胃癌微環(huán)境中CAFs、THBS4的臨床意義及與預后的關(guān)系

劉紅芬 王征

胃癌是世界范圍內(nèi)最為常見的惡性腫瘤之一,且在我國的病發(fā)率及死亡率均處于較高水平,惡性程度極強,多數(shù)患者一經(jīng)確診既為中晚期[1]。在目前臨床中,對于中晚期胃癌的治療缺乏準確且有效的檢測手段,因此需要迫切尋求對于胃癌早期診斷、治療方案及預后判斷具有指導價值的客觀指標[2]。血小板反應(yīng)蛋白4(THBS4)是通過調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)組織的修復和重塑而參與創(chuàng)面愈合和組織重塑的細胞外分泌糖蛋白之一[3,4]。有報道稱,THBS 4常在乳腺癌及前列腺癌等實體癌腫瘤基質(zhì)中表達[5]。周瀟等[6]表示THBS 4是彌漫性胃癌的重要標志物,且在腫瘤間質(zhì)中檢測到THBS4的表達。雖然已有此類文獻對THBS 4進行了報道,但THBS4在胃癌發(fā)生發(fā)展中的意義一直存在爭議。目前,很少有研究證實THBS4在胃癌中的臨床病理意義,故此本研究旨在探討THBS 4在胃癌中的臨床病理意義,尤其是在腫瘤間質(zhì)中的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015至2018年在我院行手術(shù)切除的100例胃癌組織標本,其中男63例,女37例;年齡31～74歲,中位年齡58歲;腫塊<5 cm 60例,≥5 cm 40例;低分化癌28例,中分化癌48例,高分化癌24例;依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟發(fā)布的第8版AJCC胃癌病理分期標準:Ⅰ～Ⅱ期66例,Ⅲ～Ⅳ期34例。依據(jù)腫瘤組織中THBS4的表達,將患者分為THBS4高表在組(n=38)和THBS4低表達組(n=62)?；颊咝g(shù)前均未接受任何放化療,且術(shù)后繼續(xù)進行隨訪研究3年。

1.2 方法 采用免疫組織化學Elivision二步法檢測,胃癌組織用10%甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片4 μm,脫蠟至水化;高溫抗原修復;室溫下3%H2O2培養(yǎng)10 min;阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;隨后加入抗α-SMA抗體濕盒培養(yǎng)1 h。使用PBS沖洗3 min×3次,加入二抗培養(yǎng)30 min。使用DAB進行顯色,加入850 μl蒸餾水、50 μl DAB、50 μl底物及50 μl底物稀釋液。一抗全部使用pH=6.0檸檬酸鹽進行微波熱修復。每一批染色均進行陽性和陰性對照。Polymer免疫組織化學法進行染色,鏡下尋找最佳顯色位置,染色完成后立即停止,后使用蒸餾水停止顯色反應(yīng)。切片使用蘇木素染液進行1 min染色,后加入梯度乙醇脫水,二甲苯浸泡至切片透明,使用樹膠封片?？贵w均購置于Abgent公司。切片出現(xiàn)棕黃色顆粒細胞則判定為α-SMA陽性。

1.3 統(tǒng)計學分析 應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件,Chi-square檢驗分析THBS4、α-SMA在胃癌組織中表達及其與患者臨床病理特征的關(guān)系,生存率用Kaplan-Meire法生存曲線圖表示,并用log-rank檢驗比較生存曲線,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 THBS4的表達與臨床病理特征的關(guān)系 THBS4-高表達與高α-SMA表達顯著相關(guān);與≥5腫瘤直徑,高腫瘤浸潤深度,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,臨床Ⅲ、Ⅳ期,腫瘤分化程度顯著相關(guān)(P<0.001),且低分化腫瘤組織中THBS4的表達明顯高于高或中分化腫瘤組織(P<0.001),與患者年齡、性別及遠處轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

表1 THBS4 的表達與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.2 α-SMA表達與與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌組織CAFs中α-SMA的表達與≥5腫瘤直徑,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05);與性別、年齡、及組織學分級無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2 α-SMA表達與與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.3 2組患者生存率比較 高THBS4表達組3年生存率(41.03%)明顯低于低THBS 4表達組(64.57%)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見圖1。

