橡膠狗尾草平臍蠕孢葉斑病病原菌鑒定及生物學(xué)特性研究

劉一賢 施玉萍 戴利銘 李嵐嵐 蔡志英

摘要 為明確采自西雙版納景洪地區(qū)疑似橡膠麻點(diǎn)病的病原菌，采用組織分離法進(jìn)行病原菌分離，活體接種法進(jìn)行致病性測(cè)定，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合rDNA-ITS和GAPDH兩個(gè)核苷酸片段序列分析，將病原菌確定為狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae。通過(guò)單因子變量試驗(yàn)，對(duì)病原菌進(jìn)行生物學(xué)特性研究，結(jié)果表明：菌絲生長(zhǎng)最適溫度為30℃，最適pH為7～8，最適培養(yǎng)基為PDA，菌絲致死溫度為53℃，10 min。該病原菌能有效利用多種碳源和氮源，碳源以可溶性淀粉利用率最高，最適氮源為蛋白胨。24 h黑暗條件下培養(yǎng)更有利于菌絲生長(zhǎng)。分生孢子萌發(fā)的最適溫度為28～35℃，最適pH為7～8，28℃黑暗培養(yǎng)2 h后萌發(fā)率達(dá)到最大，為95.5%，分生孢子致死溫度為60℃，10 min。

關(guān)鍵詞 橡膠樹;?葉斑病;?狗尾草平臍蠕孢;?生物學(xué)特性

中圖分類號(hào)： S 436.85

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：?A

DOI：?10.16688/j.zwbh.2021676

Abstract In order to identify the pathogen of suspected rubber tree leaf spot disease with symptoms similar to the disease caused by Bipolaris heveae， the samples were collected from Jinghong， Xishuangbanna， and the tissue isolation method was used to isolate and culture the pathogen， and the in vivo inoculation method was used to determine its pathogenicity. The pathogen was identified as Bipolaris setariae according to the morphological characteristics and analysis of rDNA-ITS and GAPDH gene sequences. The single-factor variable experiments were carried out to determine the optimum conditions for its mycelial growth and spore germination. The results showed that the optimum temperature for mycelium growth was 30℃， and the optimum pH value was 7-8. PDA was the optimal medium for hyphal growth and the lethal temperature for the mycelium was 53℃ for 10 min. A lot of carbon and nitrogen resources could be used by the pathogen， and the most suitable carbon and nitrogen sources were starch and peptone. Full dark treatment was more favorable for mycelium growth. In addition， the optimum temperature for conidial germination was 28-35℃ and the optimum pH value was 7-8. The germination rate （95.5%） was the highest after culture for 2 h at 28℃ in dark. The lethal temperature for the conidia was 60℃ for 10 min.

Key words rubber tree;?leaf spot disease;?Bipolaris setariae;?biological characteristic

橡膠樹是熱帶地區(qū)重要經(jīng)濟(jì)作物，其產(chǎn)生的天然橡膠是工業(yè)上的重要原材料，廣泛用于交通、國(guó)防、醫(yī)療和日常生活等領(lǐng)域，是一種重要的戰(zhàn)略資源［1］。橡膠樹病蟲害是制約橡膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一大難題，據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織報(bào)道，由病蟲害導(dǎo)致的橡膠減產(chǎn)約占總產(chǎn)量的25%［2］。目前已經(jīng)報(bào)道的橡膠病害有近百種，我國(guó)有91種，對(duì)橡膠生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害的葉部病害主要有橡膠白粉病、炭疽病、棒孢霉落葉病、季風(fēng)性落葉?。?］。

