低離子凝聚胺與卡式微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病輸血檢驗(yàn)中的應(yīng)用

陳良麗 陳放

1咸寧市中心醫(yī)院 湖北科技學(xué)院附屬第一醫(yī)院輸血科，咸寧 437000；2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院兒科感染消化?？疲錆h 430030

新生兒溶血病是新生兒科較為常見的一種指因母嬰血型不合引起的新生兒同族免疫性溶血，其中以ABO 血型最為常見［1-3］。新生兒臨床多表現(xiàn)為黃疸、貧血、高膽紅素血癥等，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生膽紅素腦病，危害新生兒身體健康［4-6］。臨床治療新生兒ABO溶血病以藍(lán)光照射消除黃疸以及輸血等綜合治療為主。輸血前需對(duì)受血者與供血者血樣進(jìn)行配血檢驗(yàn)，判斷是否配合，以避免不良事件的發(fā)生［7-8］。目前，低離子凝聚胺技術(shù)、卡式微柱凝膠技術(shù)為臨床最常用的兩種輸血檢驗(yàn)。低離子凝聚胺技術(shù)是將自身抗原與供血抗體結(jié)合，利用低離子正電荷環(huán)境，促進(jìn)抗原抗體緊密結(jié)合，而通過(guò)對(duì)非特異性可逆性凝聚的觀察，快速確定輸血類型［9-10］。卡式微柱凝膠技術(shù)利用紅細(xì)胞凝結(jié)與非凝結(jié)，快速鑒別抗體，且操作過(guò)程簡(jiǎn)單，臨床使用較為便捷［11-12］。因此，本研究對(duì)咸寧市中心醫(yī)院收治的ABO 溶血病新生兒應(yīng)用低離子凝聚胺技術(shù)和卡式微柱凝膠技術(shù)進(jìn)行輸血檢驗(yàn)，探究?jī)煞N技術(shù)的檢驗(yàn)價(jià)值。

資料與方法

1.一般資料

前瞻性隨機(jī)選取咸寧市中心醫(yī)院2019 年5 月至2022 年3 月間收治的發(fā)生ABO 溶血病新生兒76 例，男嬰43例，女嬰38例；出生天數(shù)為（2.85±0.95）d（1～5 d）；出生體質(zhì)量為（3.24±0.65）kg（2.5～3.0 kg）；娩出方式：順產(chǎn)61 例，剖宮產(chǎn)15 例；胎齡為（38.85±0.62）周（38～40 周）；新生兒阿式（Apgar）評(píng)分［13］為（8.52±1.02）分（7～10分）。

經(jīng)咸寧市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)同意開展本項(xiàng)研究（2019R115-E07）。

2.納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《兒科學(xué)》［14］中新生兒ABO 溶血病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；產(chǎn)婦與新生ABO 血型不一致，新生兒有貧血、溶血、黃疸等癥狀；均為單胎足月的新生兒；且產(chǎn)婦為首次妊娠；產(chǎn)婦均為O 型血；患兒家屬均知情同意，并自愿參與本項(xiàng)研究；臨床相關(guān)資料準(zhǔn)確完整；符合本研究所用檢驗(yàn)技術(shù)適應(yīng)證。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：合并感染、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等的新生兒；存在其他遺傳代謝疾?。缓喜⒛到y(tǒng)異常等。

3.方法

3.1.低離子凝聚胺技術(shù) 取兩支試管，標(biāo)明A“主側(cè)”、B“次側(cè)”。主側(cè)管加患兒血清（血漿）150 μ1、供血者3%～5%紅細(xì)胞懸液150 μ1，次側(cè)管反之。各再加LIM溶液0.65 ml，輕輕混勻。各加2 滴凝聚胺溶液（使用肝素治療和腫瘤的患者多加4～6 滴），輕輕混勻。用血庫(kù)專用離心機(jī)（貝索BASO 2005-2）1 000×g離心10 s，棄去上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1 ml 液體。輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集則重做，直至肉眼可見紅細(xì)胞明顯凝集，才能進(jìn)行下一步驟。加入2 滴懸浮液，輕輕混勻并觀察結(jié)果，如果在60 s 內(nèi)凝集散開，代表是由凝聚胺引起的非特異性凝集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不合。同時(shí)用OLYMPUS CX21FS1 生物顯微鏡低倍鏡觀察確認(rèn)，觀察5 個(gè)及以上視野。檢驗(yàn)結(jié)果由2 名及以上的具有豐富經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行確認(rèn)。

3.2.卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù) 微柱凝膠抗球蛋白卡做好C“主側(cè)”、D“次側(cè)”、患者姓名標(biāo)記?！爸鱾?cè)”微孔中加入獻(xiàn)血者1%紅細(xì)胞懸液50 μ1 及受血者血清或血漿50 μ1?！按蝹?cè)”微孔中加入受血者1%紅細(xì)胞懸液50 μ1 及獻(xiàn)血者血漿50 μ1。專用孵育器中37 ℃孵育15 min。專用離心機(jī)離心5 min 后觀察并記錄反應(yīng)結(jié)果。低離子凝聚胺法試劑盒購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司，微柱凝膠法試劑盒購(gòu)自長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司。

4.觀察指標(biāo)

