雞傳染性法氏囊病的臨床鑒定方法及防控

陳圓圓，沈丹丹，李雙雙，周欣，李厚偉，李倩倩，張先鋒，張真真，常照鋒★

（1.商丘美蘭生物工程有限公司，河南 商丘 476000；2.河南普華基因科技有限公司，河南 鄭州 450000）

雞傳染性法氏囊病 （infectious bursal disease，IBD）首次發(fā)生于美國甘布洛鎮(zhèn)的60 年代，如今已遍及世界，它是一種雙鏈RNA 病毒，屬于雙RNA 病毒科，無囊膜，即傳染性法氏囊病病毒（IBDV）主要引起以法氏囊內(nèi)淋巴組織損傷為主的一種疾病，主要侵害雛雞，以法氏囊腫脹、出血壞死為主要特征，引起被感染雞的免疫抑制和死亡，部分雞在發(fā)病初期出現(xiàn)自啄肛門羽毛的現(xiàn)象。該病毒在一般環(huán)境中比較穩(wěn)定，能在雞舍內(nèi)存活122 天。對物理和化學(xué)因素具有較強(qiáng)的抵抗力，75℃高溫30 分鐘、0.5%氯化銨作用10 分鐘即可殺滅病毒。

近年來，因IBD 疫苗的廣泛使用，臨床上該病的流行暴發(fā)明顯減少，但卻出現(xiàn)了混合感染、區(qū)域流行、疫苗免疫失敗等新的特點，分子流行病學(xué)研究結(jié)果表明，各地IBDV 毒株來源復(fù)雜，不同地區(qū)、不同時間分離的流行毒株在抗原性、致病性和毒力方面均存在不同的差異。因此，IBD 的防控也面臨著新的挑戰(zhàn)。

2022 年5 月，山東某家養(yǎng)雞場發(fā)現(xiàn)發(fā)病雞啄肛現(xiàn)象，法氏囊有明顯的腫大、出血和炎性滲出物等病變。臨床癥狀疑似雞傳染性法氏囊病感染。取商品雞法氏囊組織裂解液，并進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗、血凝試驗、動物感染試驗進(jìn)行鑒定，具體試驗情況如下。

1 血凝試驗

采取3 月齡雞全血與等量抗凝劑混合，然后用生理鹽水洗滌3 次，每次以1500 轉(zhuǎn)/分鐘離心10 分鐘，將沉積的紅細(xì)胞配制成1%懸液，即為1%雞紅細(xì)胞。取雞傳染性法氏囊病病毒裂解液，按常規(guī)方法進(jìn)行血凝試驗，觀察是否有紅細(xì)胞凝集，同時用NDV 作陽性對照。結(jié)果顯示，分離株樣品沒有出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，而新城疫陽性對照有明顯的紅細(xì)胞凝集，表明無NDV 污染。

2 瓊脂擴(kuò)散試驗

甲液：取Na2HPO4·12H2O 3.85 克，加水至1000 毫升。乙液：取KH2PO41.36 克，加水至1000 毫升充分溶解。

瓊脂板制備：將甲液24 毫升、乙液76 毫升加到三角瓶內(nèi)混勻，再加入1.0 克瓊脂糖，8.0 克氯化鈉，待瓊脂糖完全融化。取滅菌的直徑90毫米平皿，每個平皿中加20 毫升，待凝固后封裝，置2℃～8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

用梅花打孔器進(jìn)行打孔。中心孔加入雞傳染性法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，外周孔中加入不同倍比稀釋的組織裂解液上清，同時設(shè)立陰性對照。置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)24～48 小時觀察結(jié)果。試驗結(jié)果顯示，該病雞的組織裂解液上清與雞傳染性法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陽性血清之間有明顯的白色沉淀線，而陰性對照未出現(xiàn)，詳見圖1。

圖1 瓊脂擴(kuò)散試驗鑒定

3 動物回歸試驗

取反復(fù)凍融的組織液上清接種25 日齡雞，感染組10 只，每只經(jīng)點眼、滴鼻接種0.1 毫升，每天觀察并記錄雞的臨床癥狀和發(fā)病情況。同時設(shè)立空白對照組10 只。

對照組雞全部健活，而感染組雞于接種后第3 天開始出現(xiàn)典型的IBD 臨床癥狀，精神萎靡，羽毛松亂，第4 天開始出現(xiàn)死亡，法氏囊嚴(yán)重水腫，內(nèi)含淡黃色膠凍樣滲出物，胸肌、腿肌有片狀出血；腎臟輕度腫脹，感染雞10 只，死亡2 只，死亡率為20%，對照雞未見明顯變化，詳見圖2。

圖2 感染組雞法氏囊病變照片、對照組雞法氏囊照片

4 結(jié)果說明

該分離株病毒不具有凝集雞紅細(xì)胞的特性，能與雞傳染性法氏囊標(biāo)準(zhǔn)陽性血清出現(xiàn)明顯的沉淀線，雞感染試驗證實了感染組能出現(xiàn)與臨床自然發(fā)病雞相同的癥狀與病變。因此該病雞感染的確為雞傳染性法氏囊病毒。

5 臨床防控措施

5.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

在養(yǎng)殖過程中，盡可能做到全進(jìn)全出，保證飼料質(zhì)量，盡可能降低更換飼料次數(shù)，減少人為的或外界因素的刺激可能引起的雞群發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致的免疫力下降。做好日常打掃和定期消毒工作。對圈舍定期進(jìn)行清掃消毒，進(jìn)雛前對基隆料槽水線等進(jìn)行清洗消毒。

5.2 做好疫苗免疫

目前免疫接種是預(yù)防該病最有效的方法，市面上比較常見的主要有滅活苗和弱毒苗。所以制定合理的免疫程序，做好免疫接種工作，在免疫接種過程中盡可能保證一針一雞，確保所有的雞只免疫。在發(fā)病區(qū)和發(fā)病季節(jié)做好疫苗接種。另外，本病目前沒有特效療法。在發(fā)病初期用高免血清和卵黃抗體治療，搭配抗生素可預(yù)防繼發(fā)感染。