中藥提取物欖香烯治療原發(fā)性肝癌的研究進(jìn)展*

李 丹 楊 英 郝志曄

1.北京市大興區(qū)人民醫(yī)院急診科 (北京，100026) 2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院(南區(qū))

原發(fā)性肝癌(PHC)是指發(fā)生于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤，起病隱匿，早期癥狀不明顯，使得PHC臨床治療比較棘手[1]。最新流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，2020年P(guān)HC在中國(guó)常見(jiàn)新發(fā)癌癥中排名第5位，在我國(guó)有超過(guò)41萬(wàn)人新患PHC，有超過(guò)39萬(wàn)人死于PHC[2]。目前PHC常用治療手段包括手術(shù)治療、局部治療、放射治療、化療、分子靶向治療、中醫(yī)藥治療及免疫治療。但是由于PHC早期診斷困難，發(fā)展迅速，大部分患者就診時(shí)已是中晚期或出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致PHC預(yù)后相對(duì)較差。中醫(yī)將PHC歸屬于“積聚”“臌脹”“痞滿(mǎn)”“脅痛”等范疇。PHC的治療多以本虛、標(biāo)實(shí)立論，治則以“破血軟堅(jiān)”“活血化瘀”“行氣健脾”“清熱解毒”等藥物相互配伍抑殺癌毒，標(biāo)本兼治?！侗静菥V目》中記載，莪術(shù)有破血行氣，消腫止痛之功效，為抗腫瘤中藥制劑中常見(jiàn)輔助用藥。欖香烯來(lái)源于天然藥用植物溫莪術(shù)提取的有效活性成分，是我國(guó)自主研發(fā)的國(guó)家Ⅱ類(lèi)新藥。欖香烯臨床上已被廣泛用于多種惡性腫瘤綜合治療，本文對(duì)欖香烯治療PHC的基礎(chǔ)和臨床研究進(jìn)行綜述。

1 欖香烯治療原發(fā)性肝癌基礎(chǔ)研究

1.1 直接殺傷肝癌細(xì)胞，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡 欖香烯對(duì)多種癌細(xì)胞增殖具有顯著的抑制作用。李慧樂(lè)等[3]發(fā)現(xiàn)欖香烯能明顯抑制肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)，其作用機(jī)制與腫瘤組織Survivin mRNA表達(dá)水平較低，而Caspase-3蛋白、Caspase-3 mRNA表達(dá)水平升高相關(guān)。鄧德厚等[4]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯能抑制肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)作用與下調(diào)腫瘤阻滯TRAF6表達(dá)，上調(diào)Caspase-8基因表達(dá)相關(guān)，欖香烯誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡是其抗腫瘤主要作用機(jī)制之一。Wu等[5]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯通過(guò)下調(diào)LncRNAHOTAIR、SP1和PDK1表達(dá)來(lái)抑制PHC細(xì)胞的生長(zhǎng)。Li 等[6]研究發(fā)現(xiàn)，奧沙利鉑聯(lián)合欖香烯能顯著抑制肝細(xì)胞性肝癌(HCC)腫瘤的生長(zhǎng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯可以阻斷奧沙利鉑治療導(dǎo)致的CTR1減少，增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)奧沙利鉑的細(xì)胞攝取，協(xié)同增強(qiáng)抗PHC的作用。其研究證實(shí)，欖香烯抑制肝癌H22腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性，其作用機(jī)制是增強(qiáng)組蛋白H1在H22小鼠肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)來(lái)抑制H22腫瘤細(xì)胞。

1.2 阻滯細(xì)胞周期 王君鈺等[7]對(duì)比體外5-氟尿嘧啶與欖香烯對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)欖香烯作用36 h后折光率減弱，細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制，且與5-氟尿嘧啶作用呈現(xiàn)相似趨勢(shì)，表現(xiàn)為G0/G1期和G2/M期細(xì)胞比例升高，S期細(xì)胞比例下降。Wu等[8]研究表明，經(jīng)過(guò)不同濃度的欖香烯處理的人肝癌QGY7703細(xì)胞，使細(xì)胞處于S期，G1期細(xì)胞百分比下降，而S期細(xì)胞呈劑量依賴(lài)性增加。該研究提示，欖香烯能誘導(dǎo)QGY7703細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞周期，逆轉(zhuǎn)GSTP1基因甲基化。Gong等[9]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯以劑量和時(shí)間依賴(lài)性的方式顯著抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖。進(jìn)一步研究顯示，其作用機(jī)制與下調(diào)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ蛋白表達(dá)有關(guān)。欖香烯下調(diào)了HepG2細(xì)胞的α微管蛋白水平，表現(xiàn)出劑量依賴(lài)性。Dai等[10]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。欖香烯處理后，F(xiàn)as和FasL表達(dá)均明顯升高。

