ARHGAP23與非小細(xì)胞肺癌免疫浸潤(rùn)和預(yù)后的相關(guān)性分析

王作培 曹磊 陸熠 丁一

肺癌的發(fā)病率和死亡率高,60%患者初次診斷時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,5年生存率僅15%,總體預(yù)后差[1]。腫瘤組織中細(xì)胞突變的位點(diǎn)很少,與基因表達(dá)調(diào)控密不可分[2],故篩選出普適性高的標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)是肺癌早期預(yù)防、診斷、治療和預(yù)防復(fù)發(fā)的根本。ROCK(Rho-associated protein kinase,Rho相關(guān)蛋白激酶)是治療心血管疾病、代謝紊亂和腫瘤的潛在治療靶標(biāo)[3-4],其Rho GTPase(Rho GTP酶)的活化受到Rho GAPs(Rho GTPase activating proteins,Rho GTPase活化蛋白)的調(diào)節(jié)[5]。本研究涉及的ARHGAP基因負(fù)責(zé)Rho GAPs的翻譯[6]?，F(xiàn)對(duì)我院2017年1月到2020年1月非小細(xì)胞肺癌手術(shù)患者的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化分析,使用TCGA(The Cancer Genome Atlas,癌癥基因組圖譜)數(shù)據(jù)庫(kù)等檢測(cè)ARHGAP23表達(dá),分析患者生存曲線(xiàn),并探討ARHGAP23與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的關(guān)系。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院2017年1月到2020年1月接受手術(shù)治療且術(shù)后石蠟病理診斷為非小細(xì)胞肺癌的86例患者病理組織標(biāo)本。其中男性41例(47.7%),女性45例(52.3%);年齡≤60歲49例(57.0%),>60歲37例(43.0%);收集的標(biāo)本與數(shù)據(jù)經(jīng)上海市浦東新區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(醫(yī)學(xué)倫理審查申請(qǐng)表編號(hào)2019-09)。納入標(biāo)準(zhǔn):a) 年齡大于18歲,非妊娠期及哺乳期女性;b) 經(jīng)病理診斷確診為非小細(xì)胞肺癌;c) 未經(jīng)任何放射或化學(xué)治療。排除標(biāo)準(zhǔn):臨床信息(總生存時(shí)間及生存狀態(tài))不完整的患者。

二、研究方法

1 臨床資料隨訪(fǎng)

病例納入時(shí)間起點(diǎn)為2017年1月1日,納入終點(diǎn)是2020年1月1日,總生存期(overall survival,OS)定義為從手術(shù)日期到死亡或最后一次隨訪(fǎng)的時(shí)間。病例經(jīng)門(mén)診途徑復(fù)診或經(jīng)電話(huà)/微信隨訪(fǎng)。隨訪(fǎng)間隔為:術(shù)后前2年期間,每3個(gè)月復(fù)查一次;術(shù)后第3年,每半年復(fù)查一次;術(shù)后3年以后,每年復(fù)查1次。2022年1月1日對(duì)病例進(jìn)行最終研究結(jié)局的隨訪(fǎng)。本研究隨訪(fǎng)主要目的是ARHGAP23表達(dá)量高低對(duì)非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的影響,其次為臨床病例資料與患者的OS之間的關(guān)系。

2 免疫組化分析

借助免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(streptavidin-perosidase,SP)兩步法實(shí)施染色操作,組織切片放置在60℃的環(huán)境中進(jìn)行烤片,時(shí)間為2小時(shí),把組織切片浸潤(rùn)到提前加熱處理過(guò)的修復(fù)液中,時(shí)間為15分鐘。使用磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffered saline,PBS)進(jìn)行沖洗,然后添加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑進(jìn)行孵育,時(shí)間為10分鐘。使用PBS進(jìn)行沖洗處理,用濃度為1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)進(jìn)行封存處理,添加兔抗人ARHGAP23多克隆抗體,該抗體是由Abcam公司提供的,放在37℃的環(huán)境中進(jìn)行孵育,時(shí)間為60分鐘。添加辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG,放在室溫下進(jìn)行孵育,時(shí)間為20分鐘,使用PBS進(jìn)行沖洗,前后沖洗三次,二氨基聯(lián)苯胺法(dab color rendering,DAB)顯色。用PBS溶液對(duì)切片進(jìn)行沖洗,使用蘇木精對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,分化、沖洗返藍(lán)。用酒精進(jìn)行脫水處理,用中性樹(shù)膠進(jìn)行封存,放在顯微鏡下觀察,并用照片形式保存下來(lái)。

