探討腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與病毒抗體檢測(cè)在病毒性腦膜炎診斷中的臨床價(jià)值

侯英娟 馬雪梅 李亞娟 王澤丹 張偉 馬亞玲 劉亮

(榆林市第一醫(yī)院,陜西 榆林 718000)

病毒性腦膜腦炎作為臨床常見(jiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病中的一種,是指病毒侵犯患者腦部或腦膜神經(jīng)系統(tǒng)后誘發(fā)的一種無(wú)菌性炎癥,其中又以單純皰疹病毒性腦膜炎占據(jù)比例最高[1]。究其主要病因,臨床表示患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)不同細(xì)胞群的胞膜上的特異性受體均會(huì)有差異,對(duì)各種病毒的易感性也會(huì)有變化,致使其病理和臨床癥狀出現(xiàn)不同表現(xiàn),起病上可見(jiàn)急性或亞急性?xún)煞N類(lèi)型,癥狀表現(xiàn)可見(jiàn)發(fā)熱、頭痛、嘔吐、腹瀉、意識(shí)障礙、驚厥、昏迷等,以及腦膜刺激征呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),偶有病理反射出現(xiàn),有甚者可見(jiàn)輕度癱瘓或腦神經(jīng)功能障礙[2]。因此,盡早予以患者病情診斷并及時(shí)采取對(duì)癥治療,是避免其病情惡化的關(guān)鍵前提。本文旨在探討研究腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與病毒抗體檢測(cè)在病毒性腦膜炎診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月至2020年5月本院收治的顱內(nèi)感染患者92例,其中50例病毒性腦膜炎納入觀察組,42例化膿性腦膜炎患者納入對(duì)照組。觀察組男26例,女24例;年齡15～77歲,平均(40.63±6.77)歲;病程1～7 d,平均(3.05±0.86)d。對(duì)照組男20例,女22例;年齡16～76歲,平均(41.43±5.98)歲;病程1～8 d,平均(3.27±0.82)d。觀察組、對(duì)照組分別符合病毒性腦膜炎[3]、化膿性腦膜炎[4]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),與此同時(shí),對(duì)合并重要器官功能衰竭、肝腎功能代謝異及休克癥狀患者,均予以排除。本次研究均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批,每例患者行腦脊液檢測(cè)時(shí)都需取2次腦脊液做檢測(cè)標(biāo)本,共計(jì)184份腦脊液,所選患者均表示對(duì)研究知情且同意。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法 腦脊液的采集及處理:經(jīng)腰椎穿刺后取出3～5 mL腦脊液,對(duì)部分腦脊液采取常規(guī)、生化檢測(cè),剩余腦脊液行細(xì)胞學(xué)分析及ELISA檢測(cè)病毒抗體。腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查方法:對(duì)腦脊液標(biāo)本于1 h后進(jìn)行離心式細(xì)胞玻璃切片檢測(cè):首先檢查白細(xì)胞計(jì)數(shù),接著抽取0.1～0.5 mL腦脊液(視細(xì)胞數(shù)目而定),經(jīng)FMU-5微細(xì)胞玻璃片離心沉淀器以500 r·min-1,2～5 min速率進(jìn)行低速離心,將采集有細(xì)胞的玻璃切片行Ma Grunwald Giemsa(MGG)進(jìn)行10 min的染色,干燥后在油鏡下利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類(lèi)和統(tǒng)計(jì)。腦脊液病毒抗體定性檢查:采用ELISA法完成腦脊液病毒抗體的定性檢測(cè),包括單純皰疹病毒Ⅰ(HSV-Ⅰ)、單純皰疹病毒Ⅱ(HSV-Ⅱ)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、弓形蟲(chóng)(TOX)、風(fēng)疹病毒(RV)、副流感病毒(PIV)、MTB的特異性IgM、IgG抗體,其中,MTB抗體IgG選擇北京貝爾生物工程有限公司,其他選擇深圳市博卡生物技術(shù)有限公司,詳細(xì)操作步驟為:(1)處理樣本:從4℃冷藏環(huán)境中取出采集的腦脊液解凍后再利用。(2)稀釋樣本:病毒IgM:75 μL樣本+25 μL稀釋液;IgG:10 μL腦脊液樣本+100 mL稀釋液;其余病毒:75 μL腦脊液樣本+25 μL抗體稀釋液。設(shè)空白、陰性和陽(yáng)性作對(duì)照孔。制備洗滌液連續(xù)5次洗板,每次時(shí)間在30 s;加入酶結(jié)合物后將清洗板反復(fù)沖洗3～5遍后可見(jiàn)顯色,在每個(gè)孔中各添加50 μL的顯色劑A和B,混合均勻,在37℃的恒溫下等待10 min,然后分離出來(lái)進(jìn)行檢測(cè)判斷。(3)判斷結(jié)果:用肉眼觀測(cè),在白底下每個(gè)小孔的顏色都非常明顯,顯示清晰藍(lán)色者視為陽(yáng)性,反之無(wú)顏色者為陰性;設(shè)備測(cè)試時(shí),所有孔都添加1滴終止液,輕輕搖動(dòng)后用空白對(duì)照調(diào)零,將酶標(biāo)儀波長(zhǎng)參數(shù)值調(diào)整為450 nm對(duì)每個(gè)小孔 A值進(jìn)行測(cè)量。其中,臨界值(C.O.)=陰性對(duì)照孔均值N8 2.1,樣本A值S/C.O.≥1(S/N≥2.1)評(píng)估為陽(yáng)性,樣本A值S/C.O.<1(S/N<2.1)則評(píng)估為陰性,對(duì)接近于臨界值的樣本進(jìn)行反復(fù)檢驗(yàn),并根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行全面分析。

