7 種藥食同源水提物對金黃色葡萄球菌的抑制作用

◎ 王 杰，樂靖雯，馬詩雅，田 浩

（河北東淼檢測科技股份有限公司，河北 保定 071000）

金黃色葡萄球菌是一種常見的革蘭氏陽性菌，也是常見的食源性致病菌，可通過污染乳制品、肉制品等蛋白質(zhì)或淀粉含量豐富的食品引發(fā)食物中毒，導(dǎo)致人體免疫力下降，還易引發(fā)人體局部化膿性感染、肺炎、心包炎等疾病，嚴(yán)重時甚至?xí)霈F(xiàn)敗血癥，威脅人體生命安全[1-2]。既是食品又是中藥材的物質(zhì)為“藥食同源物質(zhì)”[3]?！八幨惩础崩碚撁妊靠勺匪葜翍?zhàn)國時期，我國第一部中醫(yī)理論典籍《黃帝內(nèi)經(jīng)》奠定了“藥食同源”理論的基礎(chǔ)[4]。藥食同源物質(zhì)資源豐富，是我國居民日常保健食品的重要組成部分。藥食同源物質(zhì)食性強(qiáng)于藥性，性味多平和，具調(diào)養(yǎng)、康復(fù)、保健作用，可應(yīng)用于藥酒、藥粥、煲湯、飲茶，極大地滿足了人們?nèi)粘Ｉ钪蓄A(yù)防疾病和保健的需求[5]。本文通過研究藥食同源物質(zhì)對金黃色葡萄球菌的抑制作用，為控制食品中金黃色葡萄球菌的污染提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

蒲公英、胖大海、金銀花、香櫞、甘草、決明子和川貝母，購于北京同仁堂藥房；紙片（110705062）：直徑6 mm、厚度7 nm 的空白藥敏紙片，購于石家莊賽迪生物科技有限公司；一次性無菌接種環(huán)（編號：GT18001-10）、一次性無菌接種針（GT18001-2）、一次性無菌培養(yǎng)皿（直徑90 mm），購于北京陸橋技術(shù)股份有限公司；標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC 6538，購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，本研究采用三代生長期標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.2 儀器與試劑

TD10002C 電子天平，天津天馬衡基儀器有限公司；GI54DWS 高壓滅菌器，致微（廈門）儀器有限公司；H22-X3 電陶爐，九陽股份有限公司；BSC-1600 ⅡA2生物安全柜，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；單道可調(diào)式移液器（100 ～1 000 μL），大龍共創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司；LRH-250 型生化培養(yǎng)箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司。

Mueller-Hinton 瓊脂（MHA）（編號：220719）、營養(yǎng)瓊脂（編號：220308）、營養(yǎng)肉湯（編號：201224），北京陸橋技術(shù)股份有限公司；氯化鈉（編號：180502），天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制備

分別稱取所選的7 種中藥材10 g，加入400 mL蒸餾水浸泡30 min，煮沸后再用文火煎煮30 min，用12 層紗布過濾后，加入200 mL 蒸餾水煮沸，用文火再煎煮25 min，過濾藥液[6]。將兩次煎煮的藥液合并后，加熱對其進(jìn)行濃縮，得到濃度C0：0.25 g·mL-1、C1：0.50 g·mL-1、C2：0.85 g·mL-1和C3：1.00 g·mL-1的 中草藥提取物。

1.3.2 水提物對金黃色葡萄球菌的抑制作用研究

按照WHO 推薦的K-B 法檢測金黃色葡萄球菌對7 種藥食同源水提物的敏感性。

（1）菌懸液的制備。用75%酒精擦拭裝有菌株的安瓿瓶后，用手掰斷瓶子的上半部分。取0.5 mL 無菌水注入菌株凍干管中，混勻為菌懸液，吸取0.2 mL菌懸液，打入NA 平板，將其涂布均勻，37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取營養(yǎng)瓊脂上單個菌落至另一營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行菌種復(fù)蘇。最后挑取單菌落到液體培養(yǎng)基中，于36 ℃恒溫培養(yǎng)24 h。制備金黃色葡萄球菌的菌懸液，并將此菌懸液的濃度調(diào)成0.5 麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙骸?/p>

（2）藥敏試驗。將無菌棉拭子浸入金黃色葡萄球菌菌懸液中，取出后將棉拭子與試管壁間進(jìn)行擠壓，將過多的菌懸液棄去，把棉拭子中的菌懸液涂布到MHA 瓊脂平板中（操作過程中對平板進(jìn)行6 次旋轉(zhuǎn)，每次轉(zhuǎn)60°，后續(xù)順著平板邊緣繞兩圈），確保菌懸液涂布的均勻性，室溫靜置3 ～5 min，至MHA 平板上沒有水分。將空白藥敏紙片分別置于不同濃度的中藥提取物中，充分吸收藥液后，轉(zhuǎn)移至MHA 瓊脂平板上，每個平板均勻放置3 個藥敏紙片。以無菌水浸濕的藥敏紙片作為空白對照，將平板放入36 ℃生化培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑并記錄數(shù)據(jù)。每種中藥水提物做9 組，每組做3 個平行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 進(jìn)行處理與分析，結(jié)果用（±s）的形式表述。