1.3 抑制肝癌細(xì)胞侵襲、遷移 Wnt配體/β-連環(huán)蛋白(Wnt/β-catenin)信號(hào)通路參與肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展全過(guò)程。從最初的肝損傷到炎癥、纖維化、肝硬化以及腫瘤發(fā)生發(fā)展均有參與。Wnt通路關(guān)閉狀態(tài)下，細(xì)胞間Wnt配體受WIF等拮抗劑影響處于非激活狀態(tài)，β-catenin以多蛋白復(fù)合物形式存在，而無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞核對(duì)靶基因的表達(dá)產(chǎn)生影響。Wnt通路開(kāi)啟狀態(tài)下，在PHC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，Wnt配體與細(xì)胞膜上蛋白結(jié)合，導(dǎo)致β-catenin水解被終止，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。葉興濤等[11]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯能明顯抑制肝癌HepG2細(xì)胞增殖，且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。經(jīng)過(guò)欖香烯處理后，Wnt/β-catenin信號(hào)通路活性明顯降低，表明欖香烯能抑制肝癌細(xì)胞增殖和遷移。HCC在有侵襲轉(zhuǎn)移情況下，金屬基質(zhì)蛋白酶在癌組織中表達(dá)明顯增高，可以通過(guò)檢測(cè)癌組織中金屬基質(zhì)蛋白酶的表達(dá)水平來(lái)判斷肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。李茹茹等[12]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯在體外能顯著抑制HepG2細(xì)胞遷移、侵襲和黏附，其作用機(jī)制與通過(guò)抑制NF-κB p65蛋白活化抑制金屬基質(zhì)蛋白酶-9(MMP-9)表達(dá)相關(guān)。該作用機(jī)制為其抑制人肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力主要作用途徑。PHC術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響PHC預(yù)后的主要因素，但是PHC細(xì)胞的侵襲和遷移機(jī)制比較復(fù)雜。毛雨秋[13]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯可有效地降低肝癌HepG2細(xì)胞黏附能力，抑制其侵襲和遷移，其作用機(jī)制與下調(diào)機(jī)體MMP-2和MMP-9相關(guān)。

1.4 抗肝纖維化，保護(hù)肝功能 Liu等[14]建立肝纖維化雄性大鼠模型，給予腹腔注射欖香烯8周。結(jié)果顯示，欖香烯能下調(diào)大鼠血漿中內(nèi)毒素，血清腫瘤壞死因子-α，以及肝纖維化大鼠肝CD14的表達(dá)。欖香烯在下調(diào)脂多糖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上起到了重要的作用，從而阻止肝纖維化進(jìn)展。欖香烯也能下調(diào)肝纖維化大鼠血漿腎素-血管緊張素的水平和肝AT1R的表達(dá)。肝星狀細(xì)胞活化和轉(zhuǎn)型在肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。欖香烯對(duì)四氯化碳肝纖維化大鼠有拮抗作用。其能抑制肝星狀細(xì)胞激活，降低肝組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β1)，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)水平表達(dá)，避免細(xì)胞外基質(zhì)在肝臟中的沉積，延緩肝纖維化的進(jìn)展。楊芬等[15]研究表明，欖香烯能降低肝星狀細(xì)胞GEF的表達(dá)，上調(diào)GDIβ基因的表達(dá)，從而干擾GEF/GDIβ-ROCK通路，發(fā)揮抗纖維化的作用。

1.5 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能 大量的研究證實(shí)，欖香烯能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞水平來(lái)改善機(jī)體免疫功能。林琳[16]通過(guò)體外研究欖香烯對(duì)肝癌荷瘤小鼠作用發(fā)現(xiàn)，欖香烯能通過(guò)刺激活化巨噬細(xì)胞、促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)成熟，增加小鼠T淋巴細(xì)胞數(shù)量(CD4+/CD8+比例增高)，促進(jìn)細(xì)胞因子干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)分泌，發(fā)揮抗腫瘤作用。姚淑娟等[17]研究發(fā)現(xiàn)，欖香烯對(duì)小鼠移植性肝癌細(xì)胞H22有顯著抑瘤作用。其作用機(jī)制與增強(qiáng)小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，調(diào)節(jié)腫瘤組織中P53、Bcl-2表達(dá)相關(guān)。晚期PHC患者常伴有腹水，PHC腹水降低了患者生存期。薛天樂(lè)等[18]選取艾氏腹水純系小鼠，給予欖香烯腹腔灌注。結(jié)果顯示，欖香烯能明顯抑制艾氏腹水小鼠細(xì)胞生長(zhǎng)，延長(zhǎng)生命率為93.33%，欖香烯也能增強(qiáng)小鼠免疫反應(yīng)。肝欖香烯作為應(yīng)激原通過(guò)改變腫瘤細(xì)胞熱休克蛋白70(HSP70)分布，增加HSP70的表達(dá)，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞殺傷活性。該研究也提示，HSP70配合熱療聯(lián)合NK細(xì)胞治療，為肝癌治療提供新的路徑[19]。

