冬小包腳菇適栽原種配方的篩選※

●黃 靜 李 鵬 熊 雪 和耀威 向 準

（貴州省生物研究所 貴州 貴陽 550009）

冬小包腳菇（Volvariella brumalisHe sp?nav?）又稱低溫草菇、雞絲菌和谷樁菌，隸屬于擔子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目（Agaricales）、光柄菇科（Pluteaceae），包腳菇屬（Volvariella）[1]，是何紹昌先生在1987 年發(fā)現(xiàn)的新種[2]。全國僅貴州有分布，也是目前包腳菇屬中唯一一個低溫出菇種類，出菇溫度4～15℃，一般發(fā)生于每年的11月至翌年4 月，多發(fā)現(xiàn)于水稻收割后換茬種植小麥、豌豆、蠶豆、馬鈴薯、油菜或混種作物的地里[3]。冬小包腳菇對低溫環(huán)境具有較強的抗性和耐寒性，填補了該屬可食用種類均為中高溫型的缺陷[4]，對彌補傳統(tǒng)草菇在地域、季節(jié)上的空缺具有重要意義[5-9]。該菇肉質(zhì)鮮美可口，含有豐富的氨基酸和稀有的礦物元素，具有重要的經(jīng)濟價值和科研價值[10-12]。近年來，由于野生冬小包腳菇為土生菌，多數(shù)子實體帶有細菌等微生物，菌絲萌發(fā)慢，導致菌種分離難度大，因此多研究在野外生境[3，12]、形態(tài)特征[13]、營養(yǎng)成分[10]和菌種分離鑒定[14]等方面，在菌種生產(chǎn)和栽培上基礎(chǔ)薄弱，代麗華利用冬小包腳菇的生長習性，在小麥、馬鈴薯等種植地里套種改善土壤結(jié)構(gòu)和提高土壤養(yǎng)分，促進菌物和農(nóng)作物共同生長，增加農(nóng)業(yè)生產(chǎn)附加值的仿生態(tài)栽培模式[15]。因此，本試驗選擇了9 種主料以冬小包腳菇菌絲培養(yǎng)特征對其原種培養(yǎng)基進行了篩選，旨在解決冬小包腳菇?jīng)]有適宜的原種配方、菌絲弱、吃料慢、制種繁瑣且周期長、生物轉(zhuǎn)化率低等問題，為冬小包腳菇生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種的產(chǎn)業(yè)化、標準化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和樣品供試冬小包腳菇菌株A4 為野生冬小包腳菇子實體分離而來，現(xiàn)保藏于貴州省生物研究所。

主料：稻草、棉籽殼、玉米芯、木屑、椰磚、麥粒、巨菌草、麥稈、玉米稈。

1.1.2 培養(yǎng)基活化培養(yǎng)基[14]：馬鈴薯（去皮）200 g，稻草40 g（剪成2～3 cm 的段，沸水30 min），蔗 糖10 g， 麥 麩10 g， 磷 酸 二 氫 鉀0?5 g，KH2PO40?5 g，MgSO4·7H2O 0?5 g，牛 肉 膏2 g，維生素B110 mg，瓊脂粉20 g，去離子水1000 mL，pH 8。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：麥麩10%，復合肥1%，石膏1%，石灰3%，含水量60%，pH 8～9。

1.2 方法

1.2.1 菌種活化在無菌環(huán)境下將試管母種接種到PDA 培養(yǎng)皿上，活化A4 菌株30 個培養(yǎng)皿，15℃條件下暗光培養(yǎng)20 d 備用。

1.2.2 初篩培養(yǎng)基的制備分別稱取9 種主料，其他輔料成分不變，等量分裝于350 mL 的原種瓶（組培瓶）中，壓實，置于1×105Pa、121℃下高壓蒸汽滅菌120 min，冷卻至室溫備用。

1.2.3 接種培養(yǎng)將滅菌后的原種瓶置于無菌室冷卻至20℃以下接種。用8 mm 的打孔器沿菌落邊緣打圓片放置原種瓶中間，每瓶接種1 片，接種后于15℃下恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。每個原種配方處理18 瓶，分3 次重復，每個重復6 瓶?？刂婆囵B(yǎng)室二氧化碳濃度不超過3‰。觀察記錄菌絲長勢、菌絲顏色。

1.2.4 菌絲生長速率測定每5 d 測量并記錄冬小包腳菇菌絲生長情況，菌絲長勢用“+”號表示，“+”越多，表示菌絲長勢越強、密度越大、均勻度越好。菌絲生長速度計算公式：

菌絲豎面生長速度=菌絲豎面高度/豎面滿瓶時間。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析試驗所得數(shù)據(jù)利用SPSS 軟件分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同主料對冬小包腳菇菌絲生長的影響

