一株野生金針菇菌種的分離、鑒定與生物學(xué)特性研究

馮連榮,張 妍,趙鑫聞,宋立志,梁德軍

(1.遼寧省楊樹(shù)研究所,遼寧 蓋州 115213; 2.遼寧省經(jīng)濟(jì)林研究所,遼寧 大連 116030)

金針菇(Flammulinafiliformis)是一種常見(jiàn)的食、藥用菌,在現(xiàn)代真菌分類(lèi)系統(tǒng)上,屬于擔(dān)子菌類(lèi)層菌綱(Hymenomycetes)傘菌目(Agaricales)白蘑科(Tricholomataceae)金針菇屬(Flammulina)[1],在自然界中分布廣泛,在中國(guó)北起黑龍江省,南至云南省,東起江蘇省,西至新疆維吾爾自治區(qū)均適合金針菇的生長(zhǎng)。金針菇是一種木材腐生菌,易生長(zhǎng)在柳、榆、白楊樹(shù)等闊葉樹(shù)的枯樹(shù)干和樹(shù)樁上。金針菇營(yíng)養(yǎng)豐富,富含多種氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì),其中賴(lài)氨酸和精氨酸含量尤其豐富,賴(lài)氨酸含量對(duì)兒童智力和生長(zhǎng)發(fā)育有良好的促進(jìn)作用,具有“增智菇”的美譽(yù)[2]。金針菇還富含維生素B1、維生素B2、尼克酸、維生素E和維生素C等多種維生素,且富含鈣、硒、磷、鐵等多種礦物質(zhì),其體內(nèi)多糖具有較好的抗腫瘤作用[3-4]。此外,金針菇還具有提高免疫力、降低膽固醇、保護(hù)肝和調(diào)節(jié)機(jī)體代謝水平的作用[3,5],具有相當(dāng)廣闊的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。

目前,關(guān)于金針菇的研究主要圍繞人工栽培[6-8]、工廠化栽培[9-12]、遺傳育種[13-15]、開(kāi)發(fā)利用[16-22]等方面。隨著人們生活水平的不斷提高,對(duì)食品的營(yíng)養(yǎng)、健康和風(fēng)味等重視程度也越來(lái)越高[23],野生食用菌備受青睞,已成為餐桌上人們爭(zhēng)相品嘗的美味。但無(wú)序采摘、過(guò)度采摘導(dǎo)致野生食用菌資源遭到空前破壞,開(kāi)展野生食用菌人工馴化勢(shì)在必行。本研究以采集于楊樹(shù)樹(shù)樁上的大型真菌為研究對(duì)象,通過(guò)菌種分離、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定、出菇試驗(yàn),確定該菌種為金針菇。通過(guò)單因素試驗(yàn),研究不同條件對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響,為金針菇開(kāi)發(fā)利用提供候選菌種資源。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種子實(shí)體于2015年4月23日采集自遼寧省凌海市金城苗圃,子實(shí)體長(zhǎng)于楊樹(shù)樹(shù)樁上。

1.2 培養(yǎng)基與試劑

PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g·L-1,葡萄糖20 g·L-1,瓊脂20 g·L-1,pH值自然,121 ℃滅菌20 min備用。用于菌種培養(yǎng)、擴(kuò)繁,以及pH值、溫度篩選試驗(yàn)。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基:葡萄糖20 g·L-1,尿素2 g·L-1,磷酸二氫鉀1 g·L-1,硫酸鎂0.5 g·L-1,瓊脂20 g·L-1,pH值自然,121 ℃滅菌20 min備用。用于碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和維生素篩選試驗(yàn)。

快捷型植物基因組DNA提取系統(tǒng)(非離心柱型)、大量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司;ExTaq酶、DL2000 marker、大腸埃希菌(Escherichiacoli)JM109感受態(tài)細(xì)胞、pMD?-18-T vector購(gòu)自TaKaRa寶生物工程(大連)有限公司;引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3 菌種分離、純化

