湛江沿海西施舌性腺周年變化的組織學(xué)觀察

李金蓬 鄧愛(ài)萍 陳子陽(yáng) 姚澤彬 王中鐸 羅杰

摘要 ［目的］研究湛江沿海已達(dá)性成熟年齡的西施舌性腺周年變化。［方法］通過(guò)組織學(xué)切片和顯微觀察，對(duì)湛江沿海達(dá)性成熟年齡的西施舌性腺進(jìn)行了周年變化研究。［結(jié)果］以濾泡的發(fā)育程度、生殖細(xì)胞發(fā)育狀態(tài)及其在濾泡中數(shù)量的多少為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)西施舌性腺的組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，卵巢及精巢發(fā)育過(guò)程均可分為增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期和休止期5個(gè)時(shí)期。卵細(xì)胞的發(fā)生及其發(fā)育時(shí)期分為卵原細(xì)胞期、生長(zhǎng)初期、生長(zhǎng)中期、生長(zhǎng)后期以及成熟期，精子的發(fā)生分別經(jīng)歷了精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精細(xì)胞和精子5個(gè)時(shí)期。根據(jù)肥滿度和相對(duì)重量的周年變化規(guī)律并結(jié)合性腺組織切片觀察結(jié)果，湛江地區(qū)的西施舌性腺發(fā)育為一年有2～3個(gè)排放期。該地區(qū)西施舌肥滿度和相對(duì)總重最低值都出現(xiàn)在12月，為26.79%和25.54%；最高值出現(xiàn)在9月和7月，分別為46.16%和49.42%。［結(jié)論］西施舌雌雄性腺發(fā)育基本同步，雄性發(fā)育略快。

關(guān)鍵詞 西施舌；性腺發(fā)育；生殖周期

中圖分類號(hào) S985.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2023）09-0070-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.09.017

Abstract ［Objective］ In order to study the annual changes of gonad of Coelomactra antiquata in Zhanjiang coastal area. ［Method］ Through histological serial sections and microscopic observation， the annual changes of gonad of C. antiquata in Zhanjiang coastal area was studied. ［Result］ According to the histological observation of the gonad of C. antiquata， the development process of ovary and spermary can be divided into five stages： proliferating stage， growing stage， maturing stage， spawning stage， resting stage based on the development degree of follicles， the development state of germ cells and the number of follicular species. According to the occurrence and development of egg cells， it can be divided into oocyte stage， initial phase of growth， metaphase of growth， later phase of growth and mature stage. Sperm generation has gone through five stages： spermatogonia， primary spermatocyte， secondary spermatocyte， spermatid and sperm respectively. By observing the seasonal changes in the rule of fatness， relative weight and the changes in sex gland in histological sections， it was considered that the sex gland development of C. antiquata has two to three in a year in the Zhanjiang area. The lowest values of fatness and relative total weight of C. antiquata in this area appeared in December， which were 26.79% and 25.54% respectively. The highest values were found in September and July， with 46.16% and 49.42% respectively. ［Conclusion］ The development of male and female gonads is basically synchronous， and the male develops slightly faster.

Key words Coelomactra antiquata;Gonadal development;Reproductive cycle

基金項(xiàng)目 中央財(cái)政2019年漁業(yè)成品油價(jià)格補(bǔ)助湛江市級(jí)統(tǒng)籌部分資金補(bǔ)助項(xiàng)目（湛財(cái)工［2019］152號(hào)）。

作者簡(jiǎn)介 李金蓬（1997—），男，四川大英人，碩士研究生，研究方向：遺傳與進(jìn)化。

*通信作者，教授級(jí)高級(jí)工程師，從事水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物繁殖生物學(xué)及增養(yǎng)殖技術(shù)研究。

