血清IL?17A、miR?342?3p 與2 型糖尿病腎病嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系

周健飛 陳泰起 龍尚麗 劉曉英

糖尿病腎病是糖尿病常見并發(fā)癥，患者腎小球高濾過和高灌注，引發(fā)腎小球濾過率降低、蛋白尿和血壓升高，可進(jìn)一步發(fā)展為終末期腎病或增加心血管疾病發(fā)生風(fēng)險，嚴(yán)重影響患者病情和預(yù)后［1?2］。早期確定2 型糖尿病腎病病情加重和不良預(yù)后風(fēng)險對其有效治療干預(yù)具有重要指導(dǎo)意義。白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）?17A 為炎癥密切相關(guān)因子，已有研究表明其參與糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展［3］。而微小核糖核酸（Micro Ribonucleic Acid，miR）?342?3p 在糖尿病腎病中的表達(dá)水平下調(diào)，且參與腎小管上皮細(xì)胞凋亡、腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)累及以及纖維化過程［4］。因此，IL?17A、miR?342?3p均可能與2 型糖尿病腎病密切相關(guān)。本研究通過對119例2 型糖尿病患者進(jìn)行研究，進(jìn)一步確定2 型糖尿病患者血清IL?17A、miR?342?3p與其腎病嚴(yán)重程度及預(yù)后指標(biāo)的關(guān)系，并首次分析血清IL?17A 和miR?342?3p水平聯(lián)合檢測的預(yù)測早期預(yù)測效能，可優(yōu)化2 型糖尿病腎病病情和不良預(yù)后風(fēng)險評估方案，指導(dǎo)臨床有效治療和預(yù)后改善，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2021 年12 月東方市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科收治的119 例2 型糖尿病患者為研究對象。根據(jù)糖尿病腎病發(fā)生情況將患者分為對照組（單純2 型糖尿病，n=49）和糖尿病腎病組（發(fā)生糖尿病腎病，n=70），并根據(jù)白蛋白尿分期和CKD 分期并將糖尿病腎病組患者分為G1A2 組（n=12）、G2A2 組（n=14）、G3A3 組（n=17）、G4A3組（n=16）和G5A3 組（n=11）等5 個亞組。對照組中男性33 例（67.35%），女性16 例（32.65%）；平均年齡（52.87±11.73）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（24.86±3.27）kg/m2；平均糖尿病病程（107.58±9.46）個月。糖尿病腎病組中男性45 例（%），女性25 例（%）；平均年齡（52.87±11.46）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（24.78±3.26）kg/m2；平均糖尿病病程（107.85±11.46）個月。兩組性別、平均年齡、平均身體質(zhì)量指數(shù)均糖尿病病程等基線資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），兩組具可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會制定的《中國2 型糖尿病防治指南（2017 年版）》診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②成年患者，性別不限；③所有患者均知情同意，本實驗經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并原發(fā)性腎臟疾病患者；②合并先天性腎臟畸形者；③合并惡性腫瘤者；④合并自身免疫性疾病者；⑤合并急慢性感染者；⑥合并肺、肝臟或縱隔等纖維化疾病者；⑦同時參與其他研究者。

1.2 方法

三組患者入組24 h內(nèi)后均取空腹肘靜脈血3 mL，以5 000 rpm、3 cm 半徑、4℃進(jìn)行離心10 min 取上層血清常規(guī)冷藏待測。采用東芝40 型全自動生化分析儀檢測血肌酐和血清IL?17A 水平，試劑盒、質(zhì)控品及標(biāo)準(zhǔn)品均購自武漢菲恩生物科技有限公司，由同一檢驗人員完成相關(guān)檢測操作。并采用RT?PCR 法檢測血清miR?342?3p水平，常規(guī)采用Trizol 法提取總RNA，通過實時熒光定量PCR（qRT?PCR）法合成cDNA，以U6為內(nèi)參，引物序列如下：miR?342?3p上游引物：5′?ACACTCCAGCT?GGGAGGGGGTGCTATCTGTGAT?3′，miR?342?3p下游引物：5′?CTCAACTGGTGTCGTGGA?3′；U6上游引物：5′?CTCGCTTCGGCAGCACA?3′，U6下游引物：5′?AACGCTTCACGAATTTGCGT?3′。采用10 μL 反應(yīng)體系（包括5 μL 的2×SYBR Premix，1 μL 的cDNA 模板，0.5 μL 上游引物，0.5 μL 下游引物，3 μL 的ddH2O）反應(yīng)條件如下：95℃30 s，95℃30 s，65℃20 s，72℃30 s，共40 個循環(huán)。根據(jù)RT?PCR 循環(huán)閾值（Ct），將目的miR?342?3p與U6基因相比，以2?ΔΔCt法對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