采用組織分離法[24]進(jìn)行菌種分離,于超凈工作臺(tái)內(nèi)取子實(shí)體菌蓋與菌柄交界處組織塊,接種至PDA培養(yǎng)基中,置于25 ℃培養(yǎng)箱中黑暗靜置培養(yǎng),菌絲直徑達(dá)到2 cm左右,進(jìn)行轉(zhuǎn)接、純化培養(yǎng),獲得純種菌絲,將該菌種命名為JC423。獲得菌種置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 菌種鑒定

1.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定

對(duì)采集的子實(shí)體大小、菌蓋形狀、顏色、菌褶顏色、菌柄著生方式、質(zhì)地、孢子印顏色、菌絲顏色等進(jìn)行測(cè)量和記錄,參考相關(guān)文獻(xiàn)[2,25]對(duì)JC423進(jìn)行初步分類(lèi)。

采用玻片培養(yǎng)法[26]觀察JC423的菌絲形態(tài)。菌絲培養(yǎng)結(jié)束后,用OLYMPUS BX51顯微鏡觀察菌絲有無(wú)隔膜,有無(wú)鎖狀聯(lián)合、孢子形狀等。

1.4.2 出菇試驗(yàn)

JC423采集自楊樹(shù)樹(shù)樁上,為了驗(yàn)證菌種分離的正確性,設(shè)計(jì)以木屑、玉米芯為主料的栽培配方,進(jìn)行出菇試驗(yàn),配方設(shè)計(jì)如下:配方1,木屑78%、麩皮20%、石膏1%、糖1%;配方2,玉米芯70%、木屑20%、麩皮8%、石膏1%、糖1%;配方3,木屑40%、玉米芯38%、麩皮20%、石膏1%、糖1%;配方4,木屑70%、麥麩15%、玉米粉13%、石膏1%、糖1%。

接種后,置于25 ℃進(jìn)行發(fā)菌期培養(yǎng),觀察是否長(zhǎng)出子實(shí)體。

1.4.3 分子生物學(xué)鑒定

用ITS序列進(jìn)行菌種JC423的分子鑒定。用天根快捷型植物基因組DNA提取系統(tǒng)(非離心柱型)進(jìn)行菌絲DNA提取,利用NanoPro 2010超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度,進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。按照馮連榮等[26]的反應(yīng)體系和反應(yīng)程序進(jìn)行ITS序列PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)凝膠回收,連接至克隆載體pMD?-18-T vector,并轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌JM109中,經(jīng)過(guò)藍(lán)白斑篩選和PCR檢測(cè),將陽(yáng)性克隆送至TaKaRa寶生物工程(大連)有限公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。測(cè)序結(jié)果登錄NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)進(jìn)行BLAST比對(duì),下載相似性序列的ITS區(qū)域,用Clustalw進(jìn)行多序列比對(duì),并輔以人工修正,分析時(shí)所有參數(shù)均為軟件默認(rèn)值。用MEGA7.0軟件的N-J(Neihbor-Joining)法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),構(gòu)建發(fā)育樹(shù)時(shí)進(jìn)行自舉檢驗(yàn),重復(fù)抽樣1 000次。

1.5 生物學(xué)特性研究

采用單因素試驗(yàn),研究不同碳源(果糖、甘露醇、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖,以不添加碳源為對(duì)照)、氮源(蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨、尿素,以不添加氮源為對(duì)照)、無(wú)機(jī)鹽(氯化鈉、硫酸鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀,以不添加無(wú)機(jī)鹽為對(duì)照)、維生素(VB1、VB2、VB3、VB6、VB12,以不添加維生素為對(duì)照)、pH值(4、5、6、7、8、9、10)和溫度(5、10、15、20、25、30、35 ℃)對(duì)JC423菌絲生長(zhǎng)的影響。每種處理重復(fù)4次,當(dāng)其中一個(gè)處理菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿時(shí)結(jié)束試驗(yàn),每天測(cè)量菌絲餅直徑,計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度,同時(shí)觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)、濃密度等生長(zhǎng)指標(biāo)。

v=d/t。

(1)

