犢牛大腸桿菌病的診斷與防治

馮明祥，徐 雨，韋登雄，圖 雅，陳 穎

（貴州省關(guān)嶺縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 561300）

犢牛大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的消化道疾病，感染犢牛消瘦﹑腹瀉﹑脫水甚至死亡，部分犢牛治療不及時(shí)，恢復(fù)后生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1]。大腸桿菌分為非致病性大腸桿菌和致病性大腸桿菌，致病性大腸桿菌常在飼養(yǎng)環(huán)境不良﹑過度擁擠﹑營(yíng)養(yǎng)不足等情況下引起犢牛發(fā)病，并常與其他致病菌混合感染，導(dǎo)致犢牛病情復(fù)雜，治療不及時(shí)，甚至導(dǎo)致死亡。

該病目前在全國(guó)各地均有發(fā)生，通常使用抗菌藥物進(jìn)行治療，這也導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性不斷加強(qiáng)，一方面是大腸桿菌自身的改變，如產(chǎn)生滅活或鈍化抗菌藥物的酶﹑抗菌藥物靶基因改變﹑細(xì)胞漿膜的通透性改變以及代謝途徑改變等；一方面是藥物的選擇壓力，如聯(lián)合使用藥物﹑長(zhǎng)期使用同類藥物﹑低劑量使用藥物等，不合理的使用藥物導(dǎo)致治療效果越來越差[2-3]。大腸桿菌病屬于人畜共患病，病菌可以通過動(dòng)物傳染動(dòng)物，動(dòng)物傳染人，人傳染人，最終導(dǎo)致人類感染，其耐藥質(zhì)?？梢赃z傳，當(dāng)人感染了耐藥性高的細(xì)菌時(shí)，治療費(fèi)用過高，甚至無藥可醫(yī)[4]。因此，本文通過對(duì)大腸桿菌的流行特點(diǎn)﹑臨床特點(diǎn)﹑診斷﹑預(yù)防和治療等進(jìn)行討論，以期為制定科學(xué)合理的防治措施奠定基礎(chǔ)。

1 流行特點(diǎn)

犢牛大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的消化道疾病，患病犢牛的主要臨床表現(xiàn)為消瘦﹑腹瀉和脫水。該病在初生犢牛中發(fā)病率較高，特別是10日齡內(nèi)的犢牛，其余日齡的牛感染但不發(fā)病[5]。該病全年均可發(fā)生，但以冬春季發(fā)病率較高。全國(guó)各地均有發(fā)生，呈地方性流行。犢牛大腸桿菌病的傳染源主要是患病犢牛以及帶菌犢牛，主要通過消化道感染患病，也能夠通過產(chǎn)道和臍帶感染患病。

2 臨床癥狀

根據(jù)臨床癥狀將其分為敗血癥型﹑腸毒血癥型和腸炎型三種[6]。

2.1 敗血癥型

多發(fā)于2～3d齡犢牛，精神萎靡﹑被毛凌亂﹑體溫升高至40℃以上，食欲下降甚至廢絕，淡黃色水樣腹瀉，通常發(fā)病后1d內(nèi)急性死亡，個(gè)別病犢還未出現(xiàn)臨床癥狀就突然死亡，死亡率50%～80%。

2.2 腸毒血癥型

多發(fā)于1周齡犢牛，此發(fā)病率和死亡率較高，達(dá)70%～100%，常無任何癥狀突然死亡。部分病程稍長(zhǎng)的，有典型的中毒性神經(jīng)癥狀，發(fā)病初期興奮，后期沉郁，昏迷直至死亡，常有白色帶氣泡的腹瀉。

2.3 腸炎型

又叫犢牛白痢，多發(fā)于1～2周齡犢牛，患病初期犢牛體溫上升至40℃以上，數(shù)小時(shí)后開始腹瀉，初期糞便呈淡黃色﹑粥樣，隨病程發(fā)展，糞便顏色變?yōu)榛野咨?，水樣，有時(shí)可見未消化的凝乳塊﹑凝血塊及泡沫，有酸敗氣味。發(fā)病末期，犢牛會(huì)出現(xiàn)肛門失禁，可因脫水或酸中毒死亡。如果及時(shí)治療，通常能夠治愈，但是康復(fù)后的犢牛生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，常繼發(fā)臍炎﹑關(guān)節(jié)炎﹑肺炎的炎癥。

