基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的金藤清痹顆粒治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制研究Δ

翟弋焱,陳美琳,時(shí) 銳,黃佳奇,張景媛,張繁芹,黃志鴻,譚影影,金政森,高藝菲,陶曉宇,劉鵬蕓,吳嘉瑞#,雷 威

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京 100029;2.臨沂市人民醫(yī)院中醫(yī)科,山東 臨沂 276003)

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種常見(jiàn)的自身免疫系統(tǒng)疾病。調(diào)查結(jié)果顯示,全球RA發(fā)病率為0.5%～1.0%[1]。我國(guó)的RA患病人數(shù)已經(jīng)超過(guò)3 000萬(wàn),發(fā)病年齡段主要集中在30～50歲,女性患者多于男性患者[2-3]。2006年第二次全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示,RA是因關(guān)節(jié)病而致殘的第一位原因[4]。西醫(yī)對(duì)于RA的治療,以提高人體免疫功能、減輕炎癥反應(yīng)和緩解疼痛為主,主要的治療藥物有非甾體抗炎藥、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素、單克隆抗體或細(xì)胞受體拮抗劑等生物制劑及靶向小分子藥物等,短期療效較好,但長(zhǎng)期服用可能會(huì)發(fā)生藥物蓄積,損傷患者肝腎功能[5-6]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,RA屬于“痹癥”范疇,以本虛標(biāo)實(shí)為特點(diǎn);肝腎虧虛、氣血虧虛、正氣不足為本,風(fēng)寒濕熱、內(nèi)外邪氣阻滯經(jīng)絡(luò)為標(biāo),基于RA發(fā)病特點(diǎn),其治療原則也以祛邪扶正為主[7]。

金藤清痹顆粒(國(guó)藥準(zhǔn)字Z20123065)為中成藥顆粒制劑,根據(jù)古方“四妙勇安湯”加減而成,由金銀花、青風(fēng)藤、白花蛇舌草、玄參、白芍、生地黃、山慈菇、鹿銜草、當(dāng)歸、甘草和蜈蚣11味藥物組成。金藤清痹顆粒組方中,金銀花、青風(fēng)藤清熱解毒,通痹止痛,為君藥;鹿銜草、山慈菇和白花蛇舌草補(bǔ)血活血,強(qiáng)筋健骨,緩急止痛,為臣藥;佐以玄參、生地、甘草和白芍,滋陰涼血,瀉火解毒;蜈蚣引藥入經(jīng),直達(dá)病所,為使藥;全方共奏清熱解毒、活血消腫、通痹止痛的功效。金藤清痹顆粒在臨床上常被用于治療RA,但其具體作用機(jī)制尚不明確,值得深入研究。

1 資料與方法

1.1 金藤清痹顆?；钚猿煞值暮Y選與靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP),以“白花蛇舌草”“玄參”“青風(fēng)藤”“白芍”“生地黃”“山慈菇”“金銀花”“鹿銜草”“當(dāng)歸”“甘草”和“蜈蚣”為關(guān)鍵詞檢索其化學(xué)成分。設(shè)置口服生物利用度(OB)≥30%、類(lèi)藥性(DL)≥0.18,同時(shí)檢索PubMed、維普數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫(kù),檢索金藤清痹顆粒中對(duì)應(yīng)藥物化學(xué)成分研究的相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中的化學(xué)成分予以補(bǔ)充,最后使用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)相應(yīng)的基因名。

1.2 RA相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

使用GeneCards、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù),檢索關(guān)鍵詞為“Rheumatoid arthritis”,獲得疾病基因,整合2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的查詢(xún)結(jié)果,去除重復(fù)項(xiàng)后得到RA相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 金藤清痹顆粒化學(xué)成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

使用Cytoscape 3.8.2軟件構(gòu)建金藤清痹顆?；瘜W(xué)成分與相關(guān)靶點(diǎn)的成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。根據(jù)度值、介數(shù)、緊密度等相關(guān)參數(shù)進(jìn)行篩選,得到關(guān)鍵的靶點(diǎn)。

