巴戟天寡糖對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠血清骨轉(zhuǎn)化指標(biāo)和骨組織結(jié)構(gòu)的影響及其機(jī)制研究

莊文德 陳浩諺 陳振 肖增林 鐘誠 郭浩華 晉大祥 丁平 謝煒星

骨質(zhì)疏松癥是一種常發(fā)于中老年人群的系統(tǒng)性代謝性骨骼疾病,以骨骼質(zhì)量下降,骨微結(jié)構(gòu)破壞,易發(fā)骨折為主要特征[1]。我國流行病學(xué)調(diào)查顯示65歲以上人群中32%的人群患有骨質(zhì)疏松癥,其中女性患者占51.6%,絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)廣泛困擾著中老年女性人群。巴戟天具有溫補(bǔ)腎陽,強(qiáng)壯筋骨的功用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明, 巴戟天具有抗骨質(zhì)疏松、抗炎鎮(zhèn)痛、抗衰老、抗氧化等作用[2]。既往研究表明巴戟天能夠升高骨質(zhì)疏松大鼠血清中骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)水平,同時(shí)降低核因子-κB受體活化因子配體(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)表達(dá)水平,調(diào)節(jié)OPG/RANKL信號(hào)軸維持骨穩(wěn)態(tài),調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞,具有防治骨質(zhì)疏松的作用[3-5]。然而,巴戟天中抗骨質(zhì)疏松作用的有效成分仍不明確。巴戟天寡糖作為巴戟天主要的藥效成分之一,其含量可占巴戟天藥材干質(zhì)量的10%以上[6],具有抗抑郁、抗癡呆、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞、改善生育等多種藥理作用[7]。但關(guān)于巴戟天寡糖對(duì)PMOP的防治作用目前尚未見報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)觀察并比較巴戟天寡糖對(duì)PMOP模型大鼠的血清骨代謝標(biāo)志物、骨微結(jié)構(gòu)及骨組織結(jié)構(gòu)參數(shù)的影響,初步探究其抗骨質(zhì)疏松潛在機(jī)制,以期為巴戟天寡糖的臨床應(yīng)用及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

采用3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠50只,體質(zhì)量220～260 g,來源:廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[許可證號(hào):SYXK(粵)2018-0085]。所有大鼠均在動(dòng)物房中飼養(yǎng),保持大鼠生活環(huán)境的清潔、通風(fēng),12小時(shí)的光/暗周期,溫度(24±2)℃,自由獲取飼料和飲水。各組大鼠均存活,無一死亡,最終各組納入大鼠均為10只。此次實(shí)驗(yàn)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)及監(jiān)督下進(jìn)行。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物

本研究中實(shí)驗(yàn)藥物為巴戟天寡糖,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院丁平教授制作提供。

1.3主要試劑及儀器

阿侖膦酸鈉(上海麥克林有限公司,批號(hào):C10663728);大鼠骨堿性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、Ⅰ型膠原氨基端延長肽(procollagen type 1 N-terminal propeptide,P1NP)、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(C-terminal telopeptide of type 1 collagen,CTX-1)、抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRACP-5b)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒購自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):P0012;OPG、RANKL antibody購自南京巴傲得生物科技有限公司,貨號(hào):BS6684、BS72037;組織RNA提取試劑盒(Tissue RNA Purification Kit PLUS)、RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Color Reverse Transcription Kit)、RNA擴(kuò)增試劑盒(2×Color SYBR Green qPCR Master Mix)購自美國ZSCIENCE生物科技有限公司;SignalBoostTM免疫信號(hào)增強(qiáng)劑購自默克生命科學(xué)技術(shù)(南通)有限公司,貨號(hào): 407207等。

雙能X射線骨密度儀(Bruker科技有限公司);1510全波長酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技公司);電泳儀、梯度PCR儀(美國 Bio-Rad 公司);全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀(上海天能生命科學(xué)有限公司);微計(jì)算機(jī)斷層掃描儀(Bruker SkyScan 1276) ;生物力學(xué)試驗(yàn)機(jī)S1083 (德國Lloyd Instruments公司);骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量軟件(美國KSS Scientific Consultants公司) 。