3 免疫組化結(jié)果判斷

(1)參考陽(yáng)性細(xì)胞百分比開(kāi)展計(jì)分工作:≤5%記作0分,6%～25%記作1分,26%～50%記作2分,51%～100%記作3分。(2)參考陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度開(kāi)展計(jì)分工作:未著色記作0分,淡黃色記作1分,棕黃色記作2分,棕褐色記作3分。把上述數(shù)據(jù)相乘:≥3分記作高表達(dá),<3分記作低表達(dá)。

4 基因表達(dá)分析

檢索TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)得到不同癌癥或特異性癌癥亞型的腫瘤組織與鄰近正常組織之間ARHGAP23的表達(dá)差異。在數(shù)據(jù)庫(kù)中沒(méi)有正常對(duì)照組織或沒(méi)有腫瘤組織的情況下,借助GEPIA2網(wǎng)站和GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)得到相關(guān)腫瘤組織和正常組織表達(dá)能力不同之處的箱線(xiàn)圖。參數(shù)設(shè)置為:P-value cutoff=0.05,log2FC cutoff=1。 綜合考慮UALCAN數(shù)據(jù)庫(kù)以及臨床數(shù)據(jù),對(duì)每百萬(wàn)轉(zhuǎn)錄本的值進(jìn)行科學(xué)的預(yù)測(cè)和計(jì)算,借助 Log2(TPM+1) 表現(xiàn)出來(lái),繪制了在 TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中不同腫瘤患者中ARHGAP23表達(dá)水平的箱線(xiàn)圖。

5 生存預(yù)后分析

用Kaplan- Meier Ploter數(shù)據(jù)庫(kù)分析上述TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)的所有腫瘤中ARHGAP23的OS和無(wú)病生存期(disease free survival,DFS)數(shù)據(jù)。選擇合適的表達(dá)閾值以區(qū)分高表達(dá)人群和低表達(dá)人群 (Cutoff-High=50;Cutoff-Low=50) ,假設(shè)檢驗(yàn)采用log-rank檢驗(yàn),并通過(guò)GEPIA2的“生存分析”模塊獲得單基因生存分析圖 (Kaplan- Meier曲線(xiàn))。

6 基因變異分析

使用cBioportal(http://cbioportal.org)工具收集所有TCGA腫瘤ARHGAP23基因結(jié)構(gòu)的突變頻率、突變類(lèi)型、突變位點(diǎn)信息和拷貝數(shù)變化。

7 ARHGAP23相關(guān)基因富集分析

借助String數(shù)據(jù)庫(kù)了解、篩選蛋白質(zhì)名稱(chēng)和種類(lèi),這里選擇的是ARHGAP23和人,然后最低關(guān)系分?jǐn)?shù)設(shè)置為高可信度0.700,交互對(duì)象的最高值不得高于50,這些信息是在試驗(yàn)探究中獲得的。最后篩選得到了10個(gè)實(shí)驗(yàn)確定的與ARHGAP23相互作用蛋白。

8 免疫浸潤(rùn)分析

選取TCGA (https://portal.gdc.cancer.gov/) LUADLUSC(肺癌)項(xiàng)目中 level 3 HTSeq-FPKM格式的RNAseq數(shù)據(jù),通過(guò)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化和過(guò)濾,分析了ARHGAP23的表達(dá)與免疫浸潤(rùn)的關(guān)系,免疫浸潤(rùn)算法:ssGSEA (GSVA包內(nèi)置算法),數(shù)據(jù)以氣泡圖、分組比較圖和散點(diǎn)圖的形式展現(xiàn)。

9 臨床相關(guān)性分析

下載(TCGA) LUADLUSC(肺癌)項(xiàng)目中 level 3 HTSeq-FPKM格式的RNAseq數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù),通過(guò)轉(zhuǎn)化和過(guò)濾,分析了ARHGAP23的表達(dá)與臨床的相關(guān)性,R包主要為 ggplot2,數(shù)據(jù)以箱式圖和基線(xiàn)資料表形式展現(xiàn)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

借助SPSS 23.0、GraphPrism 6.0軟件實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析,借助χ2檢驗(yàn)比較分類(lèi)變量之間的差異,連續(xù)變量采用t檢驗(yàn)和趨勢(shì)檢驗(yàn),生存分析采用Kaplan-Meier法,采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)預(yù)后因素進(jìn)行多因素分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、ARHGAP23在肺癌組織中的表達(dá)與生存率的關(guān)系