橡膠葉斑病是橡膠樹上最常見的病害，隨著全球氣候變暖，農(nóng)業(yè)氣候帶移動(dòng)［4］，橡膠樹種植年限增加，膠園缺乏管理等問(wèn)題，出現(xiàn)了一些新的病害。近幾年報(bào)道了由鏈格孢Alternaria spp.［5］、可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae［6］、嘴突凸臍蠕孢Exserohilum rostratum［7］和新擬盤多毛孢屬的Neopestalotiopsis aotearoa［8］等病原菌引起的葉斑病。筆者在中國(guó)橡膠主產(chǎn)區(qū)云南省西雙版納州開展橡膠樹病害調(diào)查過(guò)程中，在景洪農(nóng)場(chǎng)增殖苗圃‘云研77-4上發(fā)現(xiàn)一種新葉斑病，染病葉片病斑呈紅褐色小點(diǎn)或黑色小點(diǎn)，小點(diǎn)直徑為0.2～3 mm，周圍伴有黃色暈圈，病斑小而多。其癥狀特點(diǎn)與橡膠樹平臍蠕孢Bipolaris heveae引起的橡膠麻點(diǎn)?。?］相似，在田間易混淆，麻點(diǎn)病在橡膠樹接近老化的葉片上只出現(xiàn)深褐色小點(diǎn)，病斑小而多。此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病害目前主要在橡膠苗圃中危害橡膠嫩葉。為了探究該病害的病原菌，本研究對(duì)采集到的病樣進(jìn)行組織分離，柯赫氏法則驗(yàn)證，病原菌形態(tài)觀察結(jié)合分子鑒定，從而確定病原菌的分類地位;在此基礎(chǔ)上，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究，為了解該病害的發(fā)生規(guī)律以及病害的有效控制提供參考依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?病樣采集

在云南省西雙版納州景洪農(nóng)場(chǎng)‘云研77-4橡膠苗圃基地采集具有典型癥狀的病葉標(biāo)本，裝于自封袋內(nèi)并做好標(biāo)記。帶回實(shí)驗(yàn)室后分離病原菌，觀察記錄發(fā)病情況，測(cè)量病斑大小。

1.2?病原菌分離與純化

采用組織分離法分離病原菌。取病健交界處組織，用75%乙醇浸泡30 s，0.1%升汞溶液消毒1 min，無(wú)菌水漂洗3次，濾紙吸干水分后置于PDA培養(yǎng)基上。于28℃暗培養(yǎng)3 d后，挑取菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)接，用平板稀釋法進(jìn)行單孢分離獲得純培養(yǎng)菌株，于4℃和-80℃保存。

1.3?分離菌株的致病性測(cè)定

孢子懸浮液的制備。選取純化后的代表性菌株JH1a，于PDA培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)7 d。用無(wú)菌水沖洗孢子，無(wú)菌紗布過(guò)濾菌絲后制成濃度為104個(gè)/mL的孢子懸浮液。

田間接種試驗(yàn)。采用古銅期的‘云研77-4橡膠苗葉片進(jìn)行無(wú)傷接種。處理組每株噴霧10 mL菌株JH1a孢子懸浮液，以噴霧接種無(wú)菌水為對(duì)照，每處理接種3株，重復(fù)3次。接種后植株用塑料袋套袋保濕2 d后去掉塑料袋，繼續(xù)定期觀察。待植株出現(xiàn)癥狀后，采集感病葉片再進(jìn)行病原的分離鑒定。

1.4?病原菌鑒定

1.4.1?病原菌形態(tài)觀察

將菌株JH1a接種在PDA培養(yǎng)基上，28℃暗培養(yǎng)4 d，觀察菌落形態(tài)并測(cè)量菌落直徑。將菌株接種到PCA（馬鈴薯200 g，胡蘿卜200 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL）平板上28℃暗培養(yǎng)5 d，從接種點(diǎn)附近挑取小塊培養(yǎng)基，制作玻片［10］。使用Axio Lab. A1型蔡司顯微鏡拍照記錄產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)及分生孢子特征，臍點(diǎn)特征，測(cè)量分生孢子大小，記錄隔膜數(shù)等。

1.4.2?分子鑒定

采用基因組DNA提取試劑盒（康為世紀(jì)生物科技股份有限公司）提取菌株JH1a基因組DNA。采用核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)rDNA-ITS通用引物ITS1（5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′）/ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）［11］和3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）編碼基因引物GDF1（5′-GCCGTCAACGACCCCTTCATTGA-3′）/GDR1（5′-GGG-TGGAGTCGTACTTGAGCATGT-3′）［12］分別擴(kuò)增ITS和GAPDH核苷酸片段，PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送北京六合華大基因科技有限公司廣州分公司進(jìn)行測(cè)序。

