多發(fā)性骨髓瘤患者血清miR?451、miR145?3p 變化及臨床意義

楊超 梁淑新 齊霽 冉京萍 朱姍姍 鐘利英 李鐵民

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）以骨髓漿細(xì)胞惡性增殖為主要特征，在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中排名前列，目前尚未獲得完全治療MM 的方法，研究［1］分析MM 的發(fā)病機(jī)制可為研制靶向藥物提供臨床依據(jù)。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）為非編碼RNAs，可結(jié)合信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）的3′端非翻譯區(qū)（3′Un?translated Region，3′ UTR）降解mRNA 鏈或?qū)RNA 進(jìn)行翻譯。相關(guān)研究顯示［2］，MM 的發(fā)生發(fā)展存在多種miRNA 的參與，包括微小核糖核酸?32（microRNA?32，miR?32）、微小核糖核酸?92a（mi?croRNA?92a，miR?92a）等。微小核糖核酸?451（mi?croRNA?451，miR?451）為miRNA 的一種，其在惡性腫瘤中的異常低表達(dá)可促進(jìn)癌細(xì)胞增殖并對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行抑制［3］。微小核糖核酸145?3p（microR?NA145?3p，miR145?3p）同樣為miRNA，其被認(rèn)為是腫瘤抑制基因，可對(duì)多個(gè)腫瘤相關(guān)基因進(jìn)行靶向調(diào)控，進(jìn)而對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移、生長(zhǎng)、侵襲以及血管生成造成影響［4］。目前關(guān)于兩者是否可作為MM 診斷的生物標(biāo)志物尚未明確，為使MM 患者獲得更加確切的診斷以提高療效與改善預(yù)后，本研究通過檢測(cè)MM患者血清miR?451、miR145?3p變化分析兩者臨床意義并探究其在MM 中的診斷價(jià)值，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取河北大學(xué)附屬醫(yī)院于2021 年1 月至2022年10 月收治的60 例MM 患者納入觀察組，其中男38 例，女22 例；年齡：42～81 歲，平均（61.81±5.30）歲；MM 國(guó)際分期系統(tǒng)（international staging sys?tem，ISS）［5］：Ⅰ期13 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期28 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2020 年修訂）》［6］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)X 射線、組織活檢、免疫球蛋白（Ig）單克隆抗體確診；②患者年滿18 歲；③患者或家屬知悉同意本次試驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期患者；②合并有其他血液系統(tǒng)疾病者；③合并有自身免疫性疾病者；④合并有腎、心等器官疾病者。根據(jù)初診情況將患者分為復(fù)發(fā)組（n=12）與初診組（n=48）。選取同期于醫(yī)院體檢的45 名健康者作為對(duì)照組。其中復(fù)發(fā)組男7例，女5 例；年齡：44～81 歲，平均（62.14±5.37）歲；ISS：Ⅰ期2 例，Ⅱ期4 例，Ⅲ期6 例。初診組男31例，女17 例；年齡42～79 歲，平均（61.48±5.22）歲；ISS：Ⅰ期11 例，Ⅱ期15 例，Ⅲ期22 例。對(duì)照組男23名，女22 名，年齡：40～71 歲，平均（60.31±5.08）歲。各組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核通過。

1.2 方法

miRNA 的檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT?PCR）方法，首先采用核酸提取試劑進(jìn)行血清總RNA 的提取，然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以此作為模板，嚴(yán)格按照PCR 試劑盒說明書進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，以U6作為內(nèi)參物，采用2?ΔΔct法檢測(cè)miR?451、miR145?3p基因表達(dá)量。血漿中miR?451、miR145?3p分子熒光PCR 引起序列見表1。

表1 miR?451、miR145?3p 擴(kuò)增引物序列Table 1 Amplification primer sequences of miR?451 and miR145?3p

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析，計(jì)量資料采用（）描述，組間比較行t檢驗(yàn)，多組間比較行方差分析。采用受試者工作（ROC）曲線分析血清miR?451、miR145?3p對(duì)于MM 的診斷價(jià)值。以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與觀察組的血清miR?451、miR145?3p水平比較

觀察組血清miR?451、miR145?3p低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 觀察組與對(duì)照組血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p lev?els between the observation group and the control group（）

表2 觀察組與對(duì)照組血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 2 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p lev?els between the observation group and the control group（）

2.2 不同分期MM 患者的血清miR?451、miR145?3p水平比較

miR?451、miR145?3p水平：Ⅲ期<Ⅱ期<Ⅰ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 不同分期MM 患者的血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p levels between MM patients at different stages（）

表3 不同分期MM 患者的血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 3 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p levels between MM patients at different stages（）

注：與Ⅰ期比較，aP<0.05；與Ⅱ期比較，bP<0.05。

2.3 復(fù)發(fā)組與初診組的血清miR?451、miR145?3p水平比較

復(fù)發(fā)組血清miR?451、miR145?3p水平低于初診組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4 復(fù)發(fā)組與初診組的血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 4 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p levels between the recurrence group and the initial diagnosis group（）

表4 復(fù)發(fā)組與初診組的血清miR?451、miR145?3p 水平比較（）Table 4 Comparison of serum miR?451 and miR145?3p levels between the recurrence group and the initial diagnosis group（）

2.4 血清miR?451、miR145?3p 及兩者聯(lián)合對(duì)于MM 的診斷價(jià)值

血 清miR?451、miR145?3p診 斷MM 時(shí)，以miR145?3p的曲線下面積值（AUC）值最高，敏感度、特異度分別為95.00%、93.33%，但miR?451的AUC 值與miR145?3p比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），血清miR?451、miR145?3p聯(lián)合診斷MM 時(shí)，兩項(xiàng)其中一項(xiàng)為陽(yáng)即可診斷為MM，聯(lián)合診斷后AUC 值為0.844，敏感度100.00%，特異度為84.44%。見表5、圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curves

