大麥茶中總黃酮提取方法的對比研究

梁喜玲，申艷華，劉 忭，康 婕

（1. 陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，陜西 西安 710048；2. 潞安職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 長治 046204）

0 引言

大麥，別名牟麥、飯麥、赤膊麥，營養(yǎng)成分較為豐富，與小麥近似，但膳食纖維含量較高。禾本科，也是我國主要種植物之一，在我國的種植資源十分豐富, 大麥的用途相當(dāng)廣泛，可作為糧食工業(yè)和食品工業(yè)的重要原料[1]，然而相對于其他國家，我國對大麥的研究還十分薄弱，現(xiàn)代研究表明，大麥含有大麥芽堿、黃酮、多糖、多酚類化合物等多種活性成分[1]。大麥中黃酮類化合物的開發(fā)和利用，也日益引起廣泛的關(guān)注。黃酮類化合物，是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分[2]，因其具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)而對人體產(chǎn)生重要的生理、生化作用，有較明顯的保健功能。因此，黃酮類化合物在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用價值，其開發(fā)和利用也日益引起廣泛關(guān)注。

有關(guān)大麥茶中黃酮類物質(zhì)的相關(guān)研究報道相對較少，季晨忻等人[3]報道過關(guān)于大麥茶總黃酮提取的最佳條件。研究不同的提取方法[4]中大麥總黃酮提取量的差異，確定適合于提取大麥總黃酮的可行性方法，為其開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 試劑與儀器

1.1 樣本、試劑及儀器與設(shè)備

樣本為安徽亳州地區(qū)產(chǎn)的大麥，購自當(dāng)?shù)厥袌觯Q取200 g 粉碎，過60 目篩得到測試試樣；試驗方法中所涉及到的常規(guī)試劑，均為分析純。

電熱恒溫水浴鍋、ATL-224 型電子天平、T9CS 型紫外-可見分光光度計、KQ-500E 型超聲波振蕩器、各類玻璃儀器等。

1.2 樣本的提取方法

1.2.1 乙醇回流法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入70%的乙醇溶液30 mL，在80 ℃下回流提取總黃酮1 h，減壓抽濾。重復(fù)抽提3 次，將濾液合并蒸餾濃縮，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液定容于25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.2 甲醇超聲波提取法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液30 mL，在超聲波振蕩器中振搖1 h 減壓抽濾。重復(fù)抽提3 次，濾液合并蒸餾濃縮，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液定容于25 mL 的容量瓶中，得到提取液。

1.2.3 酸堿溶液提取法

稱取1.00 g 大麥茶粉加入100 mL 蒸餾水煮至沸騰，邊攪拌邊緩慢滴加氫氧化鈣水溶液調(diào)節(jié)體系的pH 值為8～9，微沸0.5 h 左右，趁熱抽濾。濾渣重復(fù)上述操作2 次，合并濾液，在65±5 ℃下用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 值為5.0，靜置24 h 后過濾。將濾渣和濾紙一同放入燒杯中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液30 mL 靜置3 h，抽濾，將濾液濃縮，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.4 熱水提取法

稱取樣本1.00 g 于玻璃容器中，加入100 mL 蒸餾水，在95 ℃下用水浴恒溫振蕩器浸提6 h，抽濾，加熱蒸餾濃縮，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.3 加標(biāo)回收率試驗

以酸堿溶液提取法中的樣本為對象研究加標(biāo)回收率試驗，在已測得總黃酮含量的基礎(chǔ)上，加入一定體積的蘆丁對照品儲備液（質(zhì)量濃度為1 mg/mL），在相同的條件下同時測定樣本，加標(biāo)樣本，將測定值與添加量進(jìn)行比較，考查加標(biāo)回收率的情況。

1.4 精密度試驗

以酸堿溶液提取法中的總黃酮含量作為研究對象，考查精密度試驗。4 組總黃酮抽提液在相同的條件下，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測試其含量。

2 試驗方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制

稱取蘆丁對照品50 mg 置于50 mL 容量瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液振搖溶解并定容，作為對照品儲備液。精密吸取10 mL 上述對照品儲備液，置于50 mL 容量瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，振搖溶解，定容至刻度，作為蘆丁對照品使用液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別移取一定體積的使用溶液（0，1，2，3，4，5，6 mL） 置于25 mL 帶刻度的玻璃比色管中，加水定容至6 mL，各加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的亞硝酸鈉溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，然后加入氫氧化鈉溶液10 mL，加水定容搖勻靜置15 min。參照國標(biāo)方法，將紫外-可見分光光度計的波長設(shè)定為510 nm 測定吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)為質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)為吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（見圖1），所擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為Y= 0.325 8X-0.003 6（R2=0.999），線性良好，可以采用。

蘆丁溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖1。

圖1 蘆丁溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 樣本的測定

每種抽提方法平行做4 組，移取2 mL 提取液，完全參照標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備方法操作，然后測定吸光度，根據(jù)國標(biāo)中的公式計算總黃酮的含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同提取方法下大麥茶樣本總黃酮含量的測定結(jié)果

采用4 種不同的提取方法對大麥茶樣本中總黃酮的含量進(jìn)行了測定，每種方法平行提取4 組，結(jié)果保留至小數(shù)點后2 位。

不同提取方法中大麥茶總黃酮提取含量見表1。

表1 不同提取方法中大麥茶總黃酮提取含量/ %

由表1 可知，不同提取方法提取大麥茶總黃酮含量排序為酸堿溶液提取法＞乙醇回流法＞甲醇超聲波提取法＞熱水浸提法；RSD 值均較小，表明重復(fù)性較好。

3.2 加標(biāo)回收驗證試驗結(jié)果

加標(biāo)回收率試驗見表2。

表2 加標(biāo)回收率試驗

在表2 中，是酸堿溶液提取法中的第1 組樣本的加標(biāo)回收試驗結(jié)果。由表2 可知，樣本的加標(biāo)回收率較高，回收率結(jié)果為92.11%～96.01%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.98%，值相對較小，由加標(biāo)回收率試驗結(jié)果可看出，該方法可靠性和準(zhǔn)確度均較高。

3.3 精密度試驗結(jié)果

精密度試驗結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

由表3 可知，對酸堿溶液提取法中的樣本測定4 次平行試驗的結(jié)果進(jìn)行分析，總黃酮含量平均值為4.59 g/100 g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.48%，在國標(biāo)規(guī)定的范圍內(nèi)，表明該方法的精密度較好，可以滿足檢測要求。

4 結(jié)論

通過對市售大麥茶中總黃酮的4 種提取方法的含量進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)乙醇回流法準(zhǔn)確度與精密度較高，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可信，為最佳提取方法，平均含量為4.48 g/100 g，該操作方法簡單、提取含量高、耗時較短、溶劑乙醇無毒無害，對于總黃酮的提取具有實際參考價值。結(jié)果表明，大麥茶中總黃酮含量較為可觀，后期可以對乙醇回流提取法做進(jìn)一步的優(yōu)化，大麥總黃酮是一種值得去開發(fā)利用的植物資源。