1.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建與模塊分析

對(duì)金藤清痹顆粒與RA的靶點(diǎn)取交集,使用STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)分析構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)模型,將模型預(yù)測(cè)網(wǎng)絡(luò)結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape軟件,使用MCODE插件對(duì)該網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行模塊富集分析[8]。

1.5 基因本體(GO)功能富集分析與京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析

使用R軟件對(duì)模塊分析后的關(guān)鍵基因進(jìn)行GO與KEGG分析。

1.6 分子對(duì)接

對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)中的參數(shù)進(jìn)行篩選得到9個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn),對(duì)這些靶點(diǎn)與其相對(duì)應(yīng)的化合物進(jìn)行分子對(duì)接。從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中獲得化合物的SDF格式文件。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)通過(guò)RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)篩選獲得。使用Autodock Vina 1.1.2進(jìn)行運(yùn)算對(duì)接。根據(jù)配體受體結(jié)合的自由能進(jìn)行排序,使用PyMol 2.3.2軟件進(jìn)行可視化處理[9]。

2 結(jié)果

2.1 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

網(wǎng)絡(luò)圖包括563個(gè)節(jié)點(diǎn),3 654條邊,其中153個(gè)化合物與399個(gè)靶點(diǎn)相關(guān)聯(lián),見(jiàn)圖1。

菱形代表化合物的靶點(diǎn);V字形代表對(duì)應(yīng)的藥物;圓形代表藥物的化學(xué)成分the diamond represents the target of the compound;the V shape represents the corresponding drug;the circle represents the chemical composition of the drug圖1 金藤清痹顆粒的成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig 1 Ingredient-target network diagram of Jinteng Qingbi granules

2.2 潛在靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖

對(duì)化合物與疾病的靶點(diǎn)取交集得到131個(gè)交集靶點(diǎn),使用在線分析工具繪制韋恩圖,見(jiàn)圖2。將STRING網(wǎng)站分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape軟件制作PPI網(wǎng)絡(luò)圖,見(jiàn)圖3。該網(wǎng)絡(luò)圖包含143個(gè)節(jié)點(diǎn),1 835條邊。使用MCODE插件進(jìn)行模塊分析,進(jìn)行模塊可視化,見(jiàn)圖4。

圖2 金藤清痹顆粒與RA的交集靶點(diǎn)圖Fig 2 Intersection target map of Jinteng Qingbi granules and RA

每個(gè)節(jié)點(diǎn)的大小代表了其度值,顏色由淺到深代表了緊密中心由大到小the size of each node represents its degree value,and the color from light to deep represents the tight center from large to small圖3 金藤清痹顆粒相關(guān)靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 PPI network diagram of related targets of Jinteng Qingbi granules

A.PPI網(wǎng)絡(luò)子模塊1(score=25.789);B.PPI網(wǎng)絡(luò)子模塊2(score=6.625)A.PPI network sub-module 1 (score=25.789);B.PPI network sub-module 1 (score=6.625)圖4 金藤清痹顆粒治療RA的PPI網(wǎng)絡(luò)模塊Fig 4 PPI network module of Jinteng Qingbi granules in the treatment of RA

2.3 GO與KEGG富集分析

對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)相關(guān)基因富集得到151條KEGG通路和2 567條GO功能條目。P值最低的10條通路為卡波西肉瘤相關(guān)性皰疹病毒感染、癌癥通路、癌癥中的蛋白多糖、人巨細(xì)胞病毒感染、C型凝集素受體信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、甲狀腺激素信號(hào)通路、黏著斑、酪氨酸激酶抑制劑耐藥性及內(nèi)分泌抵抗,見(jiàn)圖5—6。