3 病理解剖

敗血癥型﹑腸毒血癥型病死的犢牛，通常剖檢無明顯的病理變化。腸炎型病死的犢牛胃黏膜充血﹑出血；小腸黏膜充血﹑出血，部分黏膜上皮脫落；腸系膜淋巴結(jié)腫大；心臟內(nèi)膜出血；肝臟和腎臟蒼白，可見出血點(diǎn)。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

采集病死犢牛的內(nèi)臟﹑血液和糞便等，其中對(duì)敗血型和腸毒血型的采集內(nèi)臟和血液，無菌劃線與麥康凱培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，大腸桿菌麥康凱培養(yǎng)基中生長(zhǎng)為圓形﹑表面光滑﹑粉紅色，在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基中菌落為圓形﹑表明光滑帶有金屬光澤﹑深紫黑色，對(duì)符合分離特征的進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，顯微鏡下觀察呈紅色﹑短桿狀，為革蘭氏陰性菌；對(duì)符合染色特征的分離菌進(jìn)行生化鑒定，大腸桿菌在靛基質(zhì)﹑甲基紅﹑動(dòng)力﹑產(chǎn)氣﹑山梨醇等實(shí)驗(yàn)中為陽(yáng)性，在VP﹑硫化氫﹑苯丙氨酸﹑枸櫞酸鹽﹑尿素等實(shí)驗(yàn)中為陰性，進(jìn)一步確診還可以使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)﹑酶免疫分析技術(shù)﹑免疫磁珠分離技術(shù)和血清學(xué)診斷技術(shù)等。

在確定分離出的大腸桿菌后，還需要進(jìn)一步進(jìn)行動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)，分析分離株的致病力，還可以進(jìn)行血清型鑒定，確定分離株血清型，以及耐藥性實(shí)驗(yàn)，分析分離株耐藥情況，為后續(xù)用藥進(jìn)行指導(dǎo)。

5 防治措施

5.1 預(yù)防措施

5.1.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

管理不當(dāng)導(dǎo)致犢牛腹瀉的外在原因，如環(huán)境臟亂﹑圈舍陰冷潮濕﹑舍內(nèi)過熱或過冷﹑營(yíng)養(yǎng)不足等都會(huì)引起犢牛腹瀉，因此，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持圈舍干燥衛(wèi)生﹑保溫通風(fēng)﹑合理飼養(yǎng)密度等都可以減低犢牛發(fā)病率。

第一，妊娠母牛的飼養(yǎng)管理。逐漸增加精料，增強(qiáng)妊娠母牛的體質(zhì)，保證每日定時(shí)運(yùn)動(dòng)，防止便秘，并根據(jù)不同孕期添加適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)和電解多維等。分娩前一周消毒擦干后轉(zhuǎn)入產(chǎn)房，保持產(chǎn)房干燥通風(fēng)，每日更換墊料。

第二，產(chǎn)后母牛的飼養(yǎng)管理。及時(shí)處理胎衣，促進(jìn)排惡露，對(duì)陰道周圍每天定時(shí)溫水洗凈消毒，定期清理牛舍內(nèi)的糞污，保持干燥衛(wèi)生，同時(shí)控制室溫。產(chǎn)后以飼喂干草或青草為主，少喂精料，飲水使用溫水。每日溫水清洗消毒乳房一次，同時(shí)定時(shí)按摩擠壓。產(chǎn)后一周內(nèi)的母牛，如無其他問題，轉(zhuǎn)出產(chǎn)房。

第三，新生犢牛的飼養(yǎng)管理。犢牛出生后，應(yīng)立即清除口鼻中的污物，剪斷臍帶，長(zhǎng)度在10～12cm，用碘酊消毒處理傷口，再包上紗布，同時(shí)盡快擦干身體。新生犢牛消化道系統(tǒng)如胃腸道黏膜尚未發(fā)育完全，對(duì)疾病的抵抗能力弱，而牛初乳可以有效保護(hù)胃腸黏膜，對(duì)犢牛抵抗疾病有很大作用，在犢牛出生后盡快飼喂初乳，獲得被動(dòng)抗體。后期保持環(huán)境衛(wèi)生干燥，避免突然刺激犢牛，減少應(yīng)激，可以降低疾病的發(fā)生。

5.1.2 清洗消毒

大腸桿菌對(duì)外界的抵抗力不強(qiáng)，通常能在室溫下存活數(shù)周，在土壤和水中能存活120d，而一般50℃ 30min或者60℃15min即可被滅活，大部分的消毒藥物也可以將其快速殺死，但是當(dāng)其在黏液和糞便中，消毒藥物的效果會(huì)減弱[7]，因此，在消毒之前，日常清洗至關(guān)重要。