使用免疫酶標(biāo)SP法進(jìn)行免疫組化測(cè)定,結(jié)果顯示46例患者(53.5%)的腫瘤組織表現(xiàn)出高水平ARHGAP23表達(dá),40例患者(46.5%)腫瘤組織表現(xiàn)出低水平ARHGAP23表達(dá)(圖1A)。利用臨床數(shù)據(jù)分析ARHGAP23的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌受試者存活率的相關(guān)性并做出Kaplan-Meier曲線(xiàn)。從K-M曲線(xiàn)可以看到,與低表達(dá)組相比,ARHGAP23高表達(dá)組的非小細(xì)胞肺癌患者存活率顯著升高(P<0.001)(圖1B)。

圖1 ARHGAP23肺癌組織中的表達(dá)和生存預(yù)后

二、ARHGAP23在肺癌組織中的表達(dá)與患者的臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性

以年齡大小、性別、腫瘤大小、是否吸煙、腫瘤分化情況為依據(jù),把86例非小細(xì)胞肺癌病人的臨床特征進(jìn)行分組,比較高表達(dá)組與低表達(dá)組間的差異,發(fā)現(xiàn)在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期上,組間差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在年齡、性別、吸煙史、腫瘤分化程度上,兩組間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)表1)。

三、影響患者預(yù)后的Cox多因素分析

單因素分析結(jié)果顯示,腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響因素(P<0.05)。以是否存活為因變量,上述因素為自變量,進(jìn)行Cox多因素分析,結(jié)果顯示腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

四、基因表達(dá)分析結(jié)果

首先分析ARHGAP23在各種惡性腫瘤和正常組織中的表達(dá)情況,檢索TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn),ARHGAP23在乳腺癌(BRCA),腦癌(GBMLGG),嫌色細(xì)胞癌(KICH),肺腺癌(LUAD),子宮內(nèi)膜癌(UCEC)組織中的表達(dá)水平明顯低于正常水平(P<0.05),在膽囊癌(CHOL),食管癌(ESCA),肝癌(LIHC),甲狀腺癌(THCA)組織中的表達(dá)顯著高于正常組織(P<0.05)(圖2A) 。將TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中缺少正常組織對(duì)照的腫瘤聯(lián)合GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步評(píng)估分析發(fā)現(xiàn),ARHGAP23在皮膚癌(SKCM)、睪丸癌(TGCT)中的表達(dá)水平明顯低于正常組織(P<0.05),而在淋巴癌(DLBC)和胸腺瘤(THYM)的表達(dá)水平顯著高于正常組織(P<0.05)(圖2B)。CPTAC數(shù)據(jù)集的結(jié)果顯示,ARHGAP23總蛋白在乳腺癌(BRCA)、卵巢癌(OV)、透明細(xì)胞癌(RCC)、子宮內(nèi)膜癌(UCEC)和肺腺癌(LUAD)的原發(fā)組織中的表達(dá)高于正常組織(圖2C)。通過(guò)HEPIA2的“病理分期圖”模塊觀察ARHGAP23表達(dá)與腫瘤病理分期的相關(guān)性,包括COAD,食管癌(ESCA),腎透明細(xì)胞癌(KIRC) 和子宮內(nèi)膜癌(UCEC)(P<0.05,圖2D),其他腫瘤的ARHGAP23表達(dá)與病理分期無(wú)明顯相關(guān)性。

五、生存預(yù)后分析結(jié)果

為了評(píng)估 ARHGAP23與腫瘤預(yù)后的關(guān)系,參考ARHGAP23的表達(dá)情況,把腫瘤病例分成兩部分:一部分是高表達(dá)組;一部分是低表達(dá)組,借助TCGA和GEO計(jì)算分析不同腫瘤病人預(yù)后的相關(guān)性,相關(guān)結(jié)果(見(jiàn)圖3A),高表達(dá)的ARHGAP23與LGG(P=0.001)、OV(P=0.019)、PAAD(P=0.015)和SKCM(P=0.022)患者的總OS(生存率)的不良預(yù)后相關(guān)。DFS(無(wú)病生存期)分析數(shù)據(jù)(圖3B)顯示,在LGG(P<0.001)和PAAD(P<0.001)之間存在相關(guān)性。

表1 非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征與ARHGAP23的表達(dá)[n(%)]

圖2 ARHGAP23基因在不同腫瘤和病理階段的表達(dá)水平

六、基因改變分析結(jié)果

癌癥的發(fā)展是由于基因突變的積累,在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的不同腫瘤樣本中分析ARHGAP23的基因變異情況。(如圖4A)所示,大部分腫瘤沒(méi)有基因突變,只有在UCEC和ESCA中,ARHGAP23的改變頻率比較高,其改變的類(lèi)型、位點(diǎn)和病例數(shù)進(jìn)一步(見(jiàn)圖4B),我們發(fā)現(xiàn)在該結(jié)構(gòu)域Tudor的R918H/X918存在突變。