西施舌（Coelomactra antiquata）隸屬于軟體動(dòng)物門(mén)（Mollusca）瓣鰓綱（Lamellibranchia）簾蛤目（Veneroida）蛤蜊科（Mactridae），是一種生活在底沙中的雙殼類海洋生物［1］，廣東俗稱“貴妃螺”。西施舌自然分布于太平洋西部的日本、朝鮮、韓國(guó)及我國(guó)沿海和印度半島［2］，尤以我國(guó)福建及廣東東部沿海資源量最大。西施舌肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是極具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的優(yōu)良貝類品種［3］。然而，由于近年來(lái)的過(guò)度捕撈，西施舌的自然種群逐漸減少［4］。為了保護(hù)和開(kāi)發(fā)西施舌，科技工作者對(duì)西施舌的人工繁殖開(kāi)展了很多研究，并取得了可喜的成績(jī)［5-7］。之前研究主要集中在人工育苗［8］、形態(tài)學(xué)［2］、群體遺傳比較［9］以及西施舌的組織組成等方面［10］；有關(guān)性腺發(fā)育方面，黃一鳴等［11］研究了福建長(zhǎng)樂(lè)漳巷的西施舌性腺季節(jié)性變化。筆者對(duì)湛江沿海達(dá)性成熟年齡的西施舌性腺發(fā)育周期和性腺組織學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行了研究，掌握其在該海區(qū)繁殖規(guī)律，為湛江沿海地區(qū)西施舌的人工育苗及增養(yǎng)殖的開(kāi)展提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 西施舌的來(lái)源 2021年1—12月，每月在廣東省雷州市覃斗鎮(zhèn)海區(qū)采集一次西施舌，共采集樣本78個(gè)。用游標(biāo)卡尺（精準(zhǔn)度0.01 mm）測(cè)量其殼長(zhǎng)、殼寬、殼高，用電子天平（精準(zhǔn)度0.01 g）稱量其總重、軟體重和殼重?？傊亍らL(zhǎng)、殼高和殼寬數(shù)值（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）分別為（110.91±37.79）g、（95.51±11.07）mm、（75.78±8.39）mm和（44.37±4.16）mm。計(jì)算出肥滿度（軟體重/總重×100%）和相對(duì)重量（相對(duì)重量=W/V×100%；W為總重，V為殼長(zhǎng)×殼寬×殼高）。

1.2 方法

西施舌取樣回來(lái)后暫養(yǎng)1 d，然后活體解剖，取出性腺組織，用4%多聚甲醛溶液固定24 h，經(jīng)石蠟包埋，連續(xù)切片厚度為7 μm，所有切片均采用蘇木精-伊紅（H.E）染色，中性樹(shù)脂封片，最后在倒置熒光顯微鏡（Nikon Eclipse Ti-E）下觀察并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 性腺發(fā)育分期

對(duì)西施舌性腺組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，卵巢和精巢的發(fā)育均可分為增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期和休止期5個(gè)時(shí)期。

2.1.1 增殖期。卵巢開(kāi)始出現(xiàn)濾泡（體積小，濾泡壁較厚），濾泡壁上的生殖原細(xì)胞處在活潑分裂期，不斷從濾泡壁分裂增殖，濾泡數(shù)量由少逐漸增多。雌性濾泡大小不均，形狀不規(guī)則，出現(xiàn)一層不連續(xù)的卵原細(xì)胞和少量的初級(jí)卵母細(xì)胞，卵原細(xì)胞不斷增殖，卵母細(xì)胞出現(xiàn)在濾泡壁中，胞體呈圓形，但此時(shí)的濾泡腔還是一個(gè)空腔（圖1A）；精巢濾泡內(nèi)多為精原細(xì)胞，精母細(xì)胞很少（圖1D）。發(fā)育時(shí)間為1月上旬至2月上旬。

2.1.2 生長(zhǎng)期。卵巢中濾泡數(shù)量增多、體積增大。可以觀察到快速增多的生殖母細(xì)胞和少量成熟的生殖細(xì)胞。卵母細(xì)胞不斷發(fā)育，數(shù)量逐漸增多，卵原細(xì)胞形成減少，其一端明顯突向?yàn)V泡腔。其中有一些處于大生長(zhǎng)期晚期的卵母細(xì)胞脫離濾泡腔，游離在濾泡腔中（圖1B）；雄性濾泡內(nèi)精原細(xì)胞迅速增殖和分化，細(xì)胞數(shù)量急劇增加，2月下旬在部分濾泡中出現(xiàn)少量精子（圖1E）。發(fā)育時(shí)間為2月下旬至4月中旬。