1.4動(dòng)物分組與造模

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組、模型組、阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組,每組10只。PMOP大鼠模型造模手術(shù)參考文獻(xiàn)[8]方法,將3%戊巴比妥鈉按照3 mg/kg的比例注射入腹腔進(jìn)行麻醉,備皮,消毒鋪巾,取俯臥位于大鼠背部正中線旁開1.5 cm,雙側(cè)肋緣下1 cm處作1～1.5 cm手術(shù)切口,從腹腔中提出乳白色脂肪團(tuán),輕柔翻轉(zhuǎn)找到卵巢,結(jié)扎其雙側(cè)輸卵管和血管,將卵巢摘除,將傷口逐層縫合;假手術(shù)組采用同樣方法,但不摘除卵巢及其雙側(cè)輸卵管和血管,僅清除周圍脂肪。術(shù)后均肌注青霉素(8萬單位/天,共3天)。術(shù)后12周用雙能X線骨密度儀測(cè)定骨密度,確保除假手術(shù)組外的4組大鼠已成功構(gòu)建PMOP大鼠模型。

1.5給藥處理

分別給予假手術(shù)組、模型組蒸餾水(10 mL/kg);阿侖膦酸鈉組(7 mg/kg),每周將阿侖膦酸鈉用純水配置0.7 mg/mL灌胃;巴戟天寡糖低劑量組(25 mg/kg)、巴戟天寡糖高劑量組(75 mg/kg),每天將巴戟天寡糖用純水配置2.5 mg/mL、7.5 mg/mL灌胃,連續(xù)給藥12周。

1.6骨代謝標(biāo)志物含量檢測(cè)

連續(xù)給藥12周結(jié)束后,予大鼠禁食不禁飲24小時(shí),麻醉下開腹,腹主動(dòng)脈采血3～4 mL至離心管靜置1小時(shí),1500 r/分鐘離心取上層血清;根據(jù)ELISA試劑盒的操作說明書檢測(cè)各組大鼠采樣血清中BALP、P1NP、TRACP-5b、CTX-1等指標(biāo)的含量變化。

1.7骨生物力學(xué)的測(cè)定

抽取血清樣本后,取出各組大鼠腰椎骨、脛骨、股骨,剔除軟組織,滅菌后-80℃保存,以用于骨骼相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。用游標(biāo)卡尺測(cè)量各組大鼠左側(cè)股骨的長度、短軸寬度和長軸寬度,用生物力學(xué)試驗(yàn)機(jī)進(jìn)行三點(diǎn)彎曲檢測(cè),測(cè)定骨骼的最大載荷、最大撓度、最大應(yīng)力、最大應(yīng)變和能量吸收值。

1.8骨密度及骨微結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)、靜態(tài)參數(shù)的檢測(cè)

骨密度指標(biāo)采用骨密度儀測(cè)定各組大鼠腰椎骨標(biāo)本的骨密度。取出各組剩余的大鼠右側(cè)股骨遠(yuǎn)端,用4%多聚甲醛固定后保存于4℃冰箱。經(jīng)過3天的保存,再使用生理鹽水浸泡1天,用微計(jì)算機(jī)斷層掃描儀(micro computed tomography,Micro-CT)掃描各組大鼠股骨遠(yuǎn)端,Micro-CT掃描參數(shù)電流100 μA,電壓80 kV,掃描厚度15 μm,濾片精度0.5 mm,像素分辨率1000×666,掃描方向沿股骨長軸掃描,最終獲取連續(xù)平面Micro-CT圖像,掃描完成后在主機(jī)上選出股骨遠(yuǎn)端1.5 mm的區(qū)域?yàn)楦信d趣區(qū)域(range of interests,ROI),并通過配套軟件“CTan”分析各組大鼠股骨遠(yuǎn)端骨組織靜態(tài)參數(shù)。取各組大鼠剩余的股骨組織暴露骨髓腔,進(jìn)行固定、脫水、包埋,制成8 μm 骨厚片封片測(cè)量相關(guān)動(dòng)態(tài)參數(shù),然后按公式計(jì)算出相應(yīng)的動(dòng)態(tài)參數(shù)。

1.9OPG、RANKL mRNA和蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)

將低溫保存的剩余大鼠骨組織研磨成粉末,根據(jù)試劑盒操作說明書進(jìn)行RNA提取,按照Color Reverse Transcription Kit及2×Color SYBR Green qPCR Master Mix說明書進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄。引物來自上海生工生物工程有限公司。反應(yīng)體系:2×Color SYBR Green qPCR Master Mix 10 μL,上下游引物各0.4 μL,cDNA 2 μL,加ddH2O至20 μL。95℃ 5分鐘1次,95℃ 10分鐘,60℃ 30秒,循環(huán)39次;溶解曲線:95℃ 10秒,65℃ 5秒。以GAPDH為內(nèi)參基因,以2-ΔΔCt計(jì)算對(duì)應(yīng)各組骨組織中OPG、RANKL mRNA相對(duì)表達(dá)量。具體引物序列見表1。