測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST比對(duì)后，從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選下載相關(guān)菌株序列。采用最大似然法對(duì)ITS-GAPDH序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，以Curvularia buchloes CBS 246.49作為外群，ML分析采用MEGA 6.0，bootstrap重復(fù)值為1 000次。

1.5?病原菌JH1a菌株生物學(xué)特性測(cè)定

1.5.1?不同條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)基：將活化的菌株JH1a分別接種于不同培養(yǎng)基上，V8汁培養(yǎng)基（市售V8汁200 mL、CaCO3 3 g、瓊脂20 g，定容至1 000 mL）、Czapek （NaNO3 3 g/L，K2HPO4 1 g/L，KCl 0.5 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，F(xiàn)eSO4 0.01 g/L，蔗糖20 g/L，瓊脂20 g/L）、YEPD（酵母浸膏10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂20 g/L）、SNA（KH2PO4 1.0 g/L，KNO31.0 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，KCl 0.5 g/L，葡萄糖0.2 g/L，蔗糖0.2 g/L，瓊脂20 g/L）、OA（燕麥30 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂20 g/L）、PCA、PDA 7種培養(yǎng)基， pH自然。重復(fù)3次。28℃黑暗培養(yǎng)4 d后觀察病原菌生長(zhǎng)情況，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

溫度：將活化的菌株JH1a接種在PDA培養(yǎng)基上， pH自然，設(shè)置培養(yǎng)溫度為5、10、15、20、25、28、30、35℃。重復(fù)3次。黑暗培養(yǎng)4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

pH：設(shè)置PDA培養(yǎng)基滅菌后的pH為3、4、5、6、7、8、9、10、11，制成不同pH的PDA平板。重復(fù)3次。28℃黑暗培養(yǎng)4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

碳源：用葡萄糖、麥芽糖、乳糖、果糖、半乳糖、可溶性淀粉、山梨醇、木糖、甘露醇、鼠李糖、甘油等11種碳源等量代替Czapek培養(yǎng)基中的蔗糖，制成不同碳源的培養(yǎng)基，pH自然。重復(fù)3次。28℃黑暗培養(yǎng)4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

氮源：用L-天冬酰胺、酪氨酸、甘氨酸、牛肉浸膏、蛋白胨、尿素、L-丙氨酸、NaNO2、NH4Cl、胱氨酸、色氨酸、L-精氨酸、酵母浸膏、（NH4）2SO4等14種氮源等量代替Czapek培養(yǎng)基中的NaNO3， pH自然，制成不同氮源培養(yǎng)基。重復(fù)3次。28℃黑暗培養(yǎng)4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

光照：設(shè)置24 h黑暗、24 h光照、L∥D=12 h∥12 h，3種光照條件。采用PDA培養(yǎng)基，pH自然，重復(fù)3次。28℃培養(yǎng)4 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

致死溫度：在試管中加入無(wú)菌水，挑取菌絲塊放入試管中，設(shè)置水浴鍋溫度為40、45、50、55、60、65℃，將試管置于不同溫度下處理10 min后，挑取菌絲塊置于PDA培養(yǎng)基上。獲得菌絲致死溫度范圍后，以1℃溫度差設(shè)置溫度梯度，明確菌絲致死溫度。

1.5.2?不同條件對(duì)孢子萌發(fā)率的影響

光照：采用懸滴法［13］測(cè)定孢子萌發(fā)率。菌株分生孢子懸浮液配制方法同1.3，下同。取少量無(wú)菌水配制的孢子懸浮液，置于載玻片上，設(shè)置黑暗、光照兩種條件，28℃培養(yǎng)，測(cè)定2、4、6 h的分生孢子萌發(fā)率。