2 欖香烯治療原發(fā)性肝癌臨床研究

2.1 聯(lián)合介入治療 肝動(dòng)脈栓塞化療術(shù)(TACE)因其能有效阻斷肝動(dòng)脈血供，直接殺傷肝癌細(xì)胞的特點(diǎn)，被作為不可手術(shù)切除肝癌患者的首選有效治療手段。但由于仍存在部分側(cè)支循環(huán)及門(mén)靜脈血供，使得單純TACE治療復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率較高。部分患者術(shù)后伴有發(fā)熱、惡心嘔吐、腹瀉、骨髓抑制等不良反應(yīng)。欖香烯聯(lián)合TACE治療PHC臨床療效顯著，且能明顯降低不良反應(yīng)。

Yao等[20]對(duì)欖香烯聯(lián)合TACE治療不可手術(shù)切除PHC患者進(jìn)行Meta分析，共納入10項(xiàng)研究包含543例患者。欖香烯給藥方式包括動(dòng)脈灌注和靜脈滴注。結(jié)果顯示，欖香烯聯(lián)合組總客觀(guān)緩解率優(yōu)于單純TACE，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(OR=2.72，95%CI=1.84～4.00，P<0.05)。欖香烯聯(lián)合TACE能顯著提高患者1年生存率(OR=2.79, 95%CI=1.58～4.95，P<0.05)，且在一定程度上，能降低骨髓抑制的發(fā)生率。毆志濤等[21]對(duì)欖香烯聯(lián)合TACE治療PHC進(jìn)行Meta分析，共納入9篇文獻(xiàn)包含487例患者。結(jié)果顯示，欖香烯聯(lián)合常規(guī)TACE在有效率、疾病控制率及12、24個(gè)月生存率方面均顯著提高(RR=1.43，95%CI=1.22～2.31，P=0.001)，且聯(lián)合欖香烯能明顯降低腹痛發(fā)生率(RR=0.59，95%CI=0.36～0.98，P=0.04)。管超等[22]對(duì)欖香烯聯(lián)合TACE治療PHC療效和安全性進(jìn)行Meta分析，共納入6篇RCT文獻(xiàn)。結(jié)果顯示，欖香烯聯(lián)合TACE能提高近期有效率(OR=2.68,95%CI=1.63～4.40，P<0.01)，改善客觀(guān)緩解率(OR=2.52，95%CI=1.25～5.08，P=0.010)。

2.2 欖香烯聯(lián)合放療 放療為中晚期PHC治療提供一種新的治療方法，通過(guò)給予腫瘤組織一定劑量的放射線(xiàn)照射，殺死腫瘤細(xì)胞，提高患者的臨床療效。欖香烯聯(lián)合放療有協(xié)同增敏的作用，研究表明經(jīng)欖香烯作用后，G2/M期比例明顯升高。研究觀(guān)察欖香烯聯(lián)合放療治療原發(fā)性肝癌的臨床療效，結(jié)果顯示，欖香烯與放療聯(lián)合總有效率92.0%，明顯高于對(duì)照組72.0%(P<0.05)[23]；且聯(lián)合用藥能明顯縮短放療實(shí)施時(shí)間、住院接受總治療時(shí)間，能有效下調(diào)血清中MMP-2、MMP-9表達(dá)[24]。

2.3 欖香烯聯(lián)合分子靶向藥物 分子靶向藥物通過(guò)攜載藥物或載體精準(zhǔn)在病變部位釋放和蓄積有效成分，實(shí)現(xiàn)抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，降低對(duì)正常器官、組織和細(xì)胞的傷害而在臨床上應(yīng)用廣泛[25]。欖香烯能協(xié)同增強(qiáng)索拉菲尼的抗腫瘤效果，逆轉(zhuǎn)索拉菲尼的耐藥性，機(jī)制與提高P21蛋白表達(dá)，降低Raf激酶水平相關(guān)[26]。