1.3觀察指標(biāo) 記錄兩組患者首次腦脊液檢測(cè)情況,包括腦脊液(CSF)壓力、白細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞分類(lèi)情況(單核細(xì)胞、多核細(xì)胞)、葡萄糖、氧化物、白蛋白含量;兩組患者腦脊液病毒抗體檢測(cè)情況;記錄觀察組患者不同時(shí)間段(1、2、3、4周)腦脊液中白細(xì)胞出現(xiàn)率及白細(xì)胞分類(lèi)變化。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者首次腦脊液檢測(cè)情況比較 觀察組CSF壓力、白細(xì)胞總數(shù)、多核細(xì)胞數(shù)、總蛋白等指標(biāo)均低于對(duì)照組,而單核細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組高(t=6.88、26.33、12.39、8.69、15.63,P<0.05);兩組患者葡萄糖、氧化物比較差異較小,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.89、2.63,P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者首次腦脊液檢測(cè)情況比較

2.2兩組患者腦脊液病毒抗體檢測(cè)情況比較 觀察組病毒抗體IgG陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05),觀察組IgM陽(yáng)性率與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者腦脊液病毒抗體檢測(cè)情況比較

2.3觀察組病程不同時(shí)期的腦脊液細(xì)胞學(xué)白細(xì)胞分類(lèi)變化 患者早期細(xì)胞學(xué)上以激活淋巴細(xì)胞反應(yīng)為特征,活淋巴細(xì)胞數(shù)目可見(jiàn)顯著增加,隨病情發(fā)展及治療而降低,最終回歸淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。見(jiàn)表3。

表3 觀察組病程不同時(shí)期的腦脊液細(xì)胞學(xué)白細(xì)胞分類(lèi)變化(%)

3 討 論

細(xì)菌和病毒作為引發(fā)顱內(nèi)感染的主要病原體,但病毒性腦膜炎臨床表現(xiàn)缺乏典型特征,故在臨床具有較高診斷難度[5]。有相關(guān)報(bào)道[6]指出,早期腦脊液檢測(cè)雖特異度不高,但用于鑒別患者病情有重要應(yīng)用價(jià)值,對(duì)疑似病毒性腦膜炎患者需盡早予以腦脊液檢查,區(qū)分開(kāi)其他顱內(nèi)感染性疾病,為后續(xù)實(shí)施對(duì)癥治療予以參考依據(jù)。

隨著抗生素在臨床應(yīng)用范圍的不斷擴(kuò)大,化膿性腦膜發(fā)病率雖有所下降,但病毒性腦膜炎卻呈現(xiàn)持續(xù)上增趨勢(shì),究其原因,可誘發(fā)后者病癥的病毒種類(lèi)較多,基本上所有病毒都可以改變患者腦脊液的細(xì)胞學(xué)?；诖?本方案針對(duì)病毒性腦膜炎診斷,主張采取腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與病毒抗體檢測(cè),并對(duì)比化膿性腦膜炎檢查結(jié)果,發(fā)現(xiàn)兩者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)反映存在明顯差異,包括CSF壓力、白細(xì)胞總數(shù)、多核細(xì)胞數(shù)、總蛋白、單核細(xì)胞數(shù),且觀察組病毒抗體IgG陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。此外,患者早期細(xì)胞學(xué)上以激活淋巴細(xì)胞反應(yīng)為特征,激活淋巴細(xì)胞數(shù)目可見(jiàn)顯著增加,隨病情發(fā)展及治療而降低,最終回歸淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。其中,病毒特異性IgG抗體作為一種反應(yīng)性抗體,一般是患者在接觸病毒3～5 d后就會(huì)出現(xiàn)異常,應(yīng)用ELISA法可在患者血液及腦脊液檢出抗體,是病原學(xué)早期診斷常用方法[7]。但考慮到此類(lèi)方法敏感度不高,所以聯(lián)合腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè),有投入小、操作便捷、結(jié)果獲取快速且準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì),用于病毒性腦膜炎診斷能起到極高輔助作用。

綜上所述,腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)與病毒抗體檢測(cè)在病毒性腦膜炎診斷中有較高應(yīng)用價(jià)值,值得推廣。