溫度：設(shè)置培養(yǎng)箱溫度為5、10、15、20、25、28、30、35、40℃，取少量無(wú)菌水配制的孢子懸浮液，置于不同溫度下，黑暗培養(yǎng)2 h后觀察分生孢子萌發(fā)率。

pH：采用pH為3、4、5、6、7、8、9、10、11的磷酸緩沖液配制孢子懸浮液，28℃黑暗培養(yǎng)2 h后觀察分生孢子萌發(fā)率。

孢子致死溫度：設(shè)置水浴鍋溫度為40、45、50、55、60、65、70、75℃，將孢子懸浮液置于不同溫度下處理10 min后進(jìn)行涂板，獲得孢子致死溫度范圍后，以1℃溫度差設(shè)置溫度梯度，明確分生孢子致死溫度。

每處理重復(fù)3次，隨機(jī)鏡檢100個(gè)孢子統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率。

1.6?數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2003和SAS 9.2軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和GraphPad Prism 8.0軟件作圖，并應(yīng)用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2?結(jié)果與分析

2.1?病原菌分離及致病性測(cè)定

從云南省西雙版納州景洪農(nóng)場(chǎng)橡膠‘云研77-4葉片上共分離得到4個(gè)菌株，通過(guò)對(duì)菌株形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察，確定為同種真菌，選取具有代表性的菌株，編號(hào)為JH1a，進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)?；铙w接種菌株JH1a孢子懸浮液5 d后橡膠葉片上病斑呈紅褐色小點(diǎn)或黑色小點(diǎn)，直徑為0.2～3 mm，周圍有黃色暈圈，與在田間觀察到的病害特征一致（圖1），而對(duì)照組葉片沒(méi)有出現(xiàn)發(fā)病癥狀。對(duì)人工接種的發(fā)病葉片進(jìn)行再次分離，分離得到的菌株其培養(yǎng)特征和分生孢子形態(tài)與JH1a菌株一致，確認(rèn)JH1a菌株為橡膠葉斑病的病原菌。

2.2?病原菌形態(tài)特征

病原菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d菌落直徑為7.55 cm，菌落初為白色，逐漸變?yōu)榍嗷疑吘壈咨?，菌落平展，氣生菌絲發(fā)達(dá)（圖2a）。顯微鏡下觀察分生孢子梗單生或簇生，淺褐色至中度褐色，頂端色淡，多個(gè)隔膜，上部常作屈膝狀彎曲，寬4.60～7.36 μm。分生孢子淺黃褐色至中度黃褐色，多數(shù)呈紡錘形，常略彎曲，極少直，光滑，4～10個(gè)假隔膜，孢子大小為（34.48～82.28） μm ×（9.93～15.55） μm，平均（53.64 × 11.75） μm，臍點(diǎn)略突出，基部平截（圖2b～c）。形態(tài)特征與狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae［10］相符。

2.3?菌株JH1a的分子生物學(xué)系統(tǒng)發(fā)育分析

經(jīng)ITS1和ITS4引物對(duì)菌株JH1a進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，得到了長(zhǎng)度為507 bp的rDNA-ITS序列（GenBank登錄號(hào)： KT805922）。其與狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae（KR183790.1、MT750297.1、MT750301.1、MT750303.1）的一致性為100%。對(duì)菌株GAPDH基因的部分序列進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，得到591 bp的序列（GenBank登錄號(hào)： KT982612）。該序列與B.setariae （MF490833.1、MW473722.1、MT896702.1、MK558814.1、EF513206.1）的GAPDH基因序列一致性為100%。ITS-GAPDH序列系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，JH1a菌株與B.setariae聚在同一分支（圖3），綜合以上信息，證明JH1a菌株為狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae （Sawada） Shoemaker。

2.4?不同環(huán)境條件對(duì)病原菌JH1a菌絲生長(zhǎng)的影響

2.4.1?溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

由圖4可以看出，菌株JH1a在10～35℃范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，在5℃條件下停止生長(zhǎng)。菌絲生長(zhǎng)適宜溫度范圍為25～30℃，最適溫度為30℃，35℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)受到顯著抑制。