2.1.3 成熟期。卵巢中濾泡大、多且密，濾泡為全年最飽滿狀態(tài)，濾泡間的空隙已經(jīng)基本消失。雌性濾泡僅有少量卵原細(xì)胞和初級(jí)卵母細(xì)胞，整個(gè)濾泡充滿大量游離的成熟卵子（圖1C）；雄性濾泡中有大量的精細(xì)胞和精子，精子在腔中密集成輻射狀排列，幾乎充滿整個(gè)濾泡腔（圖1F）。發(fā)育時(shí)間為4月下旬至7月中旬、9月上旬至10月中旬。

2.1.4 排放期。對(duì)組織切片進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)，由于生殖細(xì)胞的排放，濾泡體積縮小，濾泡內(nèi)出現(xiàn)大小不等的空腔。排放前雌雄濾泡中仍比較飽滿，雌性濾泡腔中有許多成熟卵子，雄性濾泡中大多是精細(xì)胞和精子。排放后的雌性濾泡在大的濾泡腔中成熟的卵子數(shù)量減少，濾泡壁有許多卵母細(xì)胞沿著濾泡腔突出，分化發(fā)育形成成熟的卵細(xì)胞或在濾泡腔中有較小的卵母細(xì)胞（圖2G）；排放后的雄性濾泡在大的濾泡腔中有大量的精細(xì)胞和精子，而小的濾泡腔中大多為精母細(xì)胞和精細(xì)胞及少量精子（圖2I）。發(fā)育時(shí)間為7月上旬、10月下旬至11月上旬。

2.1.5 休止期。組織切片觀察發(fā)現(xiàn)，雌雄濾泡腔逐漸縮小，形狀不規(guī)則，濾泡壁厚，濾泡腔空虛，胞內(nèi)細(xì)胞較稀少。雌性濾泡內(nèi)有殘余的卵母細(xì)胞（圖2H）；雄性濾泡內(nèi)有極少量的精細(xì)胞（圖2J）。發(fā)育時(shí)間為11月中旬至12月下旬。

上述觀察發(fā)現(xiàn)，西施舌卵細(xì)胞的發(fā)生經(jīng)歷了卵原細(xì)胞期、生長(zhǎng)初期卵母細(xì)胞、生長(zhǎng)中期卵母細(xì)胞、生長(zhǎng)后期卵母細(xì)胞和成熟期卵母細(xì)胞5個(gè)時(shí)期；精子的發(fā)生經(jīng)歷了精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精細(xì)胞和精子5個(gè)時(shí)期。

2.2 生殖周期

根據(jù)周年的組織切片觀察并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況可知，湛江沿海地區(qū)的西施舌一年有2～3個(gè)成熟排放期。雌、雄性腺的發(fā)育基本同步，雄性發(fā)育略快。

從西施舌肥滿度的周年變化來(lái)看，整體趨勢(shì)與性腺組織學(xué)變化相吻合（圖3）。從3月份水溫開(kāi)始回升，西施舌性腺開(kāi)始進(jìn)入生長(zhǎng)期，肥滿度從27.94%逐漸增長(zhǎng)至6月份的36.48%，此時(shí)正值卵母細(xì)胞不斷發(fā)育增多的大生長(zhǎng)期，但在7月份肥滿度有所下降，因?yàn)樵摰貐^(qū)西施舌在7月上旬處于排放期。7月上旬排放后，精巢和卵巢還有相當(dāng)部分處于生長(zhǎng)期的生殖細(xì)胞，到7月中下旬至9月上旬，由于水溫較高，不適宜西施舌性腺發(fā)育。9月中下旬水溫開(kāi)始下降，適宜性腺生長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培育，9月下旬至10月上旬西施舌又達(dá)成熟，進(jìn)行催產(chǎn)即可排放精卵。從現(xiàn)有的切片材料統(tǒng)計(jì)，7—11月，西施舌性腺的肥滿度出現(xiàn)驟增和驟降的趨勢(shì)：肥滿度9月增長(zhǎng)到46.16%，之后隨著水溫下降，10月急速下降至29.21%。出現(xiàn)這種現(xiàn)象，可能受該試驗(yàn)每月取樣量偏少的影響。11月中旬以后雖然為西施舌性腺的休止期，但由于水溫較為適宜性腺生長(zhǎng)，肥滿度也略有回升，但12月隨著水溫逐漸下降，肥滿度也隨之下降。

