣、灌叢、草甸、石隙，野生資源有限。隨著藥廠對巖陀藥材的需求量日益增加，有限的野生資源已滿足不了市場需求，用栽培藥材代替野生資源已成為必然。栽培藥材是否能真正代替野生藥材，質(zhì)量是關(guān)鍵，只有對巖陀不同栽培年限藥的質(zhì)量開展研究，與野生藥材進(jìn)行比較，分析有無差異，才能為人工栽培藥材替代野生藥材提供依據(jù)，從而指導(dǎo)生產(chǎn)，推動巖陀的規(guī)范化和規(guī)?；N植，真正實(shí)現(xiàn)野生資源的保護(hù)和可持續(xù)開發(fā)利用，為市場提供質(zhì)量穩(wěn)定可靠的藥材。藥用植物的主要藥效成分通常是次生代謝產(chǎn)物，中藥材次生代謝產(chǎn)物除受遺傳因素調(diào)控外，地理環(huán)境、氣候條件等生態(tài)因子亦會對其產(chǎn)生重要影響，即環(huán)境會導(dǎo)致同種異地藥材質(zhì)量的不同［13-15］。

我國巖陀野生資源分布廣泛，受地域影響，各產(chǎn)地巖陀藥材質(zhì)量存在一定差異［16］。目前以云南產(chǎn)巖陀研究較多，其巖白菜素的含量為2.97%～7.55%，麗江地區(qū)的野生西南鬼燈檠根莖中巖白菜素的含量為4.29 %～4.73%，其中產(chǎn)于玉龍縣的含量最高；麗江的羽葉鬼燈檠的巖白菜素的含量為4.11%［17-22］。該研究選取云南不同產(chǎn)地野生、麗江不同栽培年限的巖陀為研究對象，利用高效液相色譜測定巖白菜素的含量，對不同產(chǎn)地野生藥材巖白菜素含量、不同栽培年限藥材巖白菜素含量進(jìn)行比較分析；通過對不同產(chǎn)地野生品與麗江栽培品的主要有效成分巖白菜素含量的測定，探討栽培過程中巖白菜素的積累規(guī)律，為云南野生巖陀的藥材品質(zhì)評價(jià)、人工栽培藥材替代野生藥材、規(guī)范化栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 ???試材。

巖陀栽培品來自麗江市（古城區(qū)、玉龍縣），選擇地勢一致的巖陀生產(chǎn)大田（坡向一致），于2017—2019年逐年取樣。巖陀野生品采集于云南省麗江市、曲靖市、玉溪市3個地州的11個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，物種經(jīng)過云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高山經(jīng)濟(jì)植物研究所的楊少華研究員鑒定系中藥材巖陀的基源植物西南鬼燈檠（Rodgersia sambucifolia Hemsl.var.Sambucifolia）和羽葉鬼燈檠（Rodgersia pinnata Franch.），樣品采集地見表1。

1.1.2

試驗(yàn)儀器。高效液相色譜儀（杭州瑞析科技有限公司，Agilent1260）；分析天平（梅特勒-托利多AE240、梅特勒-托利多AL204）；超聲波振蕩儀（上海隆拓儀器設(shè)備有限公司，SK5200 LH）；電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療儀器有限公司，XMTD-4000）。

1.1.3 ???試驗(yàn)試劑。巖白菜素（C14H16O9）標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號111532-200202，純度100%）。甲醇、乙腈（JT.Baker，色譜純）；其他試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

利用高效液相色譜法（HPLC）［26］測定各樣品巖白菜素含量。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（18 ∶82）為流動相；檢測波長為275 nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，色譜圖見圖1。

對照品溶液的制備：取巖白菜素對照品約10 mg，精密稱定，置于100 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取樣品細(xì)粉約0.50 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率300 W，25 kHz）40 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。平行配制2份。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，再用SPSS 22.0 進(jìn)行相關(guān)性和聚類分析，并用Origin 2020軟件進(jìn)行圖像處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 野生品與栽培品巖白菜素含量比較