表5 血清miR?451、miR145?3p 及三者聯(lián)合對(duì)于MM 的診斷價(jià)值Table 5 Diagnostic value of serum miR?451，miR145?3p and their combination for MM

3 討論

MM 為一種終末分化的惡性腫瘤，其起病緩慢且隱匿，患者腎功能不全、高鈣血癥、骨損傷等不同臨床表現(xiàn)由骨髓瘤細(xì)胞浸潤(rùn)部位與增生程度決定［7］。由于MM 缺乏特異性表現(xiàn)且疾病早期無顯著癥狀，因此臨床易出現(xiàn)漏診或誤診情況［8］。現(xiàn)階段無有效方式完全治愈MM，因此亟需尋找合適的標(biāo)志物對(duì)MM 發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)并對(duì)疾病進(jìn)行診斷，以預(yù)防與及早控制疾病發(fā)展。

研究表明［9?10］，miRNA 在調(diào)控MM 的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，其中miRNA 家族的miR?424、miR?765的水平變化可作為MM 分子生物學(xué)的診斷標(biāo)志且診斷價(jià)值較高。miR?451位于人17q11.2染色體上，其在多種腫瘤中均存在異常表達(dá)，可通過多種機(jī)制對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖等過程進(jìn)行調(diào)控，但其在MM 中的表達(dá)情況如何尚待探究。miR?145主要包括兩種形式［11］，分別為miR145?5p、miR145?3p，已有相關(guān)研究證實(shí)前者在前列腺癌［12］、非小細(xì)胞肺癌［13］等癌癥中具有重要作用，可用于疾病診斷，但對(duì)于miR145?3p在MM 中的作用機(jī)制尚未明確。為使MM 患者獲得更加明確的診斷，本研究對(duì)miR?451、miR145?3p在MM 患者中的變化進(jìn)行探究，結(jié)果顯示：觀察組血清miR?451、miR145?3p低于對(duì)照組，提示miR?451、miR145?3p在MM 患者中存在異常低表達(dá)。miR145?3p在MM 患者中低表達(dá)的原因可能為，miR145?3p可對(duì)自噬標(biāo)志物以及多種轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路產(chǎn)生作用（靶向調(diào)控），從而分別對(duì)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬進(jìn)行抑制與促進(jìn)，最終導(dǎo)致其表達(dá)水平低。2021 年傅乙笑［14］對(duì)miR145?3p在MM 患者中的表達(dá)情況進(jìn)行了探究，結(jié)果顯示miR145?3p在MM 患者中的表達(dá)下降，與本文研究結(jié)果相似，但其未對(duì)miR?451在MM 患者中的表達(dá)情況進(jìn)行比較且未對(duì)初診與復(fù)發(fā)患者的miR145?3p水平變化進(jìn)行探究，本研究在此基礎(chǔ)上作進(jìn)一步探究，以明確miR?451在MM 患者中的表達(dá)與兩者聯(lián)合對(duì)于MM 的診斷價(jià)值。相關(guān)研究表明［15］，miRNA 可對(duì)多種靶基因生物學(xué)功能進(jìn)行調(diào)控，且其基因調(diào)控、表達(dá)譜與MM 發(fā)生密切相關(guān)，可為MM 早期診斷提供、治療及預(yù)后提供依據(jù)。Su 等［16］的研究結(jié)果顯示，miR?451在急性髓系白血病中的表達(dá)下調(diào)，其可通過調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示：miR?451、miR145?3p水平：Ⅲ期<Ⅱ期<Ⅰ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著患者ISS 分期的不斷增加，患者體內(nèi)血清miR?451、miR145?3p水平逐漸降低，提示miR?451、miR145?3p水平降低與疾病進(jìn)展相關(guān)，兩者可能參與了MM 的發(fā)生發(fā)展過程。復(fù)發(fā)組血清miR?451、miR145?3p水平低于初診組，提示對(duì)患者血清miR?451、miR145?3p水平檢測(cè)有助于了解其復(fù)發(fā)情況，可及時(shí)采取措施以降低復(fù)發(fā)率。2020 年鹿軍等［17］的研究結(jié)果顯示，miR?451通過靶向調(diào)控c?Myc 表達(dá)進(jìn)而對(duì)多發(fā)骨髓瘤進(jìn)展進(jìn)行抑制，進(jìn)而呈現(xiàn)低表達(dá)。ROC 曲線分析結(jié)果顯示：血清miR?451、miR145?3p診斷MM 時(shí)，以miR145?3p的AUC 值最高，敏感度、特異度分別為95.00%、93.33%，但miR?451的AUC 值與miR145?3p比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩者在診斷MM 中均具有良好的診斷價(jià)值，miR?451、miR145?3p水平變化可作為診斷評(píng)估MM 患者預(yù)后的工具。此外，血清miR?451、miR145?3p聯(lián)合診斷后AUC 值為0.844，敏感度100.00%，特異度為84.44%，特異度降低但敏感度提升，兩者聯(lián)合同樣具備較高診斷效能，因此臨床可將兩者聯(lián)合對(duì)MM 患者進(jìn)行診斷，應(yīng)用前景廣闊。

綜上所述，血清miR?451、miR145?3p表達(dá)在MM 患者中顯著降低，且隨患者病情加重呈下降趨勢(shì)，兩者診斷效能較好，可作為臨床早期篩查MM 與預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。