根據(jù)西施舌的相對(duì)總重季節(jié)變化情況也可以明顯看出，其與性腺發(fā)育的季節(jié)變化基本一致。圖4的數(shù)據(jù)顯示，1—4月，西施舌相對(duì)總重呈平緩的趨勢(shì)，4—7月，其相對(duì)總重逐漸上升，至7月達(dá)到全年最高值。7—9月是西施舌的排放期，其相對(duì)總重出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，隨著10月水溫的回落，其相對(duì)總重也略有上升。并且筆者在生產(chǎn)實(shí)踐中也發(fā)現(xiàn)，在10月上旬也可對(duì)西施舌進(jìn)行催產(chǎn)排放精卵，獲得的受精卵可以正常發(fā)育為葡萄期幼蟲(chóng)。這表明該地區(qū)西施舌在10月均可進(jìn)行人工育苗，而福建沿海10月份以后水溫較低，西施舌很難發(fā)育成熟。

3 討論

3.1 西施舌性腺的發(fā)育分期

關(guān)于貝類性腺組織發(fā)育的分期，學(xué)者們的意見(jiàn)并不完全一致［12-17］。大多數(shù)學(xué)者以濾泡的發(fā)育程度以及濾泡中生殖細(xì)胞發(fā)育狀態(tài)及其在濾泡中數(shù)量的多少為標(biāo)準(zhǔn)，將性腺發(fā)育分為增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期、休止期5個(gè)時(shí)期［12-16］。據(jù)此，筆者將西施舌性腺發(fā)育過(guò)程同樣分為上述5個(gè)時(shí)期。黃一鳴等［11］將長(zhǎng)樂(lè)漳港自然海區(qū)的西施舌生殖腺發(fā)育過(guò)程分為增殖期（1月上旬至2月上旬）、生長(zhǎng)期（2月中旬至4月中旬）、成熟期（4月下旬至6月中旬）、生殖期（6月下旬至11月上旬）和休止期（11月中旬至12月下旬）5個(gè)時(shí)期。筆者研究了湛江沿海地區(qū)西施舌性腺周年變化，發(fā)現(xiàn)該海區(qū)西施舌性腺發(fā)育一年會(huì)有2～3個(gè)成熟排放期，西施舌性腺的成熟期分布在2個(gè)時(shí)間段（分別是4月下旬至7月中旬、9月上旬至10月中旬），排放期分布在7月上旬、10月下旬至11月上旬，因?yàn)樵摰卦?0月時(shí)水溫仍比較適宜，能夠使西施舌性腺再次達(dá)到成熟排放。因此，同種西施舌在不同環(huán)境中性腺發(fā)育時(shí)期有所不同。

3.2 西施舌性腺季節(jié)性變化與人工育苗

西施舌性腺的發(fā)育與人工催產(chǎn)及育苗有密切關(guān)系。性腺發(fā)育的生長(zhǎng)期是生殖細(xì)胞不斷分化發(fā)育的階段，所以該時(shí)期是親貝精養(yǎng)的關(guān)鍵時(shí)期，筆者認(rèn)為2月下旬至4月中旬是該地區(qū)精養(yǎng)親貝的最好時(shí)期。4月下旬至7月中旬以及9月上旬至10月中旬，性腺發(fā)育進(jìn)入成熟期，生殖活動(dòng)最強(qiáng)，可在此時(shí)期誘導(dǎo)親貝排放精卵，同時(shí)還可采用物理、化學(xué)和生物的方法來(lái)刺激誘導(dǎo)親貝，使其提前排放精卵，以達(dá)到多批人工育苗的目的。

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