MPT 與MGT 在ABO 新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的價值

周玉航 江濤 黃玉林

ABO 新生兒溶血病為母子ABO 血型不合而引起的新生兒溶血病,我國發(fā)生的新生兒溶血病多數(shù)屬于ABO 溶血［1］。在懷孕或分娩時有為數(shù)不等的胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體,母嬰血型不合,母親體內(nèi)缺乏胎兒紅細(xì)胞所具有的抗原可導(dǎo)致相應(yīng)抗體生成,免疫抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)并引起溶血［2］。現(xiàn)階段,臨床治療ABO 新生兒溶血病的方法主要為輸血治療,但輸血安全問題是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重點,輸血過程需最大限度的保證安全,因此輸血前采取有效的檢驗是非常重要的［3］。MPT 利用凝聚胺本身正電荷的特點通過與紅細(xì)胞結(jié)合使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝聚,通過凝聚胺正電荷使紅細(xì)胞分散,但特異性的抗原抗體散開較困難,因此耗費(fèi)的檢測時間較長,且假陽性率和漏檢率較高。MGT 不依賴于顯微鏡,結(jié)果較為直觀,其操作簡單,用時較短,在輸血前血清篩查工作中應(yīng)用較普遍。為進(jìn)一步驗證MPT 與MGT 的準(zhǔn)確性和敏感性,本研究擬通過臨床對照探討MPT 與MGT 在ABO 新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的價值,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2019 年1 月～2020 年12 月在本院接受治療的ABO 新生兒溶血病患兒50 例作為研究對象,其中男23 例,女27 例；年齡1～4 d,平均年齡(2.22±0.62)d；體質(zhì)量2～4 kg,平均體質(zhì)量(2.89±0.46)kg。本研究方案經(jīng)患兒家屬同意并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合《實用新生兒學(xué)》［4］中ABO 新生兒溶血病相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)者；②血清膽紅素水平升高,母體血型為O 型,患兒RHD 血型檢測陽性。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①有藥物過敏史和精神疾病家族史的患兒；②有心臟病家族史的患兒；③患兒家屬針對本項研究存在爭議者等；④參與本次研究前接受過相關(guān)治療的患兒；⑤合并血液疾病或者先天性心臟病等其他先天性疾病的患兒；⑥妊娠期母體合并糖尿病或者高血壓等嚴(yán)重并發(fā)癥。

1.3 方法 分別采用MPT 與MGT 對患兒的血液標(biāo)本進(jìn)行輸血前檢驗。

所用儀器設(shè)備包括微柱凝膠試劑卡(長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)、免疫微柱孵育器、卡式離心機(jī)(美國Diana 有限公司)、凝聚胺試劑(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。所有操作過程均嚴(yán)格參考《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中關(guān)于交叉配血的相關(guān)試驗流程以及試劑說明書進(jìn)行。

標(biāo)本制作過程如下：采集患兒血液標(biāo)本進(jìn)行離心(離心時間：10 min),將紅細(xì)胞與血清分開并對分離出的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌,采用生理鹽水進(jìn)行反復(fù)洗滌,共計3 次。抽出一部分洗滌好的紅細(xì)胞并制作細(xì)胞懸液,抽取紅細(xì)胞懸液1 ml,并將1 ml 生理鹽水加入其中,離心時間為3 min,水浴時間為7 min,將水浴溫度調(diào)節(jié)為50℃并制作放散液標(biāo)本。

MPT：采集患兒的血液標(biāo)本,選擇血型相同的紅細(xì)胞配血操作,向紅細(xì)胞液中加入制作好的放散液標(biāo)本,取低離子介質(zhì)0.7 ml并將2滴凝聚胺溶液加入其中,離心10 s,輕輕搖晃,若紅細(xì)胞未出現(xiàn)聚集需進(jìn)行二次操作,保證紅細(xì)胞凝集,加入2 滴重懸液搖晃均勻,對最終結(jié)果進(jìn)行判斷。

MGT：采用微柱凝膠技術(shù)實施交叉配血,抽取患兒血液標(biāo)本并進(jìn)行標(biāo)記,應(yīng)用微柱凝膠試劑卡,將患兒血液標(biāo)本加入至試管內(nèi),離心5 min 后觀察實驗結(jié)果。