（1）配血成功率。①低離子凝聚胺技術(shù)：觀察1 min，若液體凝聚消失即為陰性，表示配血成功，反之則為陽(yáng)性，表示配血失?。?5］；②卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)：紅細(xì)胞均沉淀堆積在管底即為陰性，若有部分紅細(xì)胞或全部與凝膠結(jié)合即為陽(yáng)性［16］。（2）檢驗(yàn)效能。記錄治療后實(shí)際成功例數(shù)，以此為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)效能，包括靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度。（3）檢驗(yàn)時(shí)間。記錄不同輸血檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)時(shí)間。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究所得數(shù)據(jù)均用SPSS 20.0 分析，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.ABO新生兒溶血病治療效果

76 例新生兒中，實(shí)際成功治療例數(shù)為69 例，治療成功率為90.79%；失敗例數(shù)為7例，治療失敗率為9.21%。

2.兩種輸血檢驗(yàn)技術(shù)的配血成功率比較

采用低離子凝聚胺技術(shù)配血成功65 例（85.53%）、失敗11例（14.47%），采用卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)配血成功71例（94.7%）、失敗5 例（5.26%），兩種檢驗(yàn)技術(shù)的配血成功率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.515，P=0.113）。

3.兩種輸血檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)效能比較

兩種檢驗(yàn)技術(shù)的診斷效能比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1、表2。

表1 76例ABO溶血病新生兒采用不同檢驗(yàn)技術(shù)的配血結(jié)果（例）

表2 76例ABO溶血病新生兒采用兩種輸血檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)效果比較（%）

4.兩組輸血檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)時(shí)間比較

低離子凝聚胺技術(shù)檢驗(yàn)時(shí)間為（16.11±1.79）min，明顯短于卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)［（17.43±1.94）min］，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.083，P=0.003）。

討論

新生兒溶血病是因母親與新生兒血型不一致所造成的一種疾病，新生兒在出生時(shí)會(huì)被動(dòng)地輸入母親體內(nèi)免疫球蛋白G（IgG）類抗體，導(dǎo)致新生兒體內(nèi)細(xì)胞表面的抗原遭受攻擊，從而引起的免疫性溶血?。?7-18］。ABO 溶血病史臨床最為常見的，指新生兒血型為A 或B 型，而母親血型為O型［19-20］?；純旱呐R床典型癥狀為黃疸、貧血、肝脾大等，嚴(yán)重會(huì)并發(fā)膽紅素腦病，且該并發(fā)癥發(fā)展較為迅速，如得不到及時(shí)治療，會(huì)嚴(yán)重影響新生兒的生長(zhǎng)發(fā)育［21-22］。臨床治療主要通過(guò)藍(lán)光照射、輸血等對(duì)因、對(duì)癥治療，還可以補(bǔ)充白蛋白、糾正代謝性酸中毒等藥物治療［23］。輸血是最主要的治療方法。為了保障新生兒生命安全，輸血前須進(jìn)行輸血檢驗(yàn)，判斷是否適用［24］。傳統(tǒng)輸血檢驗(yàn)方法有鹽水法、酶介質(zhì)試驗(yàn)等，成本低、操作簡(jiǎn)單，但檢出抗體比較常規(guī)，對(duì)IgG類效果不佳，受影響因素較多，結(jié)果準(zhǔn)確率不高［25-26］。

低離子凝聚胺和卡式微柱凝膠試驗(yàn)是目前臨床應(yīng)用率較高的兩種，因此，本研究對(duì)其在新生兒ABO溶血病中輸血檢驗(yàn)效能進(jìn)行對(duì)比。本研究顯示，低離子凝聚胺技術(shù)與卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)的配血成功率及檢驗(yàn)效能差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低離子凝聚胺技術(shù)檢驗(yàn)時(shí)間明顯短于卡式微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)。低離子凝聚胺技術(shù)：在低離子正電荷環(huán)境作用下，可減弱紅細(xì)胞間靜電斥力，縮短細(xì)胞間距，使得抗原抗體結(jié)合更為緊密，形成持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、肉眼可見的凝集沉淀，非特異性凝集沉淀可被假凝結(jié)清除液迅速清除，從而保障檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性［27］。但漏檢率、假陰性率較高［28］?？ㄊ轿⒅z試驗(yàn)是利用分子排阻原理，觀察微柱內(nèi)是否形成紅細(xì)胞與血清復(fù)合物及其與凝膠分子結(jié)合狀態(tài)可有效判斷是否配血成功［29］。此技術(shù)靈敏度和準(zhǔn)確度更高，操作簡(jiǎn)便，且能減少血源污染，通過(guò)37 ℃孵育還可以減少假陽(yáng)性結(jié)果，但其需要專用離心機(jī)、孵育儀器，臨床使用成本較高［30］。因此，臨床可根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的檢驗(yàn)技術(shù)。

綜上所述，兩種技術(shù)存在各自不同的優(yōu)缺點(diǎn)，臨床可根據(jù)新生兒的實(shí)際情況行合理選擇相應(yīng)的檢驗(yàn)技術(shù)，從而有效保障輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明陳良麗、陳放：研究實(shí)施，數(shù)據(jù)整理，論文撰寫，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究指導(dǎo)，論文修改，經(jīng)費(fèi)支持