產(chǎn)房需要提前準(zhǔn)備，先用消毒液噴濕地面后，再清掃場(chǎng)地，鏟除污物，確保不留死角，清掃完成后，關(guān)閉好圈舍門窗，用消毒液對(duì)圈舍地面﹑四周墻壁﹑門窗﹑欄柱等進(jìn)行噴灑消毒，飼槽﹑飲水槽用消毒液洗刷，待2h后打開門窗通風(fēng)，用清水沖洗，干燥后備用。

在妊娠母牛分娩前后對(duì)母牛乳房﹑外陰﹑肛門和后驅(qū)用溫?zé)崴逑聪?，接生相關(guān)工作人員做好接產(chǎn)相關(guān)器具和自身的消毒，全程進(jìn)行無菌操作，避免臍帶感染，后續(xù)做好日常清洗消毒工作。圈舍消毒可選用氫氧化鈉﹑戊二醛類﹑氯制劑類等；器具消毒可選用季銨鹽類﹑復(fù)方含碘類（碘﹑磷酸﹑硫酸復(fù)合物）﹑過硫酸氫鉀類；皮膚消毒可選用含碘類﹑來蘇兒﹑高錳酸鉀等。

5.1.3 疫苗免疫

對(duì)于常有犢牛大腸桿菌病發(fā)病的牛場(chǎng)，推薦接種大腸桿菌疫苗，目前，已經(jīng)研究出O78﹑O26和O15三價(jià)苗﹑O2﹑O86﹑O101三價(jià)苗﹑K99-F41二價(jià)滅活苗以及亞單位疫苗和基因疫苗等[8-11]，這些疫苗通常在產(chǎn)前15～45d注射，因此，注射時(shí)要注意動(dòng)作迅速輕柔，避免母牛受驚，同時(shí)，大腸桿菌的血清型多達(dá)幾百種，并存在交叉性，因此，不同地區(qū)﹑不同場(chǎng)流行的血清型差異很大，當(dāng)市場(chǎng)上的疫苗不能滿足養(yǎng)殖場(chǎng)防疫需求的時(shí)候，可以考慮制備該場(chǎng)分離株的滅活疫苗。

5.2 治療措施

5.2.1 抗菌消炎：對(duì)剛養(yǎng)殖的發(fā)病牛場(chǎng)主要采用常用抗生素藥物進(jìn)行治療，如鏈霉素﹑慶大霉素﹑氧氟沙星等，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行使用，不要過量或者少量，精準(zhǔn)用藥，盡量避免聯(lián)合使用抗生素。對(duì)于老場(chǎng)或是耐藥性嚴(yán)重的養(yǎng)殖場(chǎng)不要盲目用藥，因立刻采樣送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)針對(duì)性用藥，避免耐藥性的進(jìn)一步加重。

對(duì)于抗菌藥物的使用，嚴(yán)禁使用禁止藥物和假冒偽劣的藥物，根據(jù)抗菌藥物分級(jí)分類使用，從低到高，從窄到廣，謹(jǐn)慎聯(lián)合使用抗菌藥物?？蛇x用高效﹑休藥期短和低殘留的品種以及中藥﹑微生態(tài)制劑等綠色獸藥。

5.2.2 補(bǔ)液：腹瀉導(dǎo)致大量水分流失，可根據(jù)脫水量進(jìn)行補(bǔ)水。針對(duì)脫水不嚴(yán)重的，犢牛仍具有食欲能夠自己吮吸的情況，可以服補(bǔ)充溫?zé)岬奶躯}水。對(duì)脫水嚴(yán)重的，犢牛不能吮吸的情況，可以靜脈注射5%葡萄糖生理鹽水。一旦犢牛出現(xiàn)酸中毒癥狀，緩慢靜脈注射5%的碳酸氫鈉。

5.2.3 調(diào)節(jié)腸胃機(jī)能：可使用乳酸和魚石脂，用溫?zé)崴靹蚝蠊喾B續(xù)使用3次。也可以口服吸附劑，保護(hù)胃腸黏膜，如硝酸鉍﹑活性炭等，避免犢牛吸收大量的毒素。

5.2.4 調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡：口服生態(tài)制劑，補(bǔ)充益生菌群，如促菌生﹑乳酶生或者其他乳桿菌制劑，讓腸道的菌群盡快恢復(fù)到正常微生態(tài)平衡的狀態(tài)。