表1 引物序列

另取1 g骨組織粉末加入RIPA蛋白裂解液中提取骨組織總蛋白。對(duì)于蛋白定量的測(cè)定則使用BCA蛋白檢測(cè)試劑盒進(jìn)行操作。蛋白上清與上樣緩沖液進(jìn)行均勻混合后加熱至98℃使其變性。使用SDS-PAGE電泳技術(shù)分離總蛋白,將總蛋白移至聚偏二氟乙烯膜。膜浸泡于5%脫脂牛奶封閉2小時(shí),分別與一抗OPG、RANKL、β-actin(1∶1000)室溫下孵育2小時(shí),并于4℃冰箱過夜。然后,清洗后加入二抗,室溫孵育1小時(shí)。條帶用電化學(xué)發(fā)光液顯影,并用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀拍照,用ImageJ軟件檢測(cè)和分析所有蛋白條帶灰度。

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1巴戟天寡糖對(duì)大鼠血清骨代謝指標(biāo)的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠血清中BALP、P1NP水平顯著下降,CTX-1、TRACP-5b水平顯著上升(P<0.05);與模型組相比,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組大鼠血清中BALP、P1NP水平顯著上升,CTX-1、TRACP-5b水平顯著下降(P<0.05);與阿侖膦酸鈉組相比,巴戟天寡糖低劑量組大鼠血清中BALP、P1NP水平降低,CTX-1、TRACP-5b水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且巴戟天寡糖高劑量組大鼠血清中BALP、P1NP水平較高,CTX-1、TRACP-5b水平較低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組POMP大鼠血清BALP、P1NP、CTX-1、TRACP-5b含量的比較

2.2巴戟天寡糖對(duì)大鼠骨密度的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的腰椎骨骨密度明顯減小(P<0.05);與模型組相比,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組的腰椎骨密度值明顯增加(P<0.05);與阿侖膦酸鈉組相比,巴戟天寡糖低劑量組的腰椎骨密度值較低(P<0.05),巴戟天寡糖高劑量組的腰椎骨密度值較阿侖膦酸鈉組更高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組POMP大鼠腰椎骨骨密度值的比較

2.3巴戟天寡糖對(duì)大鼠股骨生物力學(xué)性能的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠股骨的最大載荷、最大應(yīng)力及最大應(yīng)變顯著降低(P<0.05),最大撓度和斷裂所需的能量吸收值下降,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與模型組相比,阿侖膦酸鈉組大鼠股骨最大載荷、最大應(yīng)力及最大應(yīng)變顯著增加(P<0.05),但對(duì)其余生物力學(xué)指標(biāo)作用不明顯;與模型組相比,巴戟天寡糖低劑量組大鼠股骨的最大載荷及最大應(yīng)變顯著提高(P<0.05),巴戟天寡糖高劑量組大鼠股骨的最大載荷、最大應(yīng)力及最大應(yīng)變顯著提高(P<0.05),其他股骨生物力學(xué)性能也有一定改善,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 各組POMP大鼠股骨生物力學(xué)性能的比較

2.4巴戟天寡糖對(duì)大鼠股骨組織微結(jié)構(gòu)及形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響

2.4.1 micro-CT掃描下各組大鼠股骨組織微結(jié)構(gòu)的變化情況 與假手術(shù)組比較,模型組皮質(zhì)骨變薄,骨髓腔增大,骨小梁網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)退化、呈現(xiàn)出明顯的骨微結(jié)構(gòu)破壞。與模型組比較,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組皮質(zhì)骨面積增加,骨髓腔縮小,骨小梁數(shù)量、寬度、長度、形態(tài)部分恢復(fù),密度和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聯(lián)結(jié)性增加。其中,阿侖膦酸鈉組和巴戟天寡糖高劑量組與假手術(shù)組的水平基本一致。見圖1。

圖1 micro-CT掃描下各組中PMOP大鼠股骨組織微結(jié)構(gòu)的比較

2.4.2 各組大鼠股骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)參數(shù)變化情況 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的股骨相對(duì)骨體積、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)量、熒光標(biāo)記周長百分率、礦化沉積率、骨形成率與骨體積之比明顯減少(P<0.05),股骨骨小梁間距、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)和破骨細(xì)胞數(shù)目顯著升高(P<0.05);與模型組相比,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組的股骨相對(duì)骨體積、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)量、熒光標(biāo)記周長百分率、礦化沉積率、骨形成率與骨體積之比明顯增加(P<0.05),股骨骨小梁間距、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)和破骨細(xì)胞數(shù)目顯著下降(P<0.05);與阿侖膦酸鈉組相比,巴戟天寡糖低劑量組的股骨相對(duì)骨體積、骨小梁數(shù)量、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)、熒光標(biāo)記周長百分率、骨形成率與骨體積之比及礦化沉積率降低(P<0.05),股骨骨小梁間距和破骨細(xì)胞數(shù)目升高(P<0.05);巴戟天寡糖高劑量組的股骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)參數(shù)與阿侖膦酸鈉組參數(shù)數(shù)據(jù)相比較則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表5～6。