1.4 觀察指標(biāo) ①分析ABO 新生兒溶血病患兒與母體血型鑒定結(jié)果；②分析患兒血清和放散液交叉配血與直抗類型情況；③分析放散液MPT 和MGT 配血結(jié)果；④分析血清MPT 和MGT 配血結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。通過Kappa 檢驗一致性,通過K 值驗證一致性強(qiáng)弱,K＜0 表明一致性極差,0＜K≤0.2 表明一致性差,0.20＜K≤0.4表明一致性較差,0.40＜K≤0.6 表明一致性較高,0.60＜K≤0.8 表明一致性高,0.80＜K≤1.0 表明一致性極高。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ABO 新生兒溶血病患兒與母體血型鑒定結(jié)果分析 母體血型檢測結(jié)果均為O 型血,共計27 例患兒血型為A 型、占比為54%,共計23 例患兒血型為B 型、占比為46%。

2.2 患兒血清和放散液交叉配血與直抗類型情況分析50 例患兒血清交叉配血252 次,血清MGT 檢測陽性130 次(51.59%),放散液MGT 檢測陽性92 次(36.51%),血清MPT 檢測陽性26 次(10.32%),放散液MPT 檢測陽性27 次(10.71%)。兩種方法檢測陽性率比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。見表1。

表1 血清、放散液交叉配血與直抗類型情況分析(次)

2.3 放散液MPT 和MGT 配血結(jié)果分析 放散液MPT檢測結(jié)果為陽性時MGT 均為陽性,Kappa 一致性檢驗結(jié)果表明MPT 和MGT 的放散液交叉配血結(jié)果一致性較差(K=0.201,P＞0.05)。見表2。

表2 放散液MPT 和MGT 配血結(jié)果分析(次)

2.4 血清MPT 和MGT 配血結(jié)果分析 血清MPT 檢測結(jié)果為陽性時MGT 檢測結(jié)果均為陽性,Kappa 一致性檢驗結(jié)果表明MPT 和MGT 的血清交叉配血結(jié)果一致性較差(K=0.303,P＞0.05)。見表3。

表3 血清MPT 和MGT 配血結(jié)果分析(次)

3 討論

母體內(nèi)血型抗體與胎兒血型抗原不匹配且通過胎盤進(jìn)入至胎兒體內(nèi)并誘發(fā)同族免疫性溶血的病癥即為新生兒溶血病,其中,以ABO 血型不合發(fā)生率最高,臨床癥狀表現(xiàn)為貧血、黃疸以及膽紅素腦病等。

從遺傳學(xué)角度來說,新生兒溶血病主要由于胎兒紅細(xì)胞具有遺傳自父親的抗原,而母親紅細(xì)胞缺乏,此種紅細(xì)胞血型抗原于胎兒時期進(jìn)入至母體內(nèi)并對母體產(chǎn)生刺激,使得體內(nèi)生成相應(yīng)的血型抗體,此類血型抗體中的免疫球蛋白(Ig)抗體進(jìn)入至胎兒體內(nèi)并產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng),導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞受到破壞,繼而引發(fā)新生兒溶血?。?］。因此一旦發(fā)現(xiàn)新生兒有溶血病傾向,需立刻進(jìn)行早期評估,以改善患兒預(yù)后。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)溶血病患兒存在母源溶血性抗體,部分抗體進(jìn)入至患兒血液內(nèi),其他抗體可于紅細(xì)胞表面附著并可與紅細(xì)胞隨時結(jié)合,因此對于新生兒溶血病進(jìn)行鑒別診斷時,常用的方法就是血清游離抗體試驗、紅細(xì)胞抗體釋放試驗等［6］。

由于體內(nèi)紅細(xì)胞受損,因此患兒多伴隨貧血現(xiàn)象,病情嚴(yán)重者需要通過輸注血液的方式促進(jìn)臨床癥狀緩解。新生兒免疫系統(tǒng)尚處于發(fā)育階段,體內(nèi)不存在抗A 及抗B 等對應(yīng)抗體,而且與成人相比,新生兒紅細(xì)胞表面血型抗原表達(dá)強(qiáng)度相對更低,因此,對新生兒進(jìn)行血型鑒定及進(jìn)行輸血等治療時必須與成人相區(qū)別?；純阂瞬捎孟嗳菪暂斞瓌t,而不宜選擇同血型輸血,進(jìn)行交叉配血時必須對新生兒血液中是否存在抗A 及抗B 等進(jìn)行篩查,但是不同檢測方法檢測結(jié)果差別較大。在臨床治療時,需要為患兒補(bǔ)充血容量,且輸血的頻率較高,若輸血過程操作不當(dāng),會導(dǎo)致不良輸血反應(yīng),增加治療風(fēng)險［7］。因此為了減輕輸血反應(yīng),需要對患兒血型進(jìn)行嚴(yán)格鑒定及配對,在實施交叉配血檢驗時需進(jìn)行紅細(xì)胞放散液標(biāo)本及血清標(biāo)本采集。臨床常使用的檢驗方法有鹽水法和酶法,但鹽水法的準(zhǔn)確性較低,容易出現(xiàn)漏診,酶法的驗證時間較長［8］。