式(1)中:v表示菌絲生長(zhǎng)速度,mm·d-1;d表示菌絲直徑,mm;t表示培養(yǎng)時(shí)間,d。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用Excel軟件整理數(shù)據(jù),用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 純種菌絲獲得

對(duì)采集的子實(shí)體(圖1-A)進(jìn)行菌種分離,2 d后可見(jiàn)白色菌絲長(zhǎng)出,轉(zhuǎn)接純化3次,獲得純種菌絲,將菌種命名為JC423(圖1-B)

圖1 JC423子實(shí)體和菌落(正面)Fig.1 Sub-entity and colony (front) of JC423

2.2 菌種形態(tài)學(xué)鑒定

采集的子實(shí)體中等大,菌蓋直徑1.5 cm左右,呈球形或呈扁半球形,菌蓋黃褐色,菌肉白色,中央厚,邊緣薄,菌褶白色或象牙色,較稀疏,長(zhǎng)短不一,與菌柄離生。菌柄中央生,中空?qǐng)A柱狀,稍彎曲,長(zhǎng)3.5～5.0 cm,直徑0.3～1.5 cm,菌柄基部相連,上部呈肉質(zhì)、下部為革質(zhì),表面密生黑褐色短絨毛,孢子印白色。初步將采集菌種JC423鑒定為金針菇。在PDA平板培養(yǎng)基上JC423菌落白色平展、邊緣整齊,菌絲較密、不產(chǎn)生色素,菌絲有隔、分枝和鎖狀聯(lián)合,孢子無(wú)色、圓柱形(圖2)。

圖2 JC423 菌絲和孢子Fig.2 Hyphae and spores of JC423

2.3 子實(shí)體獲得

4個(gè)栽培配方均獲得了子實(shí)體,且與野外采集的子實(shí)體形態(tài)特征相符(圖3)。各配方菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)袋時(shí)間相差不大(表1),平均單袋產(chǎn)量在148.44～330.15 g,生物學(xué)效率為29.68%～65.18%。

表1 JC423出菇情況Table 1 Fruiting of JC423

圖3 JC423室內(nèi)出菇情況Fig.3 Indoor fruiting situation of JC423

2.4 分子生物學(xué)鑒定

2.4.1 ITS序列PCR擴(kuò)增結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳檢結(jié)果表明,JC423菌絲DNA單一無(wú)雜質(zhì),無(wú)降解,濃度為734.68 μg·mL-1,D260/D280約為2,說(shuō)明DNA質(zhì)量較好,可以作為PCR反應(yīng)模板。PCR反應(yīng)擴(kuò)增出約700 bp的目的片段(圖4),經(jīng)過(guò)連接、轉(zhuǎn)化、藍(lán)白斑篩選,隨機(jī)挑取14個(gè)白色菌落進(jìn)行菌液PCR,其中有7個(gè)擴(kuò)增出目的條帶,將擴(kuò)增出目的條帶的3個(gè)陽(yáng)性克隆送至TaKaRa寶生物工程(大連)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

M,DL 2000 marker;CK,水對(duì)照;1～6,JC423 PCR產(chǎn)物。M, DL 2000 marker; CK, Water control, 1-6, JC423 PCR products.圖4 JC423 ITS序列PCR產(chǎn)物擴(kuò)增電泳圖Fig.4 PCR amplification electrophoresis of ITS seqence from JC423