郝杰等[27]應(yīng)用欖香烯聯(lián)合索拉菲尼治療PHC總有效率84.0%，顯著高于單用索拉菲尼組總有效率(56.0%)，表明聯(lián)合用藥能獲得較好的臨床療效。陸穎等[28]應(yīng)用欖香烯聯(lián)合索拉菲尼治療PHC能明顯改善患者肝功能指標(biāo)，且聯(lián)合用藥組不良反應(yīng)發(fā)生率為7.5%，明顯低于單用西藥組的不良反應(yīng)發(fā)生率(12.5%)。周廣磊等[29]觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，欖香烯聯(lián)合索拉菲尼能顯著提高患者生活質(zhì)量，降低血清中甲胎蛋白、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平。聯(lián)合用藥明顯提升PHC患者中位生存期、1年生存率、2年生存率，延長(zhǎng)患者生存期，且安全性較好。朱蔚等[30]觀(guān)察重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合欖香烯治療晚期PHC的臨床療效，研究組患者給予人血管內(nèi)皮抑素+欖香烯，對(duì)照組患者給予華蟾素治療。結(jié)果顯示，前者能明顯提高患者1年生存率(18.75%vs0%)，中位生存時(shí)間(7.5個(gè)月vs4.05個(gè)月)，并能明顯改善患者軀體功能、癥狀、副作用等。

2.4 欖香烯聯(lián)合中醫(yī)藥 臨床研究表明中醫(yī)藥能控制疾病進(jìn)展，提高機(jī)體免疫力，提升患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)患者的生存期。童光武等[31]觀(guān)察欖香烯聯(lián)合消癌平注射液治療中晚期PHC的臨床療效，聯(lián)合用藥組患者客觀(guān)緩解率為65.85%，高于對(duì)照組患者的客觀(guān)緩解率(43.9%)；兩組患者生活質(zhì)量改善率分別為80.49%和95.12%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合用藥在改善機(jī)體免疫功能、降低MMP-2、MMP-9水平均優(yōu)于單獨(dú)用藥。王明龍等[32]觀(guān)察蓮芪膠囊聯(lián)合欖香烯治療中晚期PHC，聯(lián)合用藥組總有效率26.67%，控制率96.67%，單用蓮芪膠囊組總有效率10.00%，控制率80.00%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合用藥在改善肝功能指標(biāo)、血常規(guī)指標(biāo)及腎功能指標(biāo)方面均優(yōu)于單獨(dú)用藥。李琳霈等[33]應(yīng)用肝復(fù)方聯(lián)合欖香烯治療中晚期PHC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合用藥干預(yù)肝郁脾虛型原發(fā)性肝癌臨床療效確切，縮小瘤體，能明顯改善患者臨床癥狀，提高患者生活質(zhì)量，且臨床用藥安全性高。儲(chǔ)真真等[34]應(yīng)用蓮龍消積方聯(lián)合欖香烯介入治療中晚期PHC實(shí)體瘤的總有效率20.00%，明顯高于對(duì)照組(13.33%)；臨床獲益率為96.00%，明顯高于對(duì)照組的臨床獲益率(83.33%)。欖香烯聯(lián)合蓮花消積方能明顯恢復(fù)肝功能，改善臨床癥狀及體力狀況，且臨床安全性較好。

3 結(jié)語(yǔ)

PHC是消化道系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，主要臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、乏力、消瘦、腹脹等。目前發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但與基因突變、黃曲霉毒素感染、肝硬化、病毒性肝炎有密切的關(guān)系。欖香烯為非細(xì)胞毒性藥物，臨床應(yīng)用無(wú)骨髓抑制、肝腎功能損傷、惡性嘔吐等不良反應(yīng)，是綠色的抗腫瘤植物化學(xué)藥。欖香烯治療PHC是多通路、多效應(yīng)、多靶點(diǎn)共同作用的結(jié)果?；A(chǔ)研究證實(shí)，欖香烯能通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期，調(diào)節(jié)免疫等殺滅肝癌細(xì)胞。臨床研究證實(shí)，欖香烯聯(lián)合化療能增強(qiáng)抗腫瘤療效，聯(lián)合放療能增強(qiáng)敏感性，降低放化療毒副作用；聯(lián)合靶向藥物能逆轉(zhuǎn)靶向藥物耐藥，延長(zhǎng)患者生存期；聯(lián)合中藥能明顯改善患者的生存質(zhì)量，控制疾病的進(jìn)展，以及提高患者免疫力。目前現(xiàn)有的基礎(chǔ)研究尚未能完全闡釋清楚欖香烯抗肝癌作用機(jī)制，研究成果相對(duì)比較淺顯。臨床研究尚缺乏隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)的大樣本、多中心臨床研究，研究也比較局限。如何更好地發(fā)揮民族藥的優(yōu)勢(shì)，增加更有說(shuō)服力的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，積極開(kāi)展欖香烯臨床研究指導(dǎo)臨床合理用藥，是今后應(yīng)該重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題。