表2 影響患者預(yù)后的Cox多因素分析

圖3 ARHGAP23基因表達(dá)與腫瘤生存預(yù)后的相關(guān)性 在TCGA中,借助GEPIA2工具和ARHGAP23基因表達(dá)對(duì)TCGA中多種腫瘤實(shí)施A:總生存率;B:無(wú)病生存期研究探討,進(jìn)而得到陽(yáng)性結(jié)果的生存圖和Kaplan-Meier曲線(xiàn)

七、富集分析結(jié)果

為了研究ARHGAP23在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制,篩選出已知的與 ARHGAP23相互作用蛋白和ARHGAP23表達(dá)相關(guān)基因。使用 String數(shù)據(jù)庫(kù),總共獲得了10個(gè)與ARHGAP23相互作用的蛋白質(zhì),(圖5A)展現(xiàn)10種蛋白質(zhì)的影響關(guān)系網(wǎng)絡(luò)。

八、免疫浸潤(rùn)結(jié)果

選取TCGA (https://portal.gdc.cancer.gov/) LUADLUSC(肺癌)項(xiàng)目中 level 3 HTSeq-FPKM格式的RNAseq數(shù)據(jù),通過(guò)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化和過(guò)濾,分析ARHGAP23的表達(dá)與免疫浸潤(rùn)的關(guān)系,結(jié)果顯示:在肺癌中ARHGAP23與Tcm,NK CD56 dim 細(xì)胞和NK 細(xì)胞存在正相關(guān)關(guān)系,ARHGAP23與Th17 細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞等免疫細(xì)胞存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(圖5B),ARHGAP23的高表達(dá)跟T細(xì)胞浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)(圖5C,D)。

圖4 ARHGAP23在TCGA不同腫瘤中的變異分析我們使用cBioPortal tool分析了ARHGAP23的變異特征。A圖顯示突變類(lèi)型;B圖顯示突變位點(diǎn)

九、臨床相關(guān)分析結(jié)果

對(duì)TCGA (https://portal.gdc.cancer.gov/) LUADLUSC(肺癌)項(xiàng)目中 level 3 HTSeq-FPKM格式的RNAseq數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)化和過(guò)濾,分析了ARHGAP23的表達(dá)與臨床的相關(guān)性,結(jié)果顯示:肺癌中T3高于T1的平均水平,兩組的差值為0.363(0.028～0.697),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)(圖6A),高表達(dá)ARHGAP23的III期肺癌患者預(yù)后更好(圖6B)。

討 論

人類(lèi)ARHGAP23基因位于17號(hào)染色體[7],負(fù)責(zé)編碼RhoGAPs家族蛋白。在肺癌的發(fā)生發(fā)展中,Rho GAPs通過(guò)磷酸化激活Rho GTPase,影響多種下游靶蛋白,促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增生、細(xì)胞質(zhì)分裂、肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)形成以及肌動(dòng)球蛋白的收縮等進(jìn)而實(shí)現(xiàn)多種細(xì)胞功能[8-10]。研究發(fā)現(xiàn),ARHGAP在多種腫瘤中顯著下調(diào)。腸癌中發(fā)現(xiàn)ARHGAP30是p53乙酰化和功能性激活的一個(gè)至關(guān)重要的調(diào)控因子,在DNA損傷應(yīng)激情況下,ARHGAP30表達(dá)是p53激活的必要條件[11];ARHGAP7(DLC-1)的泛素化降解機(jī)制導(dǎo)致了Rho A信號(hào)通路的激活促進(jìn)了肺癌的增殖[12];GWAS分析發(fā)現(xiàn)ARHGAP23的SNP位點(diǎn)可能與卵巢癌的發(fā)生相關(guān)[13]。

本研究分析了86例非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織的ARHGAP23表達(dá),并利用臨床數(shù)據(jù)分析ARHGAP23的表達(dá)與患者存活率的Kaplan-Meier曲線(xiàn)。結(jié)果表明ARHGAP23高表達(dá)組的非小細(xì)胞肺癌患者存活率顯著升高。通過(guò)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)ARHGAP23進(jìn)行泛癌分析,結(jié)果表明ARHGAP23在不同腫瘤中表達(dá)量有較大差異,與臨床預(yù)后、免疫浸潤(rùn)之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。