通過對主要巖陀產(chǎn)地野生和栽培樣品巖白菜素含量的分析可知，不同地區(qū)野生品種之間、野生品與栽培品、栽培品之間的巖白菜素含量有差異（圖2）。野生品中，麗江寧蒗縣（CY01）、玉龍縣（MY01、MY02、MY03、BS01、XS01、ST01）、古城區(qū)（DD01、DD02、DD03、SY01）和玉溪易門縣（YM01、YM02、YM03、YM04、YM05、YM06）的巖白菜素含量較高，分別為5.84%、5.65%、5.52%和5.42%，其中麗江寧蒗縣的野生品含量最高，比曲靖馬龍縣（ML01含量為4.32%）高35.19%，這與李海濤等［23］研究巖陀適宜生長區(qū)域的結(jié)果一致。栽培品由于受到生長年限、生境差異等因素的影響，樣品間巖白菜素含量差異明顯，其中麗江太安基地（TA03）和美自基地（MZ02、MZ03、MZ04）的巖白菜素含量較高，分別為5.35%和5.19%，麗江魯?shù)榛兀↙D03）、麗江后山基地（HS02、HS03、HS04）的巖白菜素含量較低，分別為3.15%和3.46%。麗江栽培品的巖白菜素含量在3.93%～5.19%，麗江美自基地、太安基地種植巖陀巖白菜素含量顯著高于曲靖馬龍縣野生品，麗江太安基地巖白菜素含量與玉溪易門縣野生品差別不大。

2.2 野生品與栽培品巖白菜素含量相關(guān)性分析

通過 Origin 2020軟件，對采集的巖陀樣品進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果如圖3所示，各組分間樣品相關(guān)性呈負(fù)相關(guān)，熱圖顏色較深；組分內(nèi)樣品相關(guān)性呈正相關(guān)，熱圖顏色較淺各樣品間相關(guān)性差異較大。從圖3可以看出，同一鄉(xiāng)鎮(zhèn)的巖陀野生品大多呈正相關(guān)，其中MY01與MY02、XS01與MY03顏色較淺，YM01與YM02、YM05與YM02、YM05與YM01顏色較淺，表明同一個小區(qū)域內(nèi)野生巖陀巖白菜素含量差別較小。曲靖馬龍野生品與麗江地區(qū)野生品多呈負(fù)相關(guān)，其中ML01與BS01顏色較深，ML01與CY01顏色最深，表明曲靖馬龍野生品與大多數(shù)麗江地區(qū)野生品的巖白菜素含量存在較大差距。玉溪易門野生品與麗江地區(qū)野生品多呈正相關(guān)，其中YM01與MY01、YM05與MY01顏色較淺；YM02與ST01顏色最淺，表明麗江、玉溪易門兩地巖陀的巖白菜素含量相差不大。麗江地區(qū)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)間野生品相關(guān)性有很大差異，其中BS01與CY01呈顯著負(fù)相關(guān)，顏色較深；SY01與CY01、MY03與DD02、MY03與DD03呈正相關(guān)，顏色較淺。麗江古城區(qū)栽培品與其他地區(qū)野生品相關(guān)性分析顯示，LT02與MY02、LT02與ML01、LT02與YM01、LT02與YM05、HS02與MY01、HS04與DD03、HS02與MY03、HS02與XS01、HS02與MY02、HS02與YM01、HS02與YM05熱圖顏色較深，表明麗江古城區(qū)2年栽培品與大多野生品巖白菜素含量差異較大。麗江玉龍縣栽培品與其他地區(qū)野生品相關(guān)性分析顯示，ST03與MY01、ST03與YM05呈顏色較淺；ST03與MY01顏色最淺，表明玉龍縣3年栽培品巖白菜素含量與麗江野生品含量相當(dāng)。美自基地栽培品與其他地區(qū)野生品相關(guān)性分析顯示，美自基地2年栽培品多與野生品呈負(fù)相關(guān)，其中MZ02與MY01、MZ02與YM01、MZ02與YM05顏色較深，表明美自基地2年栽培品與野生品巖白菜素含量差距較大。麗江魯?shù)猷l(xiāng)、太安鄉(xiāng)栽培品與麗江野生品相關(guān)性分析顯示，LD03與XS01、TA03與SY01呈負(fù)相關(guān)，顏色較深；LD03與MY01、TA03與BS01、TA03與ML01呈正相關(guān)，顏色較淺，說明魯?shù)猷l(xiāng)、太安鄉(xiāng)3年栽培品與麗江野生品巖白菜素含量差別不大。麗江地區(qū)各栽培品相關(guān)性分析顯示，LD03與ST02、HS02與ST03、HS04與ST02、MZ02與ST03、TA03與LT02呈負(fù)相關(guān)，熱圖顏色較深，表明栽培品不同年份巖白菜素的含量差異明顯；MZ02與HS02、LD03與ST03、MZ02與LT02、HS02與LT02呈正相關(guān)，顏色較淺，表明栽培品不同基地相同年份巖白菜素含量差異不大。

