BRAF V600E基因突變檢測聯(lián)合US-FNAB對甲狀腺結節(jié)的定性診斷效能

岳彩云 田龍

1成武縣人民醫(yī)院病理科，菏澤 274200；2成武縣人民醫(yī)院乳甲外科，菏澤 274200

甲狀腺結節(jié)為臨床較為常見的內分泌系統(tǒng)多發(fā)性腫瘤，隨高頻超聲的應用其檢出率逐漸提高［1］。報道顯示，甲狀腺癌占所有癌癥發(fā)病率中第9位，而甲狀腺結節(jié)在體檢人群中檢出率約為50%，其中甲狀腺惡性腫瘤發(fā)病率約15%［2］，對患者生命安全造成嚴重威脅，因此，及時評估甲狀腺結節(jié)性質、制定有效干預方案至關重要。超聲引導下細針抽吸活檢（ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy，US-FNAB）為目前臨床評估甲狀腺結節(jié)的主要方法之一，具有微創(chuàng)、敏感度高等優(yōu)點，但經(jīng)相關數(shù)據(jù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，仍有10%～20%甲狀腺結節(jié)無法通過US-FNAB明確其性質［3-4］。近年來，基因水平已成為腫瘤標志物檢測指標，其中絲/蘇氨酸特異性激酶基因V600E（BRAF V600E）為甲狀腺癌常見生物學突變位點，且該突變點僅存在于惡性結節(jié)中，因此，推測其可作為甲狀腺結節(jié)術前診斷的標志物［5-6］。目前，臨床關于二者聯(lián)合應用于甲狀腺結節(jié)定性診斷的相關研究鮮有，基于此，本研究試分析BRAF V600E基因突變檢測聯(lián)合US-FNAB對甲狀腺結節(jié)的診斷價值及臨床意義。

資料與方法

1.一般資料

選取2019年8月至2022年8月在成武縣人民醫(yī)院就診的90例疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者作為研究對象，其中男51例，女 39例，年齡 32～68（56.27±2.84）歲；體質量指數(shù)20.2～26.2（23.17±1.15）kg/m2；結節(jié)長徑 3.0～28.0（17.35±1.35）mm。

本研究經(jīng)成武縣人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批通過（2022047）。

2.入選標準

（1）納入標準：均經(jīng)超聲檢查初步判定為疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者；均為單發(fā)結節(jié)；可接受本研究檢查方案；患者及家屬知曉本研究，并簽訂知情同意書。（2）排除標準：非首次行甲狀腺手術；合并其他甲狀腺疾??；合并其他惡性腫瘤；既往存在遠端轉移及頭頸部放射治療史；入組前3個月內服用抗甲狀腺藥物治療；合并心、肺、肝、腎功能障礙；合并全身性感染疾病、造血系統(tǒng)疾病。

3.方法

BRAF V600E基因檢測：采集所有患者靜脈血500 μg，經(jīng)抗凝處理后提取DNA，BRAF基因第15號外顯子序列PCR擴增，采用武漢生源科技公司BRAF基因突變檢測試劑盒，經(jīng)DNA測序法行PCR產物DNA序列雙向測序，采用美國ABT7500型全自動熒光定量PCR儀分析基因突變性質，分批上樣重復試驗，獲取突變信號或內控信號熒光閾值循環(huán)數(shù)（Ct），基因檢測結果分為野生型及突變型，其中野生型：Ct≥26，突變型：Ct<28，野生型判定為惡性。

US-FNAB：均采用美國GE E8型彩色多普勒超聲診斷儀檢查甲狀腺結節(jié)，探頭頻率為5～10 MHz，引導患者處仰臥位，充分暴露頸部，明確最佳穿刺部位及深度，局部麻醉處理后，采用23G針頭連接10 ml注射器，超聲引導下避開神經(jīng)、大血管及氣管等重要部位，全程密切關注穿刺位置及方向，維持穿刺針處于負壓狀態(tài)，通過改變穿刺針方向反復提插5次以上，消除負壓后拔出針頭，壓迫穿刺點止血10 min。根據(jù)US-FNAB結果進行分類，其中Ⅰ類：標本無法診斷；Ⅱ類：良性病變；Ⅲ類：意義不明確的非典型病變；Ⅳ類：濾泡性腫瘤；Ⅴ類：可疑惡性腫瘤；Ⅵ類：惡性腫瘤。

4.觀察指標

（1）比較BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨、聯(lián)合診斷結果，聯(lián)合診斷結果采用并聯(lián)原則。（2）比較BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨、聯(lián)合診斷效能，包括靈敏度、特異度、準確率、漏診率、誤診率、陽性預測值、陰性預測值。（3）比較不同甲狀腺結節(jié)長徑患者BRAF V600E基因突變類型、US-FNAB分類。

5.統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，用EXCEL軟件建立數(shù)據(jù)庫，常規(guī)進行邏輯檢錯，經(jīng)K-S檢驗確認具備方差齊性的計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，計數(shù)資料用例（%）表示，行χ2檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1.BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨診斷結果（表1）

表1 90例疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨診斷結果（例）

經(jīng)手術或病理活檢結果顯示，90例疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者中，惡性62例，良性28例。經(jīng)BRAF V600E基因突變檢測診斷結果顯示，惡性51例，良性39例；經(jīng)US-FNAB結果顯示，惡性50例，良性40例。