表5 各組PMOP大鼠骨微結(jié)構(gòu)靜態(tài)參數(shù)的比較

表6 各組PMOP大鼠骨微結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)參數(shù)的比較

2.5巴戟天寡糖對(duì)大鼠骨組織中OPG/RANKL軸mRNA表達(dá)的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠骨組織OPG mRNA表達(dá)量顯著下降,RANKL mRNA表達(dá)量顯著上升(P<0.05);與模型組相比,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組大鼠骨組織OPG mRNA表達(dá)量顯著上升,RANKL mRNA表達(dá)量顯著下降(P<0.05);與阿侖膦酸鈉組相比,巴戟天寡糖低劑量組大鼠骨組織OPG mRNA表達(dá)量降低,RANKL mRNA表達(dá)量升高(P<0.05), 巴戟天寡糖高劑量組大鼠骨組織OPG mRNA表達(dá)量升高,RANKL mRNA表達(dá)量降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表7。

表7 各組PMOP大鼠骨組織OPG、RANKL mRNA表達(dá)量的比較

2.6巴戟天寡糖對(duì)大鼠骨組織中OPG/RANKL軸蛋白表達(dá)的影響

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠骨組織OPG 蛋白表達(dá)量顯著下降,RANKL蛋白表達(dá)量顯著上升(P<0.05);與模型組相比,阿侖膦酸鈉組、巴戟天寡糖低劑量組、巴戟天寡糖高劑量組大鼠OPG蛋白表達(dá)量顯著上升, RANKL蛋白表達(dá)量顯著下降(P<0.05);與阿侖膦酸鈉組相比,巴戟天寡糖高劑量組大鼠骨組織OPG蛋白表達(dá)量較高,RANKL蛋白表達(dá)量較低(P<0.05),與巴戟天寡糖低劑量組比較則無顯著性差別(P>0.05)。見圖2。

圖2 各組PMOP大鼠骨組織中OPG、RANKL蛋白表達(dá)量的比較

3 討論

骨質(zhì)疏松的病理機(jī)制復(fù)雜,目前多認(rèn)為與代謝異常、基因多態(tài)性、微循環(huán)障礙等因素相關(guān),西醫(yī)多治以雌激素調(diào)節(jié)藥物、骨吸收抑制劑、骨形成促進(jìn)藥物等,但其長期使用有一定毒副作用[10]。近年來,大量研究發(fā)現(xiàn)中藥及中藥復(fù)方具有促骨形成及改善骨代謝的作用,且不良反應(yīng)少[11]。因此,從中醫(yī)藥資源中挖掘出可長期服用且不良反應(yīng)少的抗骨質(zhì)疏松藥物極具現(xiàn)實(shí)意義。此前,諸多臨床經(jīng)驗(yàn)及現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,巴戟天具有抗骨質(zhì)疏松作用,但主要集中于巴戟天全藥及巴戟天多糖的抗骨質(zhì)疏松機(jī)制,尚無對(duì)巴戟天寡糖改善老年女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制進(jìn)行探討研究[12-14]。

血清BALP、P1NP、CTX-1、TRACP-5b水平是用于反映成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞活性變化情況的常用指標(biāo)[15-16]。張瑤等[17]人使用二仙湯干預(yù)PMOP模型大鼠,發(fā)現(xiàn)可以改善模型大鼠的骨密度,提高血清P1NP含量,具有抗骨質(zhì)疏松作用。段碩等[18]觀察活血補(bǔ)腎壯骨方對(duì)糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松型大鼠骨折愈合的影響,發(fā)現(xiàn)可以明顯升高BALP,降低TRACP、CTX-1,改善骨微結(jié)構(gòu),促進(jìn)骨生成。本研究結(jié)果表明,PMOP模型大鼠血清骨代謝指標(biāo)BALP、P1NP含量顯著降低,CTX-1、TRACP-5b含量顯著上升,提示骨吸收活動(dòng)水平提高、骨形成減少。經(jīng)巴戟天寡糖灌胃處理后,模型大鼠的血清骨代謝指標(biāo)BALP、P1NP含量顯著上升,CTX-1、TRACP-5b含量顯著下降,這說明巴戟天寡糖具有改善骨代謝指標(biāo)的作用,能有效抑制骨吸收、促進(jìn)骨生成,且本研究中選用的骨代謝指標(biāo)較全面,其結(jié)果更具準(zhǔn)確性。再者,巴戟天寡糖高劑量的療效優(yōu)于低劑量,這初步說明巴戟天寡糖抗骨質(zhì)疏松作用與其藥物濃度梯度可能存在一定相關(guān)性,但其具體機(jī)制尚不明確。