2.3 野生品與栽培品聚類分析

以巖白菜素為分類依據(jù)，采用SPSS 22.0軟件對24個樣地的18份野生品和12份栽培品進(jìn)行聚類分析，結(jié)果顯示（圖4），30個樣地樣品可被分為3大類：第1類為MZ02、HS02、LD03、ST02、LT02、HS04、HS03；第2類為YM04、ML01、ST01、DD03、YM03、SY01；第3類為MZ03、XS01、YM02、BS01、MZ04、DD01、TA03、ST03、CY01、YM06、MY02、MY03、YM01、DD02、LT03、YM05、MY01，即將麗江境內(nèi)的2年栽培品和后山基地的3～4年栽培品歸為第一類，表明栽培2年巖陀巖白菜素含量都處于較低水平；將部分古城區(qū)、部分玉龍縣、部分易門縣和馬龍區(qū)的野生?品歸為第2類；將麗江、易門縣大部分野生品與3～4年栽培品歸為第3類，表明栽培品經(jīng)過3～4年的種植，其巖白菜素含量達(dá)到或接近野生品。此外，聚類分析結(jié)果與相關(guān)性分析的熱圖結(jié)果相一致。

2.4 栽培年限與巖陀巖白菜素含量分析

選取麗江美自基地和麗江后山基地的2～4年生栽培品進(jìn)行栽培年限與巖白菜素含量分析，結(jié)果表明（表2），同一基地內(nèi)栽培年限與巖白菜素含量呈顯著正相關(guān)，即巖白菜素含量隨著種植年限的延長呈上升趨勢，其中栽培2年的巖白菜素含量最低（美自基地為2.50%、后山基地為2.96%）；第2年巖白菜素到第3年巖白菜素積累最快，而第3年到第4年巖白菜素積累放緩，其中后山基地4年栽培品（HS04）與3年栽培品（HS03）相比巖白菜素含量甚至有所下降。栽培3年和4年時(shí)，美自基地栽培品含量均高于后山基地栽培品，其中4年栽培品巖白菜素含量差別最大，較后山基地增加了86.85%。此外，美自和后山基地栽培品巖白菜素平均含量為4.33%，與曲靖馬龍縣野生品巖白菜素含量（4.32%）相近。

3 討論

野生巖陀由于受土壤、海拔、坡度、日照等生態(tài)因子影響，從而在云南形成了以麗江和香格里拉為中心的滇西北地區(qū)，并沿著高海拔山脈向怒江、大理、楚雄方向延伸；以祿勸縣和尋甸縣為中心的昆明地區(qū)，并沿著高海拔山脈向昭通方向延伸。此次從滇西中心帶的麗江和昆明周邊地區(qū)的玉溪采集的野生品巖白菜素含量高于曲靖地區(qū)，這與李海濤等［23］、楊生超等［20］、呂麗芬等［16］的研究結(jié)論相一致，說明以麗江、玉溪等海拔在2 600～2 900 m的橫斷山區(qū)是巖陀生長最適宜區(qū)，巖陀野生資源藥材質(zhì)量較好。

巖白菜素作為巖陀的次生代謝產(chǎn)物，該試驗(yàn)研究表明，其在巖陀體內(nèi)的含量隨生長年限的增加而增加，麗江產(chǎn)巖陀前2年處于緩慢積累階段，第3年后處于快速增長階段，第4年增速放緩，即3～4年生的巖陀質(zhì)量較好且穩(wěn)定，巖白菜素含量接近麗江當(dāng)?shù)匾吧罚惤貐^(qū)栽培巖陀品質(zhì)有保障。因此，栽培巖陀可以作為野生巖陀的替代資源使用，具有質(zhì)量等同性，結(jié)合麗江當(dāng)?shù)胤N植成本、土地利用率、經(jīng)濟(jì)效益等因素綜合考慮，建議栽培種植3～4年后即可采收。

不同栽培地塊由于培育技術(shù)、種植模式等方式的不同，從而導(dǎo)致栽培品的品質(zhì)、產(chǎn)量存在差異，下一步將從培育技術(shù)方面著手，總結(jié)并提出研究科學(xué)合理的管理措施，提高藥材品質(zhì)。此外，該研究從巖陀主要有效成分巖白菜素的含量進(jìn)行分析，下一步將對于沒食子酸、水晶蘭苷等有效物質(zhì)和浸出物含量入手，更加全面地探究巖陀在栽培過程中有效物質(zhì)的積累、轉(zhuǎn)化規(guī)律，為人工栽培藥材替代野生藥材提供依據(jù)，從而指導(dǎo)生產(chǎn)，推動巖陀的規(guī)范化和規(guī)模化種植，為市場提供質(zhì)量穩(wěn)定可靠的藥材。

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