2.4.2 序列分析與進(jìn)化樹(shù)分析

目的片段序列測(cè)定結(jié)果顯示,片段長(zhǎng)度為773 bp,將測(cè)序結(jié)果在NCBI進(jìn)行BLAST比對(duì),相似性最高的是F.filiformisstrain F007;搜索獲得100條相似性序列,主要菌種為F.filiformis(金針菇)和F.velutipes(毛柄金錢(qián)菌)2種,下載部分相似性序列,利用MEGA 7.0軟件構(gòu)建進(jìn)化樹(shù),JC423與序列號(hào)為MN337400.1的F.filiformisstrain F007聚為一支(圖5),結(jié)合形態(tài)學(xué)特征將JC423鑒定為F.filiformis。測(cè)序結(jié)果為T(mén)CCGTAGGTGAACCTGCG GAAGGATCATTAATGAACTTTGAACTGCTTGTGGCTCTTTGGGCTGTTGCTGACGACGACCTTCACGGGTTTTCGTACGTGCACGTCTGGGGTTGCAGCTTTCTTCGTCCACCTGTGCACACTCTGTAGGTCTGGATACCCCATTGGAAGGGTGCGCTTTTTGCGCTCCCTTTGCCTTCCAGGCCTATGTCTTATAAACACTATAGTATGTAACGAATGTCATTGATTATTGGACTTCACTGTCCTTTAAACTAAATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACCTTGCGCCCTTTGGTACTCCGAAGGGCATGCCTGTTTGAGTGTCAGTAACTTCTCAACCTCCCTCACTTTGTTGTGAGCTGGCGGATTGGACGTGGGGGCTTGCTGGACCTTATCTTTGGGTTCAGCTCCCCTGAAATGCATTAGCAGAAACCGTTACCTTTTGGCGCGCTGCAGCTGTGATAATTATCTACGGCTATGGCTGGGCTGACTGTGTTGTAGCGCTCGTCTCGTCTCTGAAGTGGTTTCGCCTTAGTTGGTGCTTCCCTTTGCCTTCTCTCTCACGAGAGATACCTGTGACGCGAGTGCGCGGGCTATTCCGCTTCTAACCGTCCCCTTGTGGGACAACTATTGACCATTGACCTCAAATCAGTAGACAGCCAGTTCCG。

圖5 基于ITS序列的JC423與其他菌種的進(jìn)化樹(shù)Fig.5 Evolutionary tree of JC423 and other stains based on ITS sequences

2.5 JC423生物學(xué)特性

2.5.1 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

5種碳源均可以被JC423菌絲所利用(表2),其中,果糖為碳源時(shí)菌絲長(zhǎng)勢(shì)旺,菌絲健壯而濃密,其次是甘露醇、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖;甘露醇作為碳源時(shí)菌絲密度不如可溶性淀粉、蔗糖和葡萄糖。培養(yǎng)基中不加碳源時(shí),菌絲可以生長(zhǎng),但菌絲生長(zhǎng)較慢,菌絲密度顯著小于添加碳源的培養(yǎng)基。

表2 不同條件對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響Table 2 Effects of different conditions on mycelial growth of Flammulina filiformis

2.5.2 不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)基中有無(wú)氮源菌絲均可生長(zhǎng),但菌絲生長(zhǎng)有差異(表2)。菌絲在蛋白胨和酵母膏作為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)快,菌絲濃密、健壯,菌絲生長(zhǎng)速度顯著快于其他氮源培養(yǎng)基,其次是以硫酸銨作為氮源的培養(yǎng)基,菌絲生長(zhǎng)較好。以尿素作為氮源時(shí),菌絲生長(zhǎng)較慢,但是菌絲長(zhǎng)勢(shì)尚可。不加氮源時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度慢,菌絲稀薄長(zhǎng)勢(shì)弱。綜上,宜選擇蛋白胨作為JC423菌絲培養(yǎng)的氮源。

2.5.3 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

JC423菌絲在添加各種無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基中均長(zhǎng)勢(shì)良好,各無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響差異不顯著(表2),說(shuō)明金針菇菌絲生長(zhǎng)不受無(wú)機(jī)鹽的影響。