2 結(jié)果與分析

7 種藥食同源物質(zhì)水提物的抑菌效果見圖1。蒲公英提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、10.41 mm、17.94 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、1.12、0.97。金銀花提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為9.66 mm、12.66 mm、18.09 mm、19.66 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.52、0.72、0.71、0.79。甘草提取物中，C0、C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為9.14 mm、12.18 mm、14.24 mm、18.59 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.87、0.75、0.81、0.94。決明子提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、9.96 mm、12.75 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、0.78、2.70。胖大海提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、8.48 mm、11.09 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、0.59、1.28。香櫞提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、8.53 mm、12.44 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、1.07、1.21。川貝母提取物中，C1、C2和C3抑菌圈直徑的平均值分別為6.02 mm、6.03 mm、8.92 mm，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、0.02、0.52。

圖1 7 種食藥同源水提物對金黃色葡萄球菌的抑制效果圖

由圖1、表1 可知，7 種藥食同源物質(zhì)的水提物的抑菌效果均隨著濃度的增加而增強(qiáng)，蒲公英提取物中，C3濃度的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好，C1抑菌圈直徑與空白藥敏紙片相同，沒有明顯抑制作用。金銀花提取物濃度C2和C3抑菌圈直徑相近，抑菌效果相差不明顯，C0的抑菌圈直徑最小，抑菌效果較差。甘草提取物濃度C3的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好；C2、C1和C0的抑菌圈直徑依次減弱，抑菌效果依次減弱，但均對金黃色葡萄球菌生長和繁殖有一定的抑制作用。決明子濃度C3的抑菌圈直徑最大，抑菌效果最好，空白藥敏紙片抑菌圈直徑為6 mm，濃度C1抑菌圈直徑與其幾乎相同，表明決明子C1提取物對金黃色葡萄球菌沒有明顯抑制作用。濃度為C3的胖大海提取物的抑菌圈直徑最大，對金黃色葡萄球菌的抑菌作用最明顯；濃度為C1的胖大海提取物與空白藥敏紙片抑菌圈直徑相同，證明其對金黃色葡萄球菌幾乎沒有抑制作用。濃度為C2和濃度為C3的香櫞提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用，濃度越大抑菌圈直徑越大。濃度為C3的川貝母提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用，濃度為C2和濃度為C1的川貝母提取物對金黃色葡萄球菌幾乎沒有抑制作用。

表1 藥食同源水提取物抑菌圈直徑表（濃度：1.00 g·mL-1）

本次試驗結(jié)果表明，蒲公英、金銀花、甘草、決明子、胖大海、香櫞和川貝母7 種中藥提取物對金黃色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌效果最好的是蒲公英、金銀花和甘草。中藥提取物濃度越高，試驗的抑菌圈越大，抑菌效果越好。與對照組相比，蒲公英、金銀花、甘草、決明子、胖大海、香櫞和川貝母7 種中藥的水提取物對金黃色葡萄球菌均有顯著抑制作用。

3 討論

我國中草藥資源豐富，分布廣泛，價格低廉。文獻(xiàn)記載蒲公英具有廣譜抑菌作用、抗炎作用、抗氧化作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、螺旋體、真菌等多種病原體微生物均有不同程度的抑制作用[7]。孟然等[8]研究表明，蒲公英中含有能抑制金黃色葡萄球菌的有效成分，蒲公英水提物、醇提物均有抑制作用。綠原酸是金銀花中的主要抗菌成分，其溶于水，金銀花水提物能起到一定的抗炎作用[9]。甘草中一些活性成分具有較好的抗菌消炎作用，被普遍應(yīng)用于食品行業(yè)中。決明子作為一種藥食同源物質(zhì)，常被添加到保健食品中，有潤腸通便、清肝明目等功效。

本文研究的7 種藥食同源水提物對金黃色葡萄球引發(fā)的相關(guān)疾病都有預(yù)防和輔助治療的作用。近年來，隨著抗生素使用后不良反應(yīng)的產(chǎn)生和細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)，新型抗菌藥物的研究已成為熱門研究課題。天然藥食同源物質(zhì)一般無抗藥性或抗藥性較小，對人體作用多以提高免疫、增強(qiáng)體質(zhì)為主，與使用抗生素相比，從中草藥中篩選抑菌藥物，顯然是一種快速、安全、有效的方法[10-11]。藥食同源物質(zhì)良好的抑菌作用使其成為我國新型抗菌藥物的重點(diǎn)研究對象，為研究和開發(fā)抗耐藥菌的藥物開辟了新途徑。