TCT聯(lián)合p16/Ki-67雙染、HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變中的診斷價(jià)值

薛 桐,陳奎生,韋 娜,孫淼淼

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

宮頸癌是最常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變是宮頸癌的癌前病變,分為低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變及高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變,其中大多數(shù)低級(jí)別病變可自然消退[2],而有5%～12%的高級(jí)別病變可進(jìn)展為宮頸癌[1]。早期篩查能夠顯著降低宮頸癌的發(fā)病率。2020年美國(guó)陰道鏡和子宮頸病理學(xué)會(huì)提出現(xiàn)階段宮頸癌初篩采用的方法是人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)檢測(cè)聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(thin-prep cytology test,TCT)[3]。TCT具有較高的特異度,但是其敏感度易受切片制備方法、染色水平及醫(yī)師閱片水平影響。我國(guó)目前仍以細(xì)胞學(xué)作為宮頸癌主要的篩查手段,但是總體篩查水平不滿(mǎn)意[4]。此外,許多HPV感染大多是一過(guò)性的,腫瘤轉(zhuǎn)化較罕見(jiàn),所以HPV DNA篩查的假陽(yáng)性率較高[5-6]。本研究探討TCT聯(lián)合p16/Ki-67雙染、HPV mRNA E6/E7檢測(cè)對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷價(jià)值,以期尋找更為精確地發(fā)現(xiàn)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的方法。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2019年1月至2021年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科行細(xì)胞學(xué)篩查并在1個(gè)月內(nèi)行宮頸病理組織學(xué)檢查的女性患者624例,年齡18～81歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①進(jìn)行TCT、p16/Ki-67雙染和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè),并在隨后1個(gè)月內(nèi)行宮頸活檢。②病理組織學(xué)確診存在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變或慢性炎癥。排除標(biāo)準(zhǔn):①有宮頸癌病史。②有子宮切除史。③存在陰道毛滴蟲(chóng)等病原體感染。④哺乳及妊娠期。經(jīng)病理組織學(xué)診斷,慢性炎癥183例,低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變176例,高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變227例,鱗狀細(xì)胞癌38例。

1.2 TCT采用新柏一次性宮頸采樣拭子于宮頸鱗柱交界處沿同一方向旋轉(zhuǎn),取出后置于新柏氏細(xì)胞保存液。離心后使用THINPREP 2000系統(tǒng)制成薄層細(xì)胞涂片并進(jìn)行巴氏染色。采用文獻(xiàn)[7]的方法將TCT結(jié)果分為陰性和陽(yáng)性。

1.3 p16/Ki-67雙染使用p16/Ki-67檢測(cè)試劑盒(瑞士羅氏公司)檢測(cè)。取新柏細(xì)胞保存液中的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行程序化處理:制片、染色、封固,加蓋玻片,讀片。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):以同一個(gè)細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)棕染和細(xì)胞核紅染者為p16/Ki-67雙染陽(yáng)性[6]。

1.4 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)取宮頸脫落細(xì)胞,采用定量檢測(cè)試劑盒(科蒂亞)檢測(cè) HPV E6/E7 mRNA。結(jié)果參考文獻(xiàn)[8]進(jìn)行陽(yáng)性和陰性判定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 26.0分析。采用Kappa值比較不同方法單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷效能(敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值)。一種或兩種方法聯(lián)合檢查時(shí),一種結(jié)果為陽(yáng)性即判讀為陽(yáng)性;3種及以上方法聯(lián)合檢查時(shí),有兩種或兩種以上結(jié)果為陽(yáng)性時(shí),判讀為陽(yáng)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 TCT、p16/Ki-67雙染和HPV E6/E7 mRNA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)與病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較見(jiàn)表1。

表1 TCT、p16/Ki-67雙染和HPV E6/E7 mRNA單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)與病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較 例

2.2 各聯(lián)合檢測(cè)方法對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷效能見(jiàn)表2。以病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算各檢測(cè)方法的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值。兩種方法聯(lián)合檢測(cè)具有較高的敏感度,但是特異度較低;3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的特異度較高。

表2 各聯(lián)合檢測(cè)方法對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷效能 %

3 討論

多種方法聯(lián)合檢測(cè)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷中具有較高的特異度和敏感度[8]。臨床近幾年常用的方法有TCT、p16/Ki-67雙染檢測(cè)、HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)和HPV DNA檢測(cè)等。p16和Ki-67在病理組織學(xué)中應(yīng)用廣泛。p16作為一種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白,能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯,可作為持續(xù)性HPV感染的替代標(biāo)記物。Ki-67是一種增殖指數(shù)。生理情況下,兩者在同一宮頸細(xì)胞中不能共表達(dá),p16/Ki-67雙染檢測(cè)可以用來(lái)篩查宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變[9]。Yu 等[10]研究表明,p16/Ki-67雙染與HPV基因和組織類(lèi)型無(wú)關(guān),進(jìn)行p16/Ki-67雙染有助于減少HPV陰性患者的漏診。金紅等[11]也證實(shí)p16/Ki-67雙染檢測(cè)對(duì)TCT陰性的高危型HPV感染子宮頸病變具有較高的敏感度和特異度,能夠彌補(bǔ)細(xì)胞學(xué)檢查敏感度不足的缺點(diǎn),減少漏診。HPV持續(xù)感染在宮頸癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中起著重要的作用。研究[12]證實(shí),HPV 早期編碼區(qū)E6、E7基因是病毒癌基因,而E6/E7 mRNA是癌基因 E6 和E7 的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)與HPV DNA檢測(cè)相比,具有更好的特異度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值,并且可以有效避免HPV一次性感染。

本研究結(jié)果顯示在病理組織學(xué)確診者的高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變中,很少有3項(xiàng)檢查均陰的情況,提示3項(xiàng)檢查有很好的互補(bǔ)性。聯(lián)合檢測(cè)具有較好的特異度及敏感度。作者認(rèn)為對(duì)于HPV感染陰性或HPV危險(xiǎn)度低的患者或者HPV感染危險(xiǎn)度與細(xì)胞學(xué)篩查結(jié)果不符的患者,可以適當(dāng)多選取幾種篩查方法。

不同檢測(cè)假陰性結(jié)果可能的原因有:①臨床醫(yī)師在標(biāo)本采集時(shí)采集的細(xì)胞量過(guò)少或遭受雜質(zhì)影響。②對(duì)于p16/Ki-67雙染結(jié)果的判讀有很強(qiáng)的個(gè)人主觀性。③患者存在放療或藥物治療時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。④p16/Ki-67雙染在細(xì)胞質(zhì)稀少的細(xì)胞中或在p16染色背景較弱的樣本中可能會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果[13]。⑤由于某些特殊類(lèi)型的宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與HPV無(wú)相關(guān)性,所以p16/Ki-67雙染及HPV E6/E7 mRNA很難檢測(cè)到相關(guān)變化。

綜上所述,TCT聯(lián)合p16/Ki-67雙染、HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)可有效提高宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的敏感度及特異度,對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的篩查有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。