A.PPI網(wǎng)絡(luò)子模塊1 GO與KEGG圖;B.PPI網(wǎng)絡(luò)子模塊2 GO與KEGG圖A.PPI network sub-module 1 GO and KEGG diagram;B.PPI network sub-module 2 GO and KEGG diagram圖5 金藤清痹顆粒治療RA的PPI網(wǎng)絡(luò)模塊GO和KEGG富集分析結(jié)果Fig 5 PPI network module GO and KEGG enrichment analysis results of Jinteng Qingbi granules in the treatment of RA

圖6 金藤清痹顆粒治療RA的PPI網(wǎng)絡(luò)GO和KEGG富集分析結(jié)果Fig 6 PPI network GO and KEGG enrichment analysis results of Jinteng Qingbi granules in the treatment of RA

2.4 藥物-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

對(duì)模塊網(wǎng)絡(luò)度值、緊密度和介數(shù)3個(gè)參數(shù)進(jìn)行篩選得到9個(gè)核心基因,分別為蛋白激酶B1(Akt1)、胱天蛋白酶3(CASP3)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、白細(xì)胞介素(IL)6、肉瘤基因(SRC)、雌激素受體1(ESR1)、缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF1)、人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)和氨基末端蛋白激酶(JUN)。對(duì)部分分析結(jié)果進(jìn)行可視化展示,見(jiàn)圖7;得到藥物-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖,見(jiàn)圖8。

五角星表示金藤清痹顆粒作用的靶點(diǎn)five-pointed star marker indicates the target of Jinteng Qingbi granules圖7 金藤清痹顆粒作用于TNF信號(hào)通路示意圖Fig 7 Schematic diagram of Jinteng Qingbi granules acting on TNF signaling pathway

最上方的圓形代表藥物,其下方的橢圓形代表關(guān)鍵化合物,V形代表關(guān)鍵靶點(diǎn),矩形代表通路;hsa05167為卡波西肉瘤相關(guān)性皰疹病毒感染,hsa05200為癌癥通路,hsa05205為癌癥中的蛋白多糖,hsa05163為人巨細(xì)胞病毒感染,hsa04625為C型凝集素受體信號(hào)通路,hsa04668為T(mén)NF信號(hào)通路,hsa04919為甲狀腺激素信號(hào)通路,hsa04510為黏著斑,hsa01521為酪氨酸激酶抑制劑耐藥性,hsa01522為內(nèi)分泌抵抗the top circle represents the drug,the lower oval represents the key compound,the V shape represents the key target,and the rectangle represents the pathway;hsa05167 represents Kaposi sarcoma-related herpes viral infection,hsa05200 represents cancer pathway,hsa05205 represents proteoglycan in cancer,hsa05163 represents human giant cell viral infection,hsa04625 represents C-type lectin receptor signaling pathway,hsa04668 represents TNF signaling pathway,hsa04919 represents thyroid hormone signaling pathway,hsa04510 represents adhesion spot,hsa01521 represents tyrosine kinase inhibitor resistance,hsa01522 represents endocrine resistance圖8 藥物-成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖Fig 8 Drug-ingredient-target-pathway network diagram

2.5 分子對(duì)接

使用AutoDockTools 1.5.6軟件對(duì)9個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)及其相對(duì)應(yīng)的化合物進(jìn)行分子對(duì)接。對(duì)部分對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化展示,見(jiàn)圖9。一般來(lái)說(shuō),結(jié)合能越小,對(duì)接效果越好。