2.5.4 不同維生素對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

JC423菌絲在添加不同維生素的培養(yǎng)基中和對(duì)照培養(yǎng)基中均長(zhǎng)勢(shì)良好,是否添加維生素對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)影響不大,各處理菌絲生長(zhǎng)速度差異不顯著,菌絲密度和長(zhǎng)勢(shì)也無(wú)顯著差異(表2)。

2.5.5 不同pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

JC423在各pH值條件下均可以生長(zhǎng),在偏酸和偏堿的條件下菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲密度較中性條件下好,從菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲密度來(lái)看,JC423菌絲更適宜偏堿環(huán)境,pH值為9～10時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度顯著好于其他處理(表2)。

2.5.6 不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響差異顯著(表2),25 ℃條件下,菌絲濃密,生長(zhǎng)速度最快,與其他處理差異極顯著。JC423在較低溫度下可以生長(zhǎng),但菌絲長(zhǎng)勢(shì)不佳,生長(zhǎng)速度慢。超過(guò)35 ℃菌絲不能生長(zhǎng)。結(jié)合菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲生長(zhǎng)速度,確定25 ℃為JC423菌絲生長(zhǎng)的最適宜溫度。

3 結(jié)論與討論

金針菇是一類(lèi)重要的食藥用高等大型真菌,是我國(guó)最早進(jìn)行人工栽培的食用菌之一,也是我國(guó)食用菌工廠化生產(chǎn)中規(guī)模最大、產(chǎn)量最高、發(fā)展最快和技術(shù)最成熟的栽培種類(lèi),產(chǎn)量穩(wěn)居世界之首[27]。目前我國(guó)栽培的金針菇可以分為白色和黃色2種,白色品系有日本金針菇、F21、Fv088、金針菇SD-1、金白1號(hào)等。白色金針菇一般生育期較長(zhǎng)、產(chǎn)量高,主要用于工廠化栽培。然而,我國(guó)金針菇生產(chǎn)對(duì)外依賴(lài)程度較大,種源大多來(lái)自日本和韓國(guó),并且存在菌種退化、適應(yīng)性差、變異大和性狀不穩(wěn)定等種源問(wèn)題[28]。黃色品系有雜交19、F135、三明1號(hào)、魯金針1號(hào)、金針913等。黃色金針菇生育期短,但子實(shí)體整齊度差,主要以農(nóng)法栽培為主,工廠化栽培品種較少。我國(guó)亟需加強(qiáng)金針菇種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)、優(yōu)良品種的選育和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)菌株推廣[29]。目前用于人工栽培的食用菌絕大多數(shù)是經(jīng)由野生菌種馴化而來(lái),野生菌種具有抗病性強(qiáng)、生物轉(zhuǎn)化率高等特點(diǎn),將篩選出來(lái)的野生菌株不斷進(jìn)行人工選擇,可逐漸培養(yǎng)為栽培種。我國(guó)選育的第一個(gè)金針菇優(yōu)良菌種“三明1號(hào)”便是從全國(guó)28個(gè)野生菌株中選育而來(lái)。本研究分離獲得一個(gè)黃色金針菇菌株JC423,為金針菇的人工馴化提供了候選的菌種資源。

