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    多環(huán)芳烴相關(guān)代謝酶CYP1A1和GSTP1基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)史的關(guān)系

    2023-06-15 01:42:12陳立霞李燕岳婷史建林宋瑤劉璇李淑榮
    河北醫(yī)藥 2023年8期
    關(guān)鍵詞:孕產(chǎn)芳烴條帶

    陳立霞 李燕 岳婷 史建林 宋瑤 劉璇 李淑榮

    近年來,有關(guān)遺傳基因、環(huán)境化學物質(zhì)暴露與不良孕產(chǎn)史的關(guān)系逐漸受到了諸多學者的關(guān)注,成為當前臨床研究的重點、熱點之一[1,2]。多環(huán)芳烴普遍存在于大自然環(huán)境中的有機污染物,是木材、石油、煤等有機化合物不完全燃燒的產(chǎn)物,具有較強的致癌性、致畸性,生物降解難度較大[3,4]。臨床有研究證實:子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展與多環(huán)芳烴暴露存在密切相關(guān)性[5]?;诖?本文回顧性分析2018年1月至2020年1月張家口地區(qū)婦幼保健院生產(chǎn)的618例有不良孕產(chǎn)史的孕產(chǎn)婦,目的在于探究目的在于探究不良孕產(chǎn)史與谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P1(GSTP1)、細胞色素P450 1A1(CYP1A1)的關(guān)系,報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 醫(yī)院倫理委員會已審批,回顧性選取2018年1月至2020年1月張家口地區(qū)婦幼保健院生產(chǎn)的618例有不良孕產(chǎn)史的孕產(chǎn)婦作為研究組,選定同期本院接診的600例健康孕婦作為健康組,研究組:年齡23~40歲,平均(31.52±4.04)歲;孕周12~32周,平均(22.82±3.04)周。健康組:年齡25~39歲,平均(31.66±4.12)歲;孕周14~30周,平均(22.79±3.09)周。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 納入與排除標準 納入標準:(1)研究組胚胎停育或自然流產(chǎn)次數(shù)>2次,有染色體畸形生育史或先心病、唇腭裂、神經(jīng)管畸形等胎兒畸形生育史;(2)年齡20~40歲;(3)有再生育需求;(4)精神、意識均正常,可配合醫(yī)生完成本研究。排除標準:(1)合并全身嚴重感染性疾病者;(2)孕前患有貧血、心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病等疾病者。(3)同期參與其他研究者;(4)合并自身免疫性疾病者;(5)腎、肝等臟器功能不全者。

    1.3 方法 (1)收集血樣、提取DNA:收集所有受檢者5 ml空腹靜脈血以及1 ml新生兒臍帶血,置于EDTA抗凝管中,放置在4℃的環(huán)境下保存,采用全自動核酸提取儀(型號:iAUTOMAG;生產(chǎn)企業(yè):北京百泰克生物技術(shù)有限公司)對DNA進行提取,血液樣品必須在采集后的24 h內(nèi)完成檢測。(2)基因多態(tài)性檢測:①檢測CYP1A1基因多態(tài)性:引物序列上游為5’-TAGGAGTCTTGTCT-CATGCCT-3’、引物序列下游分別為5’CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’,預變性、變性、退火、延伸處理環(huán)境溫度分別是94℃、94℃、59℃、72℃,時間分別是5 min、1 min、1 min、1 min,35個循環(huán)后,再次在72℃下延伸5 min,37℃下消化15 min,最后進行電泳處理。340 bp sCYP1A1基因擴增片段,野生純合型CYP1A1MsPI基因,可觀察到360bp的DNA條帶1條,純合突變型CYP1A1MsPI基因,可觀察到140 bp、200 bp DNA條帶2條,雜合突變型CYP1A1MsPI基因,可觀察到340 bp、140 bp、200 bp DNA條帶3條,CYP1A1基因多態(tài)性位點的基因型根據(jù)條帶大小以及條帶數(shù)確定。②檢測GSTP1基因多態(tài)性:引物序列上游是5’CAGTGACTGTGTGTTGATCA-3、引物序列下游是5’TGCTCACATAGTTGGTGTAGATGAGGGATA-3,預變性、變性、退火、延伸處理環(huán)境溫度分別是95℃、95℃、56℃、72℃,時間分別是5 min、25 s、30 s、30 s,34個循環(huán)后,再次在72℃下延伸10 min,37℃下消化15 min,最后進行電泳處理。3種基因型片段長度分別是142 bp變異型、142 bp、173 bp雜合型、173 bp野生型,GSTP1基因多態(tài)性位點的基因型根據(jù)條帶大小以及數(shù)目確定,結(jié)果以UVP凝膠成像系統(tǒng)觀察。最后對DNA樣品的10%進行重復性檢驗,實驗前后結(jié)果一致性在100.00%。本研究引物序列均來自深圳會眾生物技術(shù)有限公司。

    2 結(jié)果

    2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度檢測 研究組與健康組等位基因分布滿足Hardy-Weinbery平衡,樣本具備群體代表性。見表1。

    表1 CYP1A1、GSTP1基因Hardy-Weinberg平衡檢測

    2.2 2組CYP1A1 MspI基因頻率分布比較 CYP1A1 MspI基因型GG比例研究組高于健康組,CYP1A1 MspI基因頻率分布2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,95%CI:0.738~0.938)。見表2。

    表2 2組CYP1A1 MspI基因頻率分布比較 例(%)