A.槲皮素作用于Akt1(結(jié)合能：-26.36 kJ/mol);B.β-谷甾醇作用于CASP3(結(jié)合能：-41.84 kJ/mol);C.3,8-二羥基喹啉作用于EGFR(結(jié)合能：-26.78 kJ/mol);D.5,2′-二羥基-6,7,8-三甲氧基黃酮作用于EGFR(結(jié)合能：-31.80 kJ/mol);E.槲皮素作用于EGFR(結(jié)合能：-33.89 kJ/mol);F.木犀草素作用于IL-6(結(jié)合能：-34.73 kJ/mol);G.樟腦甾醇作用于ESR1(結(jié)合能：-35.98 kJ/mol);H.3,8-二羥基喹啉作用于SRC(結(jié)合能：-29.71 kJ/mol)A.quercetin act on Akt1 (affinity：-26.36 kJ/mol);B.beta-sitosterol act on CASP3 (affinity：-41.84 kJ/mol);C.3,8-dihydroxyquinoline act on EGFR (affinity：-26.78 kJ/mol);D.5,2′-Dihydroxy-6,7,8-trimethoxyflavone act on EGFR (affinity：-31.80 kJ/mol);E.quercetin act on EGFR (affinity：-33.89 kJ/mol);F.luteolin act on IL-6 (affinity：-34.73 kJ/mol);G.campesterol act on ESR1 (affinity：-35.98 kJ/mol);H.3,8-dihydroxyquinoline act on SRC (affinity：-29.71 kJ/mol)圖9 分子對(duì)接Fig 9 Molecular docking

3 討論

RA的主要臨床表現(xiàn)有滑膜炎、軟骨損傷和關(guān)節(jié)畸形等,而且隨著病情的發(fā)展,癥狀可累及心、腎等多個(gè)器官[10]。鄭新春[11]對(duì)44例RA(濕熱阻絡(luò)證)患者按就診順序分為兩組,觀察組患者服用金藤清痹顆粒治療,對(duì)照組患者采用濕熱痹沖劑治療,經(jīng)過(guò)8周的治療,觀察組、對(duì)照組患者的總體有效率分別為95.2%、71.4%,表明金藤清痹顆粒能有效治療RA。