此外,骨生物力學(xué)性能和骨微結(jié)構(gòu)指標(biāo)的變化能清晰準(zhǔn)確地反應(yīng)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下骨骼宏觀和微觀的變化情況,具有重要的參考價(jià)值。過往已有研究發(fā)現(xiàn)運(yùn)用巴戟天多糖干預(yù)PMOP小鼠模型,結(jié)果提示巴戟天多糖能改善模型小鼠骨密度,發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松的作用[19-20],但其研究均未對(duì)骨生物力學(xué)性能和骨微結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入分析,其結(jié)果準(zhǔn)確度相對(duì)有限。故本研究中,除了對(duì)PMOP模型大鼠骨密度進(jìn)行檢測(cè)外,還對(duì)模型大鼠的骨生物力學(xué)性能、骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行深入分析,發(fā)現(xiàn)運(yùn)用巴戟天寡糖干預(yù)后,PMOP大鼠股骨生物學(xué)性能改善明顯,骨密度、相對(duì)骨體積、骨小梁數(shù)量顯著升高,骨小梁間距、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)、破骨細(xì)胞數(shù)目顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且隨著濃度梯度增加,增加骨量及改善骨微結(jié)構(gòu)的效果更好,這表明巴戟天寡糖具有較好的抗骨質(zhì)疏松作用,這與巴戟天多糖作用相似。但巴戟天寡糖還能改善PMOP狀態(tài)下的骨骼骨微結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)及靜態(tài)相關(guān)指標(biāo),其抗骨質(zhì)疏松的作用更具可信度。

OPG/RANKL軸調(diào)控骨骼組織形成與吸收的相對(duì)平衡,是維持骨穩(wěn)態(tài)以防治骨丟失,確保正常骨重建活動(dòng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)機(jī)制[21]。本研究對(duì)于巴戟天寡糖抗骨質(zhì)疏松作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討,發(fā)現(xiàn)PMOP模型大鼠股骨遠(yuǎn)端骨組織中OPG、RANKL mRNA及蛋白表達(dá)水平發(fā)生明顯改變,OPG表達(dá)下調(diào)、RANKL表達(dá)上升,提示PMOP模型大鼠骨代謝平衡異常與OPG/RANKL信號(hào)軸有關(guān)。課題組發(fā)現(xiàn),經(jīng)巴戟天寡糖干預(yù)后,無論是高、低濃度組,大鼠OPG蛋白表達(dá)量均顯著上升,RANKL蛋白表達(dá)量均顯著下降(P<0.05)。此外,高濃度巴戟天寡糖對(duì)OPG/RANKL信號(hào)軸的干預(yù)效果比阿侖膦酸鈉更加明顯(P<0.05)。這表明巴戟天寡糖抗骨質(zhì)疏松作用較好,也提示巴戟天治療骨質(zhì)疏松的作用可能與巴戟天寡糖調(diào)控OPG/RANKL信號(hào)軸相關(guān)。

綜上所述,巴戟天寡糖能夠增加PMOP模型大鼠骨量,改善骨生物學(xué)性能及骨微結(jié)構(gòu),調(diào)節(jié)大鼠的骨代謝平衡情況,其機(jī)制可能與調(diào)控OPG/RANKL信號(hào)軸相關(guān)。但本實(shí)驗(yàn)尚存在以下不足:未對(duì)巴戟天寡糖濃度梯度變化進(jìn)行深入研究,且其相關(guān)信號(hào)通路機(jī)制研究僅做了初步探索,需進(jìn)一步研究。此外,盡管關(guān)于巴戟天寡糖治療骨質(zhì)疏松的研究較少,但巴戟天寡糖具有副作用少、安全性高的特點(diǎn),并且已有中成藥制劑應(yīng)用于臨床[22],在臨床上擁有較好的應(yīng)用前景,所以課題組也將繼續(xù)深入研究其發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用的具體分子機(jī)制以及關(guān)鍵靶點(diǎn),為巴戟天治療骨質(zhì)疏松癥的臨床應(yīng)用及中藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)和新思路。