不同主料冬小包腳菇菌絲生長速度，見表1。

表1 不同主料冬小包腳菇菌絲生長速度

由表1 可知，在9 種主料培養(yǎng)基上，冬小包腳菇菌絲都能很好的生長，菌絲長勢及菌絲生長速率差異顯著（P＜0?05）。以木屑為主料時，菌絲生長速率最快，日均生長速率為0?29 cm，平均35 d 長滿瓶底，40 d 左右開始有菌核形成，無色素分泌；以麥粒為主料時，菌絲發(fā)菌慢，日均生長速率為0?21 cm，平均48 d 長滿瓶底，有黃色色素分泌，無菌核形成，但菌絲長勢最濃密、齊整，呈灰白色粗壯；稻草、玉米芯、麥稈、椰磚或玉米稈為主料時，菌絲長速稍次之，菌絲發(fā)菌時間幾乎一致，日均生長速率在0?24 cm 左右，平均40 d 長滿，其中以稻草、玉米桿或椰磚為主料時，無色素分泌，玉米稈或麥稈為主料時，有色素分泌；棉籽殼或巨菌草為主料時，菌絲長勢最次，均有色素分泌。

2.2 正交優(yōu)化實驗

通過不同主料對冬小包腳菇菌絲生長情況的分析，以應用型廣泛、成本節(jié)約和透氣性等原則選擇菌絲長速最優(yōu)和菌絲長勢粗壯、濃密的木屑和麥粒兩種主料組合，作兩因素正交分析實驗，設(shè)置4 個水平，共16 個組合（表2）。由表2 可知，不同組合配比對冬小包腳菇菌絲生長速率存在顯著性差異（P＜0?05），且麥粒對冬小包腳菇的菌絲生長沒有顯著性差異，木屑對冬小包腳菇的菌絲生長是呈顯著性差異，因此決定菌絲生長的主要因素是木屑（表3）。由此分析得出，適合冬小包腳菇菌絲培養(yǎng)的最佳配比組合為木屑、麥粒配比為70%和13%（按配方百分比折算為木屑、麥粒配比為79%和17%），菌絲生長40 d 長滿，且伴隨有菌核形成無色素的分泌。

表2 不同組合配比冬小包腳菇菌絲生長速度

表3 冬小包腳菇正交試驗方差分析表

3 討論與結(jié)論

通過木屑、玉米稈等9 種主料對冬小包腳菇菌絲生長的試驗結(jié)果表明，隨著主料的不同，菌絲發(fā)菌時間不同，長勢差異較大，長滿時間、有無分泌色素、菌絲粗壯等不一致；添加木屑為主料時，菌絲發(fā)菌快，無色素分泌，菌絲發(fā)白粗壯齊整，日均生長速率為0?29 cm，平均35 d 長滿瓶底，40 d 左右開始有菌核形成；添加麥粒為主料時，菌絲雖發(fā)菌時間慢，有黃色素分泌，但菌絲密集且粗壯，日均生長速率為0?21 cm，平均48 d 長滿瓶底；因此選擇木屑和麥粒，利用2 因素4 水平正交試驗優(yōu)化設(shè)計16 個配比組合，經(jīng)驗證分析，菌絲的長勢與木屑比例呈顯著相關(guān)，與麥粒比例無顯著相關(guān)；隨著木屑比例過大，會導致菌絲生長緩慢，菌絲纖細透明，菌核形成時間晚；麥粒比例過大時，培養(yǎng)基透氣性差，菌絲長勢緩慢，有黃色素分泌且易老化形成厚菌皮致使后期不能快速長滿瓶底等問題。因此適當添加木屑和麥粒時，可改善營養(yǎng)和物理通透性，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)得到充分降解利用，促進菌絲生長，也利于增強菌絲活性、縮短培養(yǎng)周期、促進菌核形成，減少色素分泌和降低污染率、延長菌種保藏期等[16-17]。結(jié)果得出木屑和麥粒的最優(yōu)配比為79%∶17%，再結(jié)合冬小包腳菇最佳碳氮比是30∶1[14]，最終確定冬小包腳菇最優(yōu)原種配方為木屑79%，麥粒17%，石灰3%，復合肥1%，含水量60%～65%，pH 8?0～9?0。該配方既可用于生產(chǎn)原種、栽培種，還可用于冬小包腳菇菌種保藏，不僅解決了傳統(tǒng)栽培菌種吃料慢、培養(yǎng)周期長、制種繁瑣、易老化等問題，還能為生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的的冬小包腳菇提供有力的保障，為冬小包腳菇良種繁育和示范推廣奠定基礎(chǔ)。