2.BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB聯(lián)合診斷結果（表2）

表2 90例疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB聯(lián)合診斷結果（例）

經(jīng)BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB聯(lián)合診斷結果顯示，90例甲狀腺結節(jié)患者中，惡性61例，良性29例。

3.BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB診斷效能比較（表3）

表3 90例疑似惡性甲狀腺結節(jié)患者BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨及聯(lián)合診斷效能比較（%）

與BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB單獨診斷比較，聯(lián)合診斷靈敏度、準確度均較高，漏診率較低，差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）。

4.不同甲狀腺結節(jié)長徑患者BRAF V600E基因突變類型比較（表4）

表4 不同甲狀腺結節(jié)長徑患者BRAF V600E基因突變類型[例（%）]

經(jīng)手術或病理活檢結果顯示，90例甲狀腺結節(jié)患者中，長徑≤5 mm 20例、5～10 mm 48例、>10 mm 22例，不同甲狀腺結節(jié)長徑患者BRAF V600E基因突變類型比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

5.不同甲狀腺結節(jié)長徑患者US-FNAB分類比較（表5）

表5 不同甲狀腺結節(jié)長徑患者US-FNAB分類比較[例（%）]

經(jīng)US-FNAB檢查結果顯示，90例甲狀腺結節(jié)患者中Ⅱ類9例、Ⅲ類8例、Ⅳ類10例、Ⅴ類13例、Ⅵ類50例，不同甲狀腺結節(jié)長徑患者US-FNAB檢查Ⅲ類、Ⅵ類差異均有統(tǒng)計學意義，其中Ⅵ類更為顯著（均P<0.05）。

討 論

甲狀腺結節(jié)為不同病因引起的甲狀腺內部產生單一或多個組織結構病變的腫塊，隨著目前體檢人群數(shù)量不斷增加，甲狀腺結節(jié)檢出率隨之升高，因此早期明確甲狀腺結節(jié)性質、針對性制定干預方案至關重要［7-8］。

US-FNAB為目前臨床評估甲狀腺結節(jié)主要方案之一，可通過超聲儀器顯示屏實時觀察畫面，能將穿刺針沿預設好的路徑在甲狀腺結節(jié)內部多次抽吸取樣，有效降低穿刺標本非診斷率，具有簡便快捷、安全、微創(chuàng)等優(yōu)點［9-11］。本研究結果顯示，US-FNAB對甲狀腺結節(jié)惡性診斷靈敏度為77.42%（48/62），特異度為92.86%（26/28），準確度為82.22%（74/90），具有一定診斷價值。US-FNAB雖具有較高診斷準確率，但也存在一定局限性，抽取的組織細胞中無法完全代表病灶組織，可摻雜正常血液細胞，且部分病灶無法從細胞形態(tài)明確性質，因此單獨采用US-FNAB無法準確判定甲狀腺結節(jié)性質，可聯(lián)合其他方案進行評估［12-14］。

BRAF V600E基因為RAF基因家族之一，在細胞生長分裂、細胞分化及細胞增殖方面發(fā)揮重要作用，其所編碼的激酶存在于細胞質內，可有效誘導活化MAPK信號通路［15-16］。本研究結果顯示，BRAF V600E基因突變檢測聯(lián)合US-FNAB診斷靈敏度（95.08%）、準確度（94.38%）均顯著高于單獨診斷，可有效降低漏診率。報道顯示，BRAF V600E基因可通過突變導致BRAF蛋白激活，引起下游MEK蛋白磷酸化，最終導致MAPK信號持續(xù)激活，引起細胞過度增殖、分化及腫瘤形成［17-19］。國內學者研究表明，甲狀腺乳頭狀腫瘤中BRAF V600E基因突變陽性率可達58%～86%，而甲狀腺良性結節(jié)及正常組織中均未發(fā)現(xiàn)突變［20-21］。據(jù)此可進一步證實BRAF V600E基因突變檢測對甲狀腺結節(jié)性質的評估價值，提示臨床可通過BRAF V600E基因突變檢測聯(lián)合US-FNAB檢查對早期甲狀腺結節(jié)定性診斷。有研究表明，US-FNAB穿刺準確度與甲狀腺結節(jié)長徑可能存在一定聯(lián)系，穿刺長徑越小，超聲引導下定位取樣越困難［22-23］。張秋霞和張占超［24］以甲狀腺結節(jié)6 mm為標準，發(fā)現(xiàn)長徑<6 mm的US-FNAB穿刺不滿意度高達25.3%。本研究結果顯示，不同甲狀腺結節(jié)長徑患者BRAF V600E基因突變類型比較差異均無統(tǒng)計學意義，而US-FNAB檢查Ⅲ類、Ⅵ類存在差異，且Ⅵ類更為顯著，說明US-FNAB檢查對于甲狀腺惡性結節(jié)具有較高敏感度。

綜上所述，BRAF V600E基因突變檢測、US-FNAB檢查對于甲狀腺結節(jié)均具有較高診斷價值，臨床可通過聯(lián)合應用早期定性診斷，以制定相應干預方案。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明岳彩云：醞釀和設計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，撰寫文章，工作支持；田龍：醞釀和設計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，撰寫文章，統(tǒng)計分析