6 討論

犢牛大腸桿菌病在牛場(chǎng)養(yǎng)殖中時(shí)有發(fā)生，敗血癥型和腸毒血癥型通突然發(fā)病，還未進(jìn)行治療就已死亡，死亡率高，腸炎型通常使用敏感抗生素藥物治療即可控制痊愈。然而，不規(guī)范的使用藥物，導(dǎo)致大腸桿菌的耐藥性不斷增強(qiáng)。目前，大多數(shù)規(guī)模牛場(chǎng)主﹑散養(yǎng)戶還沒意識(shí)到細(xì)菌耐藥性對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的危害，而越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道，大腸桿菌多重耐藥性的普遍性，韓和祥在四川部分規(guī)?；馀?chǎng)中分離的50株致病性大腸桿菌進(jìn)行耐藥性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明對(duì)強(qiáng)力霉素﹑多粘菌素﹑慶大霉素﹑磺胺間甲氧嘧啶﹑氨芐西林﹑阿莫西林和青霉素的耐藥率分別為72%﹑78%﹑78%﹑84%﹑92%﹑94%和96%，并且有多重耐藥現(xiàn)象[12]。肖躍強(qiáng)等在黃河三角洲部分地區(qū)肉牛場(chǎng)中分離出33株大腸桿菌，對(duì)強(qiáng)力霉素﹑阿莫西林﹑紅霉素﹑磺胺甲基唑84.8%﹑81.8%﹑75.8%和81.85%，也有多重耐藥現(xiàn)象[13]。有的病例甚至出現(xiàn)無藥可以的狀態(tài)，王海瑞對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明部分分離株對(duì)使用藥物全部耐藥[14]。因此，作為基層獸醫(yī)部門必須提高對(duì)細(xì)菌耐藥性的警惕，引導(dǎo)和培訓(xùn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)主和散養(yǎng)戶對(duì)細(xì)菌耐藥性的防范意識(shí)，根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍星闆r結(jié)合各場(chǎng)自身?xiàng)l件制定合理長(zhǎng)期可行的用藥制度，逐步降低細(xì)菌耐藥性，減少耐藥性對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成的危害，為百姓帶來更大的經(jīng)濟(jì)效益。

大腸桿菌的耐藥性，不單單影響?zhàn)B殖業(yè)的發(fā)展，同時(shí)對(duì)食品安全和公共衛(wèi)生安全產(chǎn)生重大隱患，耐藥菌株隨著糞便﹑尿液等排出體外，進(jìn)入外界環(huán)境中，對(duì)環(huán)境和人類造成嚴(yán)重危害，世界各國(guó)每年都有人通過不同途徑感染致病性大腸桿菌，如飲用污染的食物等，最終導(dǎo)致發(fā)病或死亡的報(bào)道[15]。而且，大腸桿菌病是人畜共患病，致病菌株可以在人和動(dòng)物，動(dòng)物和動(dòng)物之間傳播，耐藥基因可以遺傳，可以不斷轉(zhuǎn)移，耐藥基因的傳播范圍不斷擴(kuò)大，最直接反應(yīng)在人類醫(yī)療上，新藥物的研發(fā)速度趕不上細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)速度，最終一起常見細(xì)菌病的感染，也可能會(huì)無藥可醫(yī)[4]。因此，制定合理的用藥規(guī)章制度，減緩耐藥性產(chǎn)生的速度，以延長(zhǎng)抗菌藥物的使用時(shí)間，對(duì)全世界都至關(guān)重要。

2021年10月，為遏制細(xì)菌的耐藥，維護(hù)國(guó)家的公共衛(wèi)生安全以及生物安全，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布《全國(guó)獸用抗菌藥使用減量化行動(dòng)方案（2021年—2025年）》，方案中要求到2025年末，50%以上的規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)將從飼養(yǎng)管理﹑生物安全防護(hù)﹑規(guī)范用藥﹑謹(jǐn)慎用藥﹑替代用藥五個(gè)方面進(jìn)行獸藥減量化行動(dòng)[16]。因此，抗菌藥物的減量行動(dòng)勢(shì)在必行，各部門和機(jī)構(gòu)都應(yīng)該提前做好準(zhǔn)備工作。目前，發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)致病性大腸桿菌高度重視，并形成規(guī)范的國(guó)家監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，而我國(guó)在該病監(jiān)測(cè)和研究等方面還有不足，但建立致病性大腸桿菌的監(jiān)測(cè)網(wǎng)已成為大趨勢(shì)，各地區(qū)提前做好流行病學(xué)調(diào)查，建立監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)，并根據(jù)地方實(shí)際情況制定健康監(jiān)測(cè)檢測(cè)方案，以期為指導(dǎo)后續(xù)行動(dòng)做好準(zhǔn)備工作。