三組患者入組24 h 內(nèi)均取尿液標(biāo)本，由同一檢驗人員通過特種蛋白檢測儀采用散射比濁法檢測尿白蛋白水平，并結(jié)合血肌酐水平，計算尿白蛋白/肌酐比率（UACR），同時根據(jù)患者血肌酐水平結(jié)合年齡、性別、身高、體重等計算腎小球濾過率。糖尿病腎病患者均隨訪至2022 年11 月30 日，每3 個月隨訪一次，通過到院門診隨訪，統(tǒng)計患者隨訪期間終末期腎病（Scr≥6 mg/dL、GFR <10 mL/min 或需要進(jìn)行持續(xù)3 個月以上的維持性腎臟替代治療）發(fā)生狀況，從而確定腎存活（無終末期腎病發(fā)生）情況，并根據(jù)隨訪期間腎存活情況將患者分為腎存活組（n=49）和腎非存活組（n=21）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用IBM Statistics SPSS 21 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以n（%）表示，用χ2檢驗。計量資料均符合正態(tài)分布，以（）表示，兩獨立樣本均數(shù)t檢驗的，多組間比較采用F分析并通過SNK?q檢驗進(jìn)行進(jìn)一步兩兩比較。采用Pearson 相關(guān)法分析血清IL?17A、miR?342?3p水平與UACR和腎小球濾過率的關(guān)系。采用Logistics 回歸模型分析血清IL?17A、miR?342?3p水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響。繪制ROC 曲線分析血清IL?17A、miR?342?3p水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測效能。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較

不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較：G5A3 組

表1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較（）Table 1 Comparison of serum IL?17A and miR?342?3p levels in patients with different diabetes nephropathy severity（）

表1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較（）Table 1 Comparison of serum IL?17A and miR?342?3p levels in patients with different diabetes nephropathy severity（）

注：與對照組比較，aP<0.05；與G1A2 組比較，bP<0.05；與G2A2 組比較，cP<0.05；與G3A4 組比較，dP<0.05；與G4A3 組比較，eP<0.05。

2.2 血清IL?17A、miR?342?3p 水平與UACR 和腎小球濾過率的關(guān)系分析

Pearson 相關(guān)分析結(jié)果顯示，患者血清IL?17A、miR?342?3p水平與UACR 均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.879，-0.883，均P<0.001），但與其腎小球濾過率相關(guān)關(guān)系不明顯（r=0.338，0.286，P=0.592，0.704）。

2.3 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較

腎存活組和腎非存活組性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、糖尿病病程等比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。腎非存活組的血清IL?17A、miR?342?3p水平均低于腎存活組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表2。

表2 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較［n（%），（）］Table 2 Comparison of basic data，serum IL?17A，miR?342?3p levels between survival group and non survival group［n（%），（）］

表2 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較［n（%），（）］Table 2 Comparison of basic data，serum IL?17A，miR?342?3p levels between survival group and non survival group［n（%），（）］

2.4 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響分析

Logistics 回歸模型分析結(jié)果顯示，血清IL?17A和miR?342?3p水平均可影響患者預(yù)后（均P<0.001）。見表3。

表3 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響分析Table 3 Impact of serum IL?17A and miR?342?3p levels on the prognosis of type 2 diabetes nephropathy

2.5 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測效能分析

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，2 型糖尿病腎病患者血清IL?17A 和miR?342?3p水平的預(yù)后預(yù)測效能較好，其中以兩者聯(lián)合預(yù)測2 型糖尿病腎病患者預(yù)后效能最佳。見表4、圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

表4 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測效能Table 4 Predictive efficacy of serum IL?17A and miR?342?3p levels on the prognosis of type 2 diabetes nephropathy