本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對(duì)接的方法預(yù)測(cè)了金藤清痹顆粒治療RA的作用機(jī)制。通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)與文獻(xiàn)檢索得到金藤清痹顆粒中的153個(gè)化合物和399個(gè)靶點(diǎn)。使及關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選金藤清痹顆粒發(fā)揮治療RA作用的可能的關(guān)鍵成分并對(duì)其進(jìn)行了分子對(duì)接的驗(yàn)證,結(jié)合能均<-20.92 kJ/mol,對(duì)接結(jié)果良好。如槲皮素是金銀花、白花蛇舌草、玄參和甘草中的化學(xué)成分,是一種黃酮類(lèi)化合物,具有抗氧化、抗炎、抗菌和保護(hù)心血管等藥理作用[12]。黃敬群等[13]的研究發(fā)現(xiàn),槲皮素對(duì)尿酸鈉致急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠有很好的治愈作用;通過(guò)生化指標(biāo)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),槲皮素可以降低炎癥因子IL-1β、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、環(huán)氧化酶2和一氧化氮水平,表明槲皮素可以通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。蔣海旭等[14]對(duì)槲皮素治療RA的作用機(jī)制進(jìn)行了綜述,認(rèn)為槲皮素可以通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)、抑制血管生成、抑制滑膜細(xì)胞生成、抑制中性粒細(xì)胞外誘捕網(wǎng)產(chǎn)生等途徑來(lái)緩解RA的進(jìn)展。木犀草素是金銀花的化學(xué)成分,是一種黃酮類(lèi)化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化和緩解2型糖尿病等多種藥理活性[15]。研究結(jié)果表明,木犀草素的抗炎作用主要是通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)、控制免疫細(xì)胞遷移的趨化因子、減少活性氧和活性氮的生成、影響花生四烯酸的代謝以及多種炎癥信號(hào)通路等來(lái)實(shí)現(xiàn)的,其能抑制IL-4、IL-6、IL-1β、IL-8和TNF-α等炎癥因子水平,還能控制趨化因子配體2、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2等趨化因子的水平[16-17]。沈瑞明等[18]研究了木犀草素對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠的抗炎作用,通過(guò)對(duì)血清生化指標(biāo)的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)木犀草素可以通過(guò)下調(diào)Toll樣受體、髓樣分化因子、核因子κB通路來(lái)減輕痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的炎癥反應(yīng)。β-谷甾醇是金銀花、青風(fēng)藤、白花蛇舌草、玄參、白芍、山慈菇、鹿銜草、當(dāng)歸和生地黃的共有成分,是植物甾醇的主要成分之一,具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、降血脂和調(diào)節(jié)骨代謝平衡等藥理作用[19]。肖志彬等[20]使用卡拉膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹模型和二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹模型驗(yàn)證β-谷甾醇的抗炎作用,發(fā)現(xiàn)其聯(lián)合阿司匹林的抗炎效果比單獨(dú)使用阿司匹林更強(qiáng),β-谷甾醇抗炎的主要機(jī)制是增強(qiáng)細(xì)胞攝取鈣的能力,抑制腺苷脫氨酶的活性,抑制IL-1β、TNF-α的表達(dá)等。3,8-二羥基喹啉是中藥蜈蚣的主要化學(xué)成分,具有抗炎、抗菌和抗腫瘤等藥理作用[21]。膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎模型是目前常用的RA模型[22]。趙海梅等[23]觀察了蜈蚣對(duì)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎大鼠小腸黏膜中IL-2、IL-4和IL-10的表達(dá)以及其對(duì)關(guān)節(jié)損傷的影響,發(fā)現(xiàn)IL-2、IL-4的表達(dá)顯著升高,損傷明顯好轉(zhuǎn),得出結(jié)論蜈蚣可以有效緩解關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)損傷,其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)小腸黏膜中炎癥因子的表達(dá)水平。芍藥苷是白芍中的主要有效成分,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、保肝和鎮(zhèn)靜催眠等藥理作用[24]。繆成貴等[25]研究了芍藥苷對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞(FLS)異常增殖的影響,結(jié)果顯示,芍藥苷對(duì)FLS增殖有一定程度的抑制作用,對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤2、IL-8的表達(dá)有顯著的抑制作用,對(duì)Bax、Caspase-3的表達(dá)有顯著促進(jìn)作用,表明芍藥苷是通過(guò)抑制FLS異常增殖治療佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠。上述化合物均是通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接驗(yàn)證所得到的關(guān)鍵化合物,因此,金藤清痹顆粒可能是通過(guò)上述途徑來(lái)發(fā)揮治療RA的作用。