    2.3 2組GSTP1 SnaBI基因頻率分布比較 研究組GSTP1 SnaBI基因型GG比例(52.43%)高于健康組(44.33%),2組GSTP1 MspI基因頻率分布比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,95%CI:0.744~0.928。見表3。

    表3 2組GSTP1 SnaBI基因頻率分布比較 例(%)

    2.4 2組一般資料比較 2組孕前BMI、不良孕產(chǎn)史次數(shù)、葉酸服用史、有害因素接觸史、妊高癥病史、妊娠糖尿病病史與健康組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

    表4 2組一般資料比較

    2.5 Logistic回歸分析CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性 因變量為不良孕產(chǎn)史,自變量為 CYP1A1、GSTP1,同時將孕前BMI、不良孕產(chǎn)史次數(shù)、葉酸服用史、有害因素接觸史、妊高癥病史、妊娠糖尿病病史均納入自變量,Logistic回歸分析,不良孕產(chǎn)史的獨立危險因素是CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性(P<0.05),以無序多分類反應(yīng)變量分析,孕前BMI、不良孕產(chǎn)史次數(shù)、葉酸服用史、有害因素接觸史與CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性無相關(guān)性(P>0.05),CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性會增加妊高癥、妊娠糖尿病發(fā)生風險(P<0.05)。見表5。

    3 討論

    不良孕產(chǎn)史是指在上次妊娠時,出現(xiàn)不明原因的胚胎停育、自然流產(chǎn)、產(chǎn)后大出血、畸形胎兒等,較為常見的是胚胎停育、自然流產(chǎn)[6,7]。在對不良孕產(chǎn)史發(fā)病因素研究的過程中發(fā)現(xiàn),個體遺傳易感性是誘發(fā)不良孕產(chǎn)史至關(guān)重要的一項危險因素[8,9]。不同個體對于外界環(huán)境接觸毒物的代謝能力不同,從而產(chǎn)生的毒性作用也不同[10]。多環(huán)芳烴物質(zhì)進入人體后,通過Ⅰ相代謝酶活化,發(fā)揮損傷效應(yīng),通過Ⅱ相代謝酶減毒作用最終從體外排出[11,12]。CYP1A1、GSTP1是多環(huán)芳烴相關(guān)Ⅰ相代謝酶中最主要的兩種,既往臨床將兩種代謝酶應(yīng)用于肺癌等疾病診斷、預后評估中[13]。

    CYP1A1是最早被測序、分類的CYP450,參與了多環(huán)芳烴致癌物的代謝[14]。CYP1A1的基因位點共有8個,其中CYP1A1*2A是指MspI,MspI可以被限制性內(nèi)切酶識別,形成不同的等位基因型[15,16]。GSTP1基因位點也具有多態(tài)性,與GSTM1互為同工酶,是較為重要的與化療反應(yīng)、腫瘤易感性相關(guān)的一種等位基因[17,18]。人體胎兒期CYP1A1活性較低,主要表達GSTP1,且GSTP1位于11號染色體上[19]。本對有不良孕產(chǎn)史的孕婦、健康孕婦進行了CYP1A1、GSTP1基因頻率分布對比研究,結(jié)果顯示:CYP1A1 MspI基因型GG比例研究組(80.26%)高于健康組(54.50%),研究組GSTP1 SnaBI基因型GG比例(52.43%)高于健康組(44.33%),P<0.05。意味著有不良孕產(chǎn)史的產(chǎn)婦CYP1A1 MspI、GSTP1 SnaBI基因型GG的比例相對較高,基因型GG突變會增加不良孕產(chǎn)史發(fā)生風險。在曹曉敏等[20]研究中,對母親孕期多環(huán)芳烴暴露是否會影響子女神經(jīng)行為發(fā)育進行了研究,結(jié)果顯示,子女動作能DQ經(jīng)檢測與孕婦尿∑OH-PAHs存在一定的劑量-反應(yīng)關(guān)系,每增加一個單位的∑OH-PAHs,子女的動作能DQ就會出現(xiàn)降低跡象,意味著多環(huán)芳烴暴露會誘發(fā)不良孕產(chǎn)史。從本研究可知,雜合型AA發(fā)生不良孕產(chǎn)史的風險要比野生型GG的低,究其原因,可能與野生型GG更容易誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)、損傷局部組織細胞、誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。經(jīng)Logistic回歸分析,發(fā)現(xiàn)不良孕產(chǎn)史的獨立危險因素是CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性(P<0.05),以無序多分類反應(yīng)變量分析,孕前BMI、不良孕產(chǎn)史次數(shù)、葉酸服用史、有害因素接觸史與CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性無相關(guān)性(P>0.05)CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性會增加妊高癥、妊娠糖尿病發(fā)生風險(P<0.05)。提示誘發(fā)不良孕產(chǎn)史的危險因素中,CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性是獨立危險因素。本研究樣本病例數(shù)較小、病例均來源于同一地區(qū),對結(jié)果的代表性、一般性、普遍性有所影響,故仍舊需臨床擴大樣本病例數(shù)、增加不同地區(qū)不良孕產(chǎn)史患者,為分析CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)史的關(guān)聯(lián)提供更多參考依據(jù)。

    綜上所述:不良孕產(chǎn)史與CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性存在一定關(guān)聯(lián),并且與不良孕產(chǎn)史的妊高癥、妊娠糖尿病等傳統(tǒng)影響因素存在一定聯(lián)系,臨床可通過及早檢測CYP1A1、GSTP1基因多態(tài)性,評估不良孕產(chǎn)史發(fā)生風險,及早給予針對性處理。

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