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    狼瘡性腎炎患者血清和尿液集落刺激因子-1的表達水平變化及意義

    2023-06-04 11:30:10徐靜周寶均徐慶無錫市中醫(yī)醫(yī)院輸血科檢驗科江蘇無錫214001
    臨床檢驗雜志 2023年3期
    關鍵詞:血清水平檢測

    徐靜,周寶均,徐慶(無錫市中醫(yī)醫(yī)院 .輸血科,.檢驗科,江蘇無錫 214001)

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種多發(fā)于青年女性的自身免疫性疾病,約70%~80%的SLE患者可出現(xiàn)狼瘡性腎炎(lupus nephritis, LN),其病變的嚴重程度與患者的預后密切相關[1-2]。目前,LN的實驗室診斷主要有以下幾種方法:尿蛋白、尿沉渣、腎小球濾過率檢測或者腎臟活檢[3-5]。然而,上述指標異常往往發(fā)生在腎臟損害之后。因此,探索LN腎臟結構破壞和腎功能喪失前的生物學標志物顯得非常重要,這對于患者早期治療和延緩疾病進程意義重大。

    集落刺激因子-1(colony-stimulating factor-1, CSF-1)是一種在巨噬細胞分化、存活、增殖和活化過程中起重要作用的主要調節(jié)因子。研究表明,腎小管上皮細胞中高表達CSF-1,而且隨著LN進展,腎間質細胞中CSF-1的表達水平明顯增多,并且可以誘發(fā)或加重LN[5]。因此,CSF-1可能作為LN的檢測生物學標志物。本研究旨在動態(tài)監(jiān)測LN患者血液和尿液中CSF-1水平,計算尿液中CSF-1與肝酐比值(CSF-1/Cr),并分析其與臨床常規(guī)實驗室檢查指標的相關性。

    1 材料與方法

    1.1研究對象 收集2021年1月至2022年8月于無錫市中醫(yī)醫(yī)院風濕科就診的LN患者30例,女26例,男4例,年齡(34.2±2.7)歲?;颊咴\斷均符合美國風濕病學會(ACR)SLE分類標準[6],均行腎臟穿刺病理檢查,常規(guī)行光鏡、免疫熒光及電鏡染色,且經病理活檢證實為LN。入選者為初治患者,未接受任何治療。排除標準:(1)感染,如肺炎(細菌、病毒或者真菌),肺結核,乙型肝炎和丙型肝炎,皮膚感染,中樞神經系統(tǒng)感染;(2)嚴重器官損害,如心臟衰竭,肝衰竭,腎衰竭,呼吸系統(tǒng)衰竭。應用2000版SLEDAI評分標準評價疾病活動情況[7]。病理切片按2003年國際腎臟病學會/腎臟病理學會(ISN/RPS 2003)分型方案進行分型[8]。從初次診治日期起,隨訪第1和第3個月。收集同期于體檢中心體檢,且性別和年齡匹配的體檢健康者20例作為健康人對照組,女18例,男2例,年齡(30.3±5.6)歲。

    1.2主要儀器及試劑 人CSF-1 ELISA檢測試劑盒(美國R&D system公司),補體C3檢測試劑盒(寧波瑞源生物科技公司),尿蛋白檢測試劑(北京利德曼生化股份公司),抗dsDNA抗體檢測試劑盒(美國Sigma公司),肌酐檢測試劑盒(愛爾蘭貝克曼庫爾特公司)。Thermo Scientific Multiskan 全波長酶標儀(美國Thermo Fisher Scientific公司),Beckman Coulter AU5800生化分析儀(愛爾蘭貝克曼庫爾特公司)。

    1.3方法

    1.3.1臨床資料及樣本收集 收集所有患者入院后的臨床資料,包括:年齡、性別、病程、病史等。另收集患者住院期間的臨床常規(guī)實驗室檢查指標數(shù)據(jù)。分別采集LN患者住院第1天和體檢健康者體檢時晨起空腹(禁食8~12 h)靜脈血各5 mL,2 500×g離心15 min,血清樣本置于-80 ℃保存,檢測前于室溫解凍。所有研究對象均留取晨起清潔中段尿5 mL,400×g離心15 min,收集上清液,尿液樣本置于-80 ℃保存,檢測前于室溫解凍。

    1.3.2抗dsDNA檢測 采用ELISA法,按照抗dsDNA抗體檢測試劑盒說明書操作檢測。使用Thermo Scientific Multiskan全波長酶標儀在450 nm處讀取吸光度A值。比較并計算各組之間的A450 nm值。

    1.3.3補體C3檢測 取3 μL血清,按照補體C3檢測試劑盒檢測試劑盒說明書操作,用Thermo Scientific Multiskan全波長酶標儀讀取吸光度(A340 nm)值。通過多點定標曲線折線計算相應補體C3含量(參考區(qū)間:0.7~1.4 g/L)。

    1.3.424 h尿蛋白檢測 取5 μL尿液,按照尿蛋白檢測試劑說明書檢測,以主波長600 nm、副波長700 nm讀取吸光度A值。計算尿蛋白濃度(參考區(qū)間:0~140 mg/L)。計算公式:尿蛋白濃度=ΔA樣本×校準液濃度/ΔA校準(ΔA=ΔA待測-ΔA空白)。

    1.3.5Cr測定 采用肌氨酸氧化酶法,取5 μL血清,按照肌酐檢測試劑盒說明書操作進行,在Beckman Coulter AU5800生化分析儀上以主波長600 nm、副波長700 nm讀取吸光度A值(參考區(qū)間:49~104 μmol/L)。