2.4.2?酸堿度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

菌株JH1a對(duì)酸堿度的適應(yīng)范圍較廣，在pH 3～11范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)，最適宜菌絲生長(zhǎng)的pH為7～8，pH小于5或高于10時(shí)，菌絲生長(zhǎng)受到顯著抑制（圖5）。

2.5.2?溫度對(duì)孢子萌發(fā)的影響

菌株JH1a的分生孢子萌發(fā)溫度范圍較廣，5～40℃黑暗培養(yǎng)2 h 都可萌發(fā)（圖9），最適合孢子萌發(fā)的溫度范圍為28～35℃。28℃、30℃和35℃下的萌發(fā)率無(wú)顯著差異。當(dāng)培養(yǎng)溫度低于28℃時(shí)，分生孢子萌發(fā)率顯著降低。JH1a的分生孢子對(duì)低溫有一定的耐受能力，5℃時(shí)萌發(fā)率為18.79%;對(duì)高溫較敏感，當(dāng)溫度為40℃時(shí)萌發(fā)率急劇下降，僅為9.95%。

2.5.3?酸堿度對(duì)孢子萌發(fā)的影響

菌株JH1a的分生孢子在pH 4～11范圍內(nèi)黑暗培養(yǎng)2 h都能萌發(fā)（圖10）。當(dāng)pH小于5或大于8時(shí)，分生孢子萌發(fā)受到顯著抑制，在pH為3時(shí)分生孢子停止萌發(fā)。分生孢子萌發(fā)最適pH為7～8，pH 7.0時(shí)，萌發(fā)率達(dá)到最高，為86.20%。

2.5.4?分生孢子致死溫度

菌株JH1a分生孢子懸浮液在55℃水浴鍋中處理10 min能形成新的菌落，60℃處理相同時(shí)間后不能形成新菌落。進(jìn)一步以1℃為梯度設(shè)置5個(gè)溫度處理，發(fā)現(xiàn)59℃處理10 min能形成新的菌落，60℃處理相同時(shí)間不能形成新菌落。說(shuō)明分生孢子的致死溫度為60℃，10 min，高于菌絲致死溫度。

3?結(jié)論與討論

平臍蠕孢屬Bipolaris真菌是分類學(xué)上一個(gè)較大的類群，包含約60個(gè)已知種［14］。該屬真菌是重要的植物病原菌，在世界范圍內(nèi)廣泛分布，能引起多種禾本科植物病害，同時(shí)對(duì)其他種類的植物也有致病性，如：苦瓜Momordica charantia［15］、牧草［16］、青蘋果竹芋Calathea rotundifolia cv. fasciata［17］、椰子Cocos nucifera等［18］，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大威脅［19］。狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae于1912年被首次記錄為Helminthosporium setariae Sawada，1959年被正式命名為Bipolaris setariae［14］。該菌主要危害禾本科雜草［20］，除此之外還能引起木薯葉斑病［21］、椰子葉斑?。?2］、玉米葉斑?。?3］、多枝臂形草葉枯?。?4-25］、杉木葉枯?。?6］等多種植物病害。對(duì)平臍蠕孢屬真菌的鑒定目前多采用多基因序列聯(lián)合分析，5.8S rDNA-ITS區(qū)的DNA序列為該類真菌在GenBank中信息量最大的序列，在該類真菌鑒定中作為首選分子標(biāo)記，其次GAPDH基因擴(kuò)增效率較高且較為保守，也常用作該類真菌的分子標(biāo)記。EF-1α、CAL等可作為補(bǔ)充基因［27］。本研究中選用ITS-GAPDH 進(jìn)行分析，結(jié)合形態(tài)特征將分離到的JH1a菌株鑒定為狗尾草平臍蠕孢Bipolaris setariae。平臍蠕孢屬的橡膠樹平臍蠕孢B.heveae［9］、雙色平臍蠕孢B.bicolor［28］也能引起橡膠葉斑病，尤其橡膠樹平臍蠕孢引起的麻點(diǎn)病和狗尾草平臍蠕孢引起的葉斑病在田間癥狀極為相似，其共同點(diǎn)是病斑小而多，區(qū)別在于橡膠麻點(diǎn)病病斑后期中央灰白色易穿孔［9］，而狗尾草平臍蠕孢引起的葉斑病不易形成穿孔。