本研究結(jié)果顯示,50 例患兒血清交叉配血252 次,血清和放散液的MGT 檢測陽性率51.59%、36.51%均高于MPT 的10.32%、10.71%,MPT 和MGT 的放散液交叉配血結(jié)果和血清交叉配血結(jié)果一致性較差,表明MGT 在ABO 新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的敏感度和準(zhǔn)確度均較高,利于保障輸血安全。分析其原因,MPT 主要是通過凝聚胺自帶的正電荷結(jié)合紅細(xì)胞,消減紅細(xì)胞表層的電荷數(shù),促進(jìn)紅細(xì)胞凝聚,使不具備特性的凝集紅細(xì)胞得到有效散射,但具備特異性抗原抗體凝集功能的紅細(xì)胞分開難度較大,因此采用MPT 需要較長的反應(yīng)時間,容易出現(xiàn)假陽性問題,增加漏檢發(fā)生率［9］。

MGT 是一種具有較高敏感度和特異性的血型血清學(xué)技術(shù),具有操作簡單、快捷且準(zhǔn)確度高等優(yōu)點,在血清學(xué)篩查中有著廣泛的應(yīng)用。該技術(shù)將與檢測條件相符的稀釋液配成凝膠并灌注微管柱,通過凝膠顆粒的分子篩作用于紅細(xì)胞離心時使單個紅細(xì)胞獲得截留,進(jìn)而可獲取凝集反應(yīng)結(jié)果［10］。而且該檢測技術(shù)對顯微鏡不存在依賴性,能夠直觀獲取檢測結(jié)果,經(jīng)離心處理后,沉入凝膠底部為陰性,浮在上層和中間為陽性,兩種結(jié)果經(jīng)結(jié)合,進(jìn)一步提高了MGT 的準(zhǔn)確性以及穩(wěn)定性,能夠為輸血治療的安全性提供重要保障［11,12］。另外MGT 結(jié)合了凝聚胺法和鹽水試管法的優(yōu)勢,有助于不規(guī)則抗體的鑒別,同時提高了交叉配血的準(zhǔn)確性［13］。但是MGT 存在其固有的缺陷,在實際應(yīng)用過程中難以針對紅細(xì)胞中是否存在不完全抗體作出準(zhǔn)確判斷,而且檢測用時相對較長,在一定程度上導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受限［14］。除此之外,患兒紅細(xì)胞抗原表達(dá)強(qiáng)度存在一定的差異性,而且機(jī)體代謝變化存在個體性差別,也會干擾和影響交叉配血結(jié)果的準(zhǔn)確性［15］。

本研究中兩種技術(shù)的檢測結(jié)果均為陽性,且兩種檢測結(jié)果的相似度整體較差,也在一定程度上說明了MPT 在敏感度方面存在一定缺陷。從本次研究結(jié)果來看,紅細(xì)胞抗體具有較高的陽性率,與其他學(xué)者的研究結(jié)果一致,同時也表明了紅細(xì)胞抗體釋放試驗?zāi)軌蚴笰BO 新生兒溶血病問題得到有效解決,但在實際應(yīng)用中應(yīng)結(jié)合多種檢測結(jié)果,提高診斷的可信度。

綜上所述,MGT 在ABO 新生兒溶血病患兒輸血前檢驗中的敏感度和準(zhǔn)確度均較高,利于保障輸血安全,值得臨床推廣與應(yīng)用,在實際應(yīng)用過程中需要對患兒的生理情況及免疫學(xué)特點進(jìn)行綜合考慮,聯(lián)合多種方法排查抗原抗體,提升輸血過程中的安全性。