免疫細(xì)胞主要包括NK細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等[14-15],在腫瘤組織中浸潤(rùn)后形成腫瘤微環(huán)境。在腫瘤微環(huán)境中,不同的細(xì)胞類(lèi)型對(duì)腫瘤的作用不同。通常情況下,CD4+輔助T細(xì)胞、NK細(xì)胞、M1型巨噬細(xì)胞能夠殺死腫瘤細(xì)胞,但是 M2型巨噬細(xì)胞、CD4+FoxP3+Th2輔助T細(xì)胞、髓源性抑制細(xì)胞能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞免疫逃逸起到積極影響[16],所以腫瘤微環(huán)境的免疫逃逸機(jī)理及免疫治療手段在臨床醫(yī)學(xué)上有著不可忽視的價(jià)值[17]。經(jīng)過(guò)浸潤(rùn)處理的免疫細(xì)胞對(duì)免疫治療反應(yīng)和腫瘤預(yù)后有著極為關(guān)鍵的影響,而且有可能成為免疫治療藥物重要靶點(diǎn)[18]。

圖5 ARHGAP23相關(guān)基因富集分析

圖6 ARHGAP23在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中肺癌數(shù)據(jù)集的臨床相關(guān)性分析

腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答主要有兩種:一種是天然性,另一種是獲得性。在獲得性免疫應(yīng)答中,CD8+T細(xì)胞發(fā)揮著極其關(guān)鍵的作用,能夠過(guò)繼抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL),起到殺滅腫瘤細(xì)胞的作用[19];但是NK細(xì)胞是人體天然免疫體系中不可或缺的一部分,不用提前致敏就可以消除腫瘤細(xì)胞,而且沒(méi)有無(wú)腫瘤特異性和MHC限制性,是人體防范腫瘤疾病的第一個(gè)屏障[20]。機(jī)體在與腫瘤對(duì)抗的過(guò)程中,自身免疫系統(tǒng)通過(guò)免疫浸潤(rùn),在患者體內(nèi)起到了至關(guān)重要的作用。研究表明,腫瘤浸潤(rùn)的各種免疫細(xì)胞與患者預(yù)后相關(guān),并在腫瘤免疫逃逸、抗腫瘤等方面發(fā)揮不同的作用[21]。淋巴細(xì)胞(CD8+、CD4+、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等)在抗腫瘤免疫監(jiān)視中具有重要的作用。Ruffini等[22]研究表明,有25%肺癌組織中可觀察到淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),并在微血管浸潤(rùn)和低分化的腫瘤中比例較高。Mori等[23]研究發(fā)現(xiàn),腫瘤的組織類(lèi)型和分化程度與CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)程度和數(shù)量有關(guān)。這表明免疫細(xì)胞的反應(yīng)與腫瘤分化程度呈正相關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌中,低分化腫瘤可能表達(dá)更多的腫瘤相關(guān)抗原,導(dǎo)致強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)如淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等。而NK細(xì)胞在抗腫瘤過(guò)程中所起的作用有不同的結(jié)論。Takanami等[24]認(rèn)為,NK細(xì)胞主要分布在腫瘤基質(zhì)中,特別是存在于腫瘤-基質(zhì)交界,其浸潤(rùn)可能和腫瘤演進(jìn)的調(diào)節(jié)有關(guān)。

因?yàn)镃D8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞在腫瘤免疫中的職能不一樣,本文把這作為入手點(diǎn),分析探討ARHGAP23在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)之間的內(nèi)在機(jī)理。通過(guò)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的RNAseq數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),ARHGAP23在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)與Tcm細(xì)胞,NK CD56 dim細(xì)胞和NK細(xì)胞存在正相關(guān)關(guān)系,而與Th17 細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞等存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。該結(jié)論符合前述研究結(jié)果,并提示ARHGAP23可能通過(guò)正向調(diào)節(jié)NK細(xì)胞分泌大量細(xì)胞因子,從而起到抗腫瘤作用。

本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞浸潤(rùn)與ARHGAP23的表達(dá)呈正相關(guān),但對(duì)肺癌患者按照年齡、性比、腫瘤大小、吸煙史、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期等進(jìn)行分組,比較高表達(dá)組與低表達(dá)組間的差異,發(fā)現(xiàn)在腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期上兩組間差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而腫瘤分化程度在兩組間卻沒(méi)有看到明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。為了明確ARHGAP23與免疫浸潤(rùn)的關(guān)系,后續(xù)還需要更多的細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),加大樣本量及數(shù)據(jù)分層,以更深入探究ARHGAP23與非小細(xì)胞肺癌免疫浸潤(rùn)之間的關(guān)系。