本研究對(duì)狗尾草平臍蠕孢的生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果表明，菌絲在10～35℃條件下均可以生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為30℃，在5℃時(shí)停止生長(zhǎng)，菌絲的致死溫度為53℃，10 min。菌絲生長(zhǎng)的最適pH為7～8，與橡膠上發(fā)現(xiàn)的嘴突凸臍蠕孢研究結(jié)果一致［29］。平臍蠕孢和凸臍蠕孢的分生孢子同為蠕形，是從長(zhǎng)蠕孢屬Helminthosporium Link劃分出來(lái)的［27］，因此在同一寄主上的生長(zhǎng)特性較為相似。本研究比較了菌株對(duì)14種氮源和11種碳源的利用情況，發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)碳源、氮源利用范圍較廣泛，最適合菌絲生長(zhǎng)的氮源為蛋白胨，碳源為可溶性淀粉，病原菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求不高。最適合菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為PDA。絕大多數(shù)蠕形分生孢子真菌在PDA培養(yǎng)基上都生長(zhǎng)良好，因此PDA培養(yǎng)基適合用于此類菌株分離和菌落形態(tài)觀察，但PDA培養(yǎng)基上分生孢子形態(tài)變異較大，進(jìn)行孢子形態(tài)觀察時(shí)應(yīng)選用營(yíng)養(yǎng)相對(duì)貧乏的培養(yǎng)基［10］。該菌株分生孢子萌發(fā)對(duì)pH較敏感，僅在pH 6～8范圍內(nèi)萌發(fā)率較高，但菌絲生長(zhǎng)對(duì)pH不敏感，在過(guò)酸（pH=3）和過(guò)堿（pH=11）的環(huán)境中均可以生長(zhǎng)，說(shuō)明該病原菌對(duì)環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。分生孢子萌發(fā)的最適溫度范圍為28～35℃，35℃時(shí)分生孢子的萌發(fā)率仍能達(dá)到91.6%，而菌絲在35℃時(shí)生長(zhǎng)明顯受限，且分生孢子的致死溫度為60℃，10 min，明顯高于菌絲致死溫度（53℃，10 min），說(shuō)明分生孢子對(duì)高溫耐受能力較強(qiáng)，可能跟其所處的熱帶高溫環(huán)境有關(guān)。黑暗條件更有利于菌絲生長(zhǎng)和分生孢子萌發(fā)。本研究結(jié)果與牛曉慶等［22］在寄主椰子上分離到的狗尾草平臍蠕孢、時(shí)濤等［30］在木薯上分離到的狗尾草平臍蠕孢生物學(xué)特性存在一定的差異，環(huán)境適應(yīng)可能是導(dǎo)致該現(xiàn)象的主要原因。海南文昌和云南景洪雖同屬熱帶地區(qū)，但是兩地直線距離1 000 km以上，且氣候類型存在較大的差異（分別為熱帶季風(fēng)島嶼型氣候和熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候），在長(zhǎng)期的環(huán)境適應(yīng)過(guò)程中，兩地的狗尾草平臍蠕孢菌株的生物學(xué)特性產(chǎn)生了差異;其次，寄主差異也是導(dǎo)致病原菌生物學(xué)特性不同的原因之一，分離自不同寄主（玉米Zea mays、燕麥Avena sativa、牛筋草Eleusine indica）的麥根腐平臍蠕孢的最適合生長(zhǎng)溫度、碳氮源利用情況等均存在一定的差異［31-33］。

狗尾草平臍蠕孢引起的橡膠葉斑病目前在田間為零星發(fā)生，為了避免該病害進(jìn)一步發(fā)生流行，本文研究了病原菌的生物學(xué)特性，為預(yù)測(cè)病害的發(fā)生流行規(guī)律和病害防控技術(shù)的研究提供了依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：田?喆）