截至2021年7月,Species Fungorum索引顯示,全球分布的金針菇資源共有30條記錄,被認(rèn)可的金針菇屬物種共計(jì)17個(gè),包括金針菇F.filiformis、刺頭金針菇F.cephalariaePérez-Butrón &Fern.-Vic、芬娜金針菇F.fennaeBas、芬蘭金針菇F.finlandicaP.M.Wang et al.、毛腿金針菇F.velutipes(Curtis) Singer等[29]。金針菇屬野生子實(shí)體形態(tài)可塑性強(qiáng),需要通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子序列分析才能有效鑒定[30]。2015年之前公開(kāi)報(bào)道的中國(guó)、日本和其他亞洲國(guó)家的金針菇被認(rèn)為與產(chǎn)自歐洲的模式種“Flammulinavelutipes(Curtis) Singer”為同一種。2015年中國(guó)科學(xué)院昆明植物所真菌多樣性與分子進(jìn)化研究團(tuán)隊(duì)基于ITS序列的分子系統(tǒng)學(xué)研究認(rèn)為,東亞的金針菇是歐洲金針菇的一個(gè)變種Flammulinavelutipesvar.filiformis[30]。而后2018年該團(tuán)隊(duì)基于ITS序列、翻譯延伸因子1-α(tef1-α)、rpb2和homeodomain1 (HD1)的部分序列對(duì)來(lái)自東亞、歐洲和北美的81個(gè)金針菇菌種進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育研究和種屬劃分,結(jié)果顯示,從東亞馴化而來(lái)的金針菇與原初描述來(lái)自歐洲的F.velutipes是兩個(gè)不同的物種,并將金針菇命名為F.filiformis[31]。本研究分離獲得的JC423最初經(jīng)BLAST比對(duì),相似性最大的均為F.velutipes,撰寫(xiě)本文之際重新進(jìn)行了BLAST比對(duì),并利用F.velutipes模式菌株進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建,結(jié)果表明,JC423與模式菌株系在不同分支,非相同菌種,與中國(guó)河北的F.filiformisstrain F007聚為一支,從而進(jìn)一步確認(rèn)JC423為金針菇。

野生食用菌的馴化栽培,依賴(lài)于對(duì)菌種生物學(xué)特性的研究。本研究采用單因素試驗(yàn),研究了不同碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、維生素、pH值和溫度對(duì)金針菇JC423菌絲生長(zhǎng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示,金針菇JC423適宜碳源為果糖,與已報(bào)道結(jié)果略有不同,如金針菇江山一號(hào)適宜氮源為面粉[32];最適氮源為蛋白胨,其次是酵母膏,可見(jiàn)有機(jī)氮對(duì)金針菇生長(zhǎng)的促進(jìn)作用優(yōu)于無(wú)機(jī)氮。王德昌[33]研究也表明,黃豆粉、蛋白胨、牛肉浸膏、酵母粉是很好的氮源,對(duì)菌絲生長(zhǎng)的促進(jìn)作用優(yōu)于硝酸銨、硫酸銨等無(wú)機(jī)氮。JC423最適宜pH值為9～10,與一般文獻(xiàn)記載稍有差異,例如何俊等[29]研究表明,野生柳生金針菇和金針菇適宜pH值為6.0。JC423最適宜生長(zhǎng)溫度為25 ℃,與李良等[34]的研究結(jié)果基本一致,其確定了金針菇白色菌株F21菌絲適宜生長(zhǎng)溫度為25～27 ℃。無(wú)機(jī)鹽和維生素對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)影響不大。在無(wú)機(jī)鹽方面,何俊等[29]篩選出的金針菇最適無(wú)機(jī)鹽為硫酸鎂;楊云靜[32]認(rèn)為,鉀離子和磷離子是金針菇菌絲生長(zhǎng)必要的。本研究中添加的無(wú)機(jī)鹽對(duì)菌絲長(zhǎng)勢(shì)和生長(zhǎng)速度的影響差異不顯著。培養(yǎng)基中添加各種維生素后,與對(duì)照相比,菌絲更健壯更濃密,但在生長(zhǎng)速度方面差異不顯著,與楊云靜[32]的研究結(jié)果基本一致。下一步應(yīng)該以篩選的對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響較為顯著的碳源、氮源、pH值為直接因素進(jìn)行正交試驗(yàn),以確定對(duì)JC423菌絲生長(zhǎng)影響較大的因子,為野生金針菇種質(zhì)資源開(kāi)發(fā)利用,新品種選育提供一定的數(shù)據(jù)參考。