對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析,同時(shí)通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),Akt1、CASP3、EGFR、IL-6、ESR1、HIF1A、SRC和JUN可能是金藤清痹顆粒發(fā)揮作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)。Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,在細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞代謝等多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展[26]。Akt1是Akt基因的一種亞型,序列、功能與另外2種亞型Akt2、Akt3基本一致[27]。有研究發(fā)現(xiàn),抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-Akt通路可以促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠軟骨組織的凋亡和自噬[28]。具體機(jī)制可能是PI3K-Akt通路下游轉(zhuǎn)錄因子(真核起始因子4E)能調(diào)節(jié)多種抗凋亡基因的表達(dá)[29]。IL-6是重要的炎癥因子,是機(jī)體受到創(chuàng)傷在修復(fù)過(guò)程中的一種急性炎癥反應(yīng)介質(zhì)。王書(shū)俠等[30]研究發(fā)現(xiàn),RA活動(dòng)期患者血清或關(guān)節(jié)液中的IL-6水平顯著高于正常人,阻斷IL-6能減緩RA病情的延續(xù)和進(jìn)展。彭玉蓮等[31]的研究結(jié)果表明,IL水平與RA關(guān)系密切,而且與中醫(yī)的證型也有一定的相關(guān)性。賈慶運(yùn)等[32]研究發(fā)現(xiàn),槲皮素可以濃度依賴(lài)性地降低TNF-α誘導(dǎo)的RA成纖維樣滑膜細(xì)胞IL-1β、IL-6、IL-8、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-1、MMP-3和MMP-13的表達(dá),有效減輕RA的并發(fā)癥,是一種潛在的治療藥物。金藤清痹顆粒中的主要成分就是槲皮素,因此,金藤清痹顆粒治療RA可能是通過(guò)減輕炎癥因子的表達(dá)來(lái)發(fā)揮治療作用。EGFR具有酪氨酸激酶的活性,能被生長(zhǎng)因子家族成員激活,在調(diào)控細(xì)胞增殖方面有著重要作用[33]。一旦EGFR與相應(yīng)的配體結(jié)合,可以激活細(xì)胞內(nèi)的多種信號(hào)通路,如PI3K、p38絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路[34]。蔣毅等[35]使用雷公藤多苷治療膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠,觀察其表皮生長(zhǎng)因子受體家族的表達(dá),結(jié)果顯示,EGFR、酪氨酸激酶受體2的蛋白表達(dá)量及mRNA水平在模型組滑膜中明顯高于正常組(P<0.01),表明EGFR參與了膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的病理過(guò)程,進(jìn)而推斷EGFR的表達(dá)量升高可能與RA發(fā)病密切相關(guān)。c-Jun(氨基端蛋白激酶)是促M(fèi)APK家族的主要成員之一,參與細(xì)胞凋亡、分化、突變和維持細(xì)胞骨架構(gòu)建等多種生物學(xué)過(guò)程。炎癥細(xì)胞因子可以激活c-Jun氨基端蛋白激酶(JNK)信號(hào)通路,JNK信號(hào)通路被異常激活,嚴(yán)重時(shí)可以造成慢性關(guān)節(jié)炎癥、缺血再灌注損傷等多種疾病[36-37]。缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)可以調(diào)控多種靶基因的轉(zhuǎn)錄,是人在缺氧狀態(tài)下產(chǎn)生的重要核轉(zhuǎn)錄因子,能影響多種炎癥反應(yīng)過(guò)程[38]。RA滑膜炎組織就是一種慢性缺氧的環(huán)境。缺氧誘導(dǎo)HIF-1的表達(dá),進(jìn)而結(jié)合血管生成調(diào)節(jié)因子,誘導(dǎo)血管生成。但組織的缺氧狀態(tài)不能被新生血管所改善,反而加重了RA關(guān)節(jié)滑膜炎癥和骨破壞。HIF-1的表達(dá)還可以誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子表達(dá)增多,加重炎癥反應(yīng)[39-40]。金藤清痹顆?？赡苁峭ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)上述靶點(diǎn)來(lái)發(fā)揮治療RA的作用。

GO與KEGG富集分析結(jié)果顯示,金藤清痹顆粒有效成分調(diào)控的靶點(diǎn)集中在多種生物學(xué)進(jìn)程中,如細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)有機(jī)物質(zhì)的反應(yīng)、對(duì)外部刺激的反應(yīng)、對(duì)含氧化合物的響應(yīng)、對(duì)細(xì)胞因子的反應(yīng)、內(nèi)膜系統(tǒng)、胞外區(qū)、胞質(zhì)囊泡、與小分子結(jié)合、與酶結(jié)合以及與信號(hào)受體結(jié)合等。金藤清痹顆?？赡苁亲饔糜赥NF信號(hào)通路、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化信號(hào)通路、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒感染、人類(lèi)巨細(xì)胞病毒感染和乙型肝炎等信號(hào)通路。這些通路與RA的進(jìn)展關(guān)系密切。

總之,本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對(duì)接的方法,探索了金藤清痹顆粒治療RA的作用機(jī)制。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建,發(fā)現(xiàn)該藥可能是通過(guò)調(diào)節(jié)血清炎癥因子、抑制滑膜細(xì)胞異常增殖和提高機(jī)體免疫功能等多個(gè)途徑來(lái)發(fā)揮治療RA的作用。然而,本研究主要基于網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和模型預(yù)測(cè)開(kāi)展,因此需要后續(xù)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證本研究結(jié)果。