3 討論

由于糖尿病腎病早期的癥狀隱匿，常無法及時發(fā)現(xiàn)而延誤治療時機(jī)，患者療效和預(yù)后情況均不理想［6?8］。本研究中，2 型糖尿病患者的UACR存在不同程度的升高，其中糖尿病腎病患者超過一半，提示2 型糖尿病患者腎損傷明顯，病情較為嚴(yán)重，而在隨訪1～4 年期間，有30%的患者發(fā)展為終末期腎病，提示2 型糖尿病腎病患者病情和預(yù)后均不太理想，急需改善。對2 型糖尿病腎病患者病情和預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確評估在其治療干預(yù)中具有重要指導(dǎo)意義。

糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展涉及多種病理機(jī)制，其中糖脂代謝紊亂引發(fā)的炎癥反應(yīng)是糖尿病腎病的重要機(jī)制［9］。IL?17A 是IL?17 細(xì)胞因子家族成員，主要由Th17 細(xì)胞產(chǎn)生，是炎癥密切相關(guān)因子，可通過上調(diào)粘附分子、趨化因子和細(xì)胞因子表達(dá)、募集白細(xì)胞、調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞、抗感染等，多數(shù)研究認(rèn)為其通過促炎作用參與疾病發(fā)生發(fā)展，但也有研究認(rèn)為其水平降低在糖尿病腎病中具有保護(hù)作用［10?11］。本研究結(jié)果顯示，出現(xiàn)腎損傷患者具有更低水平的血清IL?17A，且腎損傷嚴(yán)重患者的血清IL?17A 水平明顯更低，且出現(xiàn)終末期腎病的2 型糖尿病腎病患者具有更低的血清IL?17A水平，提示IL?17A 參與了2 型糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，與2 型糖尿病腎病病情和預(yù)后均密切相關(guān)，其預(yù)測2 型糖尿病腎病患者腎臟預(yù)后的曲線下面積高達(dá)0.880，敏感度和特異度均較高，可作為其預(yù)后評估參考指標(biāo)。

微小RNA（miRNA）穩(wěn)定性強(qiáng)且目前其檢測技術(shù)成熟，其相關(guān)檢測已成為疾病生物標(biāo)志物研究的前沿?zé)狳c［12］。miR?342?3p屬于miR?342 家族，其定位于14 號染色體14q32 上，其既往研究多數(shù)集中于腫瘤疾病中［13］。龔化等［14］的研究中，LncRNANEAT1 通過互補結(jié)合miR?342?3p上調(diào)CADM1基因從而抑制細(xì)胞的增殖和侵襲。Jiang等［15］的研究發(fā)現(xiàn)miR?342?3p可靶向SOX6 抑制糖尿病腎病的腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程。韓敬等［4］認(rèn)為miR?342?3p可能作為糖尿病腎病輔助診斷標(biāo)志物。本研究檢測了2 型糖尿病不同腎損傷患者的血清miR?342?3p相對表達(dá)量，結(jié)果顯示，隨著病情嚴(yán)重程度的加重，患者的血清miR?342?3p相對表達(dá)量有不同程度的降低，Pearson 相關(guān)分析證實了患者血清miR?342?3p相對表達(dá)量與2 型糖尿病腎病嚴(yán)重程度為負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究中，出現(xiàn)終末期腎病的2 型糖尿病腎病患者的血清miR?342?3p相對表達(dá)量更低，血清miR?342?3p可明顯影響其腎臟預(yù)后，用于其腎臟預(yù)后判斷的ROC 曲線下面積高達(dá)0.845，可作為其預(yù)后評估參考指標(biāo)。且本研究中，血清IL?17A、miR?342?3p水平兩者聯(lián)合檢測具有更高的2 型糖尿病腎病預(yù)后效能，對于血清IL?17A、miR?342?3p水平明顯降低的2 型糖尿病患者需進(jìn)一步確定其腎損傷情況，對于IL?17A水平低于333.005 pg/mL、血清miR?342?3p水平低于2.100 的2 型糖尿病腎病患者，需警惕其腎臟不良預(yù)后風(fēng)險，加強(qiáng)病情監(jiān)測和及時調(diào)整有效治療方案，以期改善疾病療效和預(yù)后。

綜上所述，血清IL?17A、miR?342?3p水平均可用于2 型糖尿病腎病病情和預(yù)后評估，從而指導(dǎo)其臨床有效干預(yù)以改善療效和患者預(yù)后。