圖1 高、低THBS4表達患者生存曲線

3 討論

THBS4是一種細胞外基質(zhì),可以對細胞的增生、黏附及神經(jīng)細胞的成熟起到促進作用。相關(guān)研究結(jié)果顯示,胃癌病灶內(nèi)含有大量新生血管,新生的血管結(jié)構(gòu)不完整、血流阻力較小,流量較大,可以為癌細胞的增殖提供足夠的養(yǎng)分,因此,血管新生在腫瘤的發(fā)展過程中具有重要的影響[7-9]。而由于THBS4的結(jié)構(gòu)中缺少原膠原同源區(qū)及備解素重復序列,無法調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞的增殖與凋亡,因此THBS4會對新血管的生成起到促進作用,從而影響到腫瘤的發(fā)展[10,11]。

筆者發(fā)現(xiàn),目前,THBS4在關(guān)于胃腫瘤方面的研究較少,Kuroda等[12]的研究觀察到在胃癌腫瘤(尤其是腫瘤微環(huán)境中的間質(zhì)細胞)有著THBS4的表達,而THBS4的基質(zhì)細胞也有著CAFs標志物的表達,并通過蛋白質(zhì)印記實驗表明THBS4是從CAFs表達的,而不是從正常成纖維細胞和癌細胞系表達。本次研究中,通過病例分析顯示,THBS4的高表達與α-SMA的高表達相關(guān),這些發(fā)現(xiàn)提示,在胃癌中,THBS4可能是由CAFs表達的。有的研究結(jié)果表明,用人彌漫性胃癌細胞系的條件培養(yǎng)基孵育可刺激CAFs上THBS4的轉(zhuǎn)錄[13]。由此可以推測腫瘤細胞來源的轉(zhuǎn)化生長因子β刺激CAFs上THBS4的表達,從而導致血管生成和腫瘤進展。

腫瘤細胞微環(huán)境中的細胞成分包括免疫細胞、內(nèi)皮細胞及成纖維細胞,其中成纖維細胞的數(shù)量最多,分布最廣[13-15]。且與正常組織內(nèi)的成纖維細胞相比,腫瘤細胞微環(huán)境中的成纖維細胞處于活化狀態(tài),在表型和功能上有著顯著變化,且會通過多種信號轉(zhuǎn)導和生物因子影響到腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和浸潤以及新生血管的生成等。CAFs的高表達可以為癌細胞的增生以及浸潤創(chuàng)造基礎(chǔ)[16]。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),THBS4-高表達與高α-SMA表達顯著相關(guān);與≥5 cm腫瘤直徑,高腫瘤浸潤深度,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,臨床Ⅲ、Ⅳ期,腫瘤分化程度顯著相關(guān)(P<0.001),且低分化腫瘤組織中THBS4的表達明顯高于高或中分化腫瘤組織(P<0.001),與患者年齡、性別及遠處轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。胃癌組織CAFs中α-SMA的表達與≥5 cm腫瘤直徑,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05);與性別、年齡、及組織學分級無關(guān)(P>0.05)。這說明,在腫瘤的發(fā)展過程中,高THBS-4表達與腫瘤發(fā)展程度顯著相關(guān),且證實了CAFs上的THBS-4是胃癌的發(fā)展獨立相關(guān)。通過對患者生存率進行比較,發(fā)現(xiàn)高THBS4表達組3年生存率(41.03%)明顯低于低THBS 4表達組(64.57%)差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。尤其是Ⅰ期和Ⅲ期高表達Thbs 4患者的預后明顯低于Ⅰ期和Ⅲ期低表達組。說明基質(zhì)細胞中Thbs 4的高表達是胃癌患者預后的獨立因素。CAFs中的Ths4可以作為胃癌患者(尤其是Ⅰ、Ⅲ期胃癌患者)的的預后指標。

綜上所述,Thbs 4在胃癌微環(huán)境中表達,CAFs中的THBS4與發(fā)展密切相關(guān),且可以作為胃癌患者的預后評估指標。