    1.3.6CSF-1檢測 采用ELISA法,在包被有抗CSF-1抗體的酶標孔中分別加入100 μL稀釋過的標準品和血清或尿液,室溫溫育2 h;洗板3次。在標準品孔與樣品孔中分別加入200 μL辣根過氧化物酶標記的抗人CSF-1抗體,再次室溫溫育30 min后每孔加入50 μL終止液。分別于450 nm和570 nm處讀取吸光度A值,繪制標準曲線,計算樣本CSF-1濃度(血清參考區(qū)間:180~474 pg/mL;尿液參考區(qū)間:263~4 466 pg/mL)。

    2 結果

    2.1LN患者血清CSF-1和尿液CSF/Cr水平 ELISA法檢測結果發(fā)現(xiàn),LN患者血清CSF-1顯著高于體檢健康者 (98.41±4.12 pg/mL vs 10.10±0.31 pg/mL,t=17.41,P<0.001)。LN患者尿液CSF-1/Cr顯著高于體檢健康者 (2.75±0.13 pg/mg.Cr vs 0.89±0.04 pg/mg.Cr,t=11.20,P<0.001)。

    2.2CSF-1與LN患者病理分型的相關性 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型患者血清CSF-1水平及尿液CSF-1/Cr差異均有統(tǒng)計學意義(F分別為40.93和23.69,P<0.001)。進一步進行組間兩兩比較結果表明,與Ⅱ型LN患者(74.47±2.66) pg/mL相比,Ⅲ型及Ⅳ型LN患者血清CSF-1水平明顯升高 (96.23±2.84 pg/mL,125.2±5.99 pg/mL,q分別為6.194,12.19,P<0.01),并且Ⅳ型LN患者血清CSF-1水平較Ⅲ型顯著升高(q=7.707,P<0.01)。此外,與Ⅱ型LN患者(2.07±0.12 pg/mg.Cr)相比,Ⅲ型及Ⅳ型LN患者尿液CSF-1/Cr明顯升高(2.77±0.06 pg/mg.Cr,3.55±0.26 pg/mg.Cr,q分別為5.185,9.728,P<0.01),并且Ⅳ型LN患者尿液CSF-1/Cr也較Ⅲ型LN患者顯著升高(q=5.416,P<0.01)。

    2.3CSF-1與患者治療效果的關系 共計5例LN患者完成隨訪,分別檢測了隨訪第1和第3個月時的血清CSF-1和尿液CSF-1/Cr,以及實驗室指標(包括補體C3、抗dsDNA和24 h尿蛋白)。結果表明,隨著患者病情緩解,LN患者血清CSF-1及尿液中CSF-1/Cr明顯下降,抗dsDNA和24 h尿蛋白亦顯著降低,而補體C3水平明顯增加,見表1。

    表1 LN患者CSF-1、CSF-1/Cr及各實驗室指標檢測結果

    3 討論

    LN是SLE患者最常見和最嚴重的并發(fā)癥。LN若得不到有效控制,會進展至終末期腎衰。LN的特征包括持續(xù)存在的蛋白尿、鏡下血尿和進行性腎功能下降等特征[9]。迄今為止,腎臟活檢仍然是LN診斷的金標準[10-11],但LN的進展和療效判斷無法采用腎臟活檢等創(chuàng)傷性技術。因此,探索非創(chuàng)傷性的LN診斷、進展和療效評估的生物學標志物是該領域的研究熱點和難點。本研究通過比較體檢健康者與LN患者血清CSF-1水平、尿液CSF-1/Cr和常規(guī)實驗室檢查指標(抗dsDNA、24 h尿蛋白及補體C3)等,并進行動態(tài)隨訪,以期為LN患者提供新的生物學標志物。

    CSF-1作為能刺激單核細胞和巨核細胞分化的一種生長因子,可激發(fā)和增強巨噬細胞對腫瘤細胞和微生物的殺傷作用,調節(jié)巨噬細胞釋放細胞因子和其他炎癥調節(jié)因子,并刺激胞飲作用。研究發(fā)現(xiàn),CSF-1在妊娠期間增加,并支持蛻膜和胎盤的植入和生長[12-13]。另有學者發(fā)現(xiàn),腎小管上皮細胞高表達CSF-1,而且隨著LN進展,腎間質CSF-1的表達量增高[5]。以上結果提示CSF-1參與LN的進展過程,可能成為LN的生物學標志物。Menke等[14]證實腎小球濾過率等對尿液CSF-1的表達水平存在較大的影響。本研究亦發(fā)現(xiàn)LN患者血清和尿液CSF-1水平均顯著高于體檢健康者,且LN患者尿液CSF-1/Cr亦明顯增加。

    目前臨床根據(jù)LN患者的腎臟病理嚴重程度,將LN患者劃分為Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型,筆者進一步檢測并比較了各亞型患者血清CSF-1水平及尿液CSF-1/Cr。結果表明隨著患者的病情加重,Ⅲ型或Ⅳ型LN患者血清CSF-1水平及尿CSF-1/Cr顯著高于Ⅱ型LN患者(P<0.05),且Ⅳ型亦高于Ⅲ型LN患者(P<0.05),這進一步證實了血清CSF-1水平及尿液CSF-1/Cr可以反映LN患者的腎臟病變嚴重程度。

    筆者還檢測了5例緩解期隨訪LN患者CSF-1水平和尿液CSF-1/Cr以及常規(guī)實驗室指標,結果發(fā)現(xiàn)隨著病情緩解, LN患者抗dsDNA和24 h尿蛋白顯著降低,補體C3明顯增加,患者的CSF-1及尿液CSF-1/Cr也顯著降低,提示上述指標可用于判斷LN的活動性。

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