紫蘇提取物和透明質(zhì)酸混合滴眼液對實驗性干眼的治療效果研究

金海燕 李正日 李英?。ㄍㄓ嵶髡撸?/p>

（延邊大學(xué)附屬醫(yī)院眼科 吉林 延吉 133000）

1.引言

干眼癥是患病率最高的眼表疾病。干眼的發(fā)病機制繁雜，其中主要是炎癥及氧化應(yīng)激共同參與了干眼的發(fā)病。氧化應(yīng)激產(chǎn)生活性氧（ROS），可導(dǎo)致角膜和結(jié)膜上皮細(xì)胞DNA 的改變和損傷[1]，受損上皮細(xì)胞釋放細(xì)胞因子并導(dǎo)致眼表炎癥，最終導(dǎo)致干眼癥。

紫蘇含有大量的黃酮類化合物，Omega-3，Omega-6，Omega-9 等，使得紫蘇有著強大的防止動脈硬化的作用，更具有強大的抗氧化能力，清除自由基，維系細(xì)胞的“青春壽命”。

人工淚液是干眼癥的常見治療方法[2]。其中透明質(zhì)酸（HA）是最常用的潤滑劑滴眼液的成分之一。這些藥物不僅可以緩解干眼癥狀，還可以改善角膜表面完整性。然而，單獨使用HA 滴眼液可能無法解決干眼癥的病因。

雖然已發(fā)現(xiàn)紫蘇提取物具有抗炎及抗氧化作用，但尚未探索紫蘇提取物和HA 聯(lián)合應(yīng)用于干眼癥。本實驗探討紫蘇提取物和HA 混合物對干眼治療效果和機制。

2.方法

2.1 干眼癥的老鼠模型

該研究在實驗中使用6 至8 周齡健康雌性C57BL/6 小鼠60只，體重（20±2）克。通過每天四次用0.5mg/0.2mL 氫溴酸東莨菪堿皮下注射小鼠來誘導(dǎo)實驗性干眼（EDE）模型。暴露于30%的環(huán)境濕度[3]。

2.2 材料

將蘇子葉晾干，粉碎，準(zhǔn)確稱取5.0000g 置于錐形瓶中，加入200mL 的蒸餾水，浸泡24h，加入纖維素酶放入恒溫水浴鍋加熱，一段時間后將其取出抽濾，濾液在60℃以下加熱，待將要得到膏狀物質(zhì)時，停止加熱，用平衡鹽溶液（BSS）稀釋。

2.3 實驗設(shè)計和程序

將小鼠隨機分成5 組：（1）未處理的對照組；（2）EDE干眼誘發(fā)組，但不接受滴眼液；（3）用0.1%HA 治療的EDE 小鼠；（4）用0.01%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物處理的EDE 小鼠；（5）用0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物處理的EDE 小鼠。每組由10 只動物組成。所有治療組每天四次接受3μL 滴眼液。在處理后10 天測量淚液體積，淚膜破裂時間（BUT），并進(jìn)行多重免疫珠測定，酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）。

2.4 淚液體積測量。

如前所述（3），使用酚紅浸漬的棉線測量小鼠的淚液體積。簡而言之，將棉線施加到外側(cè)眼角上20秒，并且使用顯微鏡測量，以紅色線的毫米數(shù)做記錄，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線以將距離轉(zhuǎn)換為體積。

2.5 淚膜破裂時間和角膜熒光素染色評分的評價

在將1%熒光素滴注到下結(jié)膜囊中后，讓小鼠眨眼三次，然后使用在裂隙燈生物顯微鏡鈷藍(lán)光下在幾秒鐘內(nèi)記錄淚膜BUT。

2.6 多重免疫珠測定，酶聯(lián)免疫吸附測定

如前所述，多重免疫珠測定法測量結(jié)膜中IL-1β，TNF-α[4]。使用ELISA 檢測脂質(zhì)過氧化標(biāo)記物 4-羥基壬烯醛（4-HNE）的總蛋白質(zhì)水平[5]。

3.結(jié)果

3.1 各組小鼠淚液分泌結(jié)果

在造模后的第10 天，淚液分泌量指標(biāo)上，EDE 組較正常對照組均減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.004)。治療第10 天時，在淚液分泌量上0.1%與0.01%混合物治療組較EDE 組及溶劑對照組明顯延長，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。然而0.1%透明質(zhì)酸治療組較EDE 組無明顯改善。

3.2 淚膜破裂時間

治療第10 天時，在BUT 上0.1%與0.01%混合物治療組較EDE 組明顯延長，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。然而0.1%透明質(zhì)酸治療組較EDE 組略有改善，但無統(tǒng)計學(xué)意義。

3.3 多重免疫珠測定，酶聯(lián)免疫吸附測定

與其他組相比，0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物滴眼液組的IL-1β，4HNE和TNF-α的含量較EDE組均顯著降低（P＜0.05）。

4.討論

目前，干眼的治療手段主要為藥物治療，包括人工淚液、抗炎藥物、促淚液分泌藥物等，而人工淚液作為干眼治療的一線藥物，由于其不包含正常淚液中包含的多種活性因子成分，僅能潤滑眼表，而對于角膜上皮缺損修復(fù)的幫助有限。既往的研究發(fā)現(xiàn)，許多抗氧化劑已經(jīng)顯示出對人角膜上皮細(xì)胞以及干眼患者的干眼的有益作用。發(fā)現(xiàn)抗氧化治療的實驗性干眼小鼠眼表上皮細(xì)胞及杯狀細(xì)胞密度顯著上升、細(xì)胞凋亡數(shù)量下降，氧化物質(zhì)及炎癥因子減少。

在本實驗結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，相較于其他組，0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物治療組淚液分泌增加，淚膜破裂時間延長。這與Li 等應(yīng)用Omega-3 治療實驗性小鼠干眼的結(jié)果基本一致，表明了紫蘇提取物和HA 混合物對實驗性干眼有改善癥狀的作。

干眼的治療中，恢復(fù)角膜上皮屏障功能，減少眼表炎癥及氧化物質(zhì)，促進(jìn)角膜上皮修復(fù)尤為重要。干眼患者中IL-1β 作為重要的炎癥因子，可以促進(jìn)其他的炎癥因子，比如IL-6、IL-8 和TNF-α。同時，晚期脂質(zhì)過氧化標(biāo)志物4-HNE 和丙二醛（MDD）的表達(dá)與無干眼的類似患者相比，在淚膜和眼表中增加。

0.1%紫蘇提取物和0.1%HA 混合物治療組結(jié)膜中IL-1β、TNF-及4-HNE 表達(dá)顯著下降。這可能與紫蘇提取物和HA 混合物促進(jìn)角膜上皮修復(fù)，維持淚膜穩(wěn)定，潤滑眼表，避免了眼表長期處于慢性炎癥狀態(tài)。

綜上所述，本研究證實了紫蘇提取物與HA 混合物滴眼液對干眼癥的療效。紫蘇提取物通過保護(hù)免受氧化應(yīng)激，抑制炎癥標(biāo)志物的表達(dá)，減弱氧化損傷，減少暴露于干燥應(yīng)激的小鼠眼表中的氧化物質(zhì)的產(chǎn)生和炎癥。再加上HA 傷口愈合和控制炎癥及潤滑劑的特性，這兩種成分的混合物將協(xié)同作用， 有助于改善干眼癥的癥狀和體征。