電針“情感區(qū)”對血管性癡呆大鼠海馬體腫瘤壞死因子α、轉(zhuǎn)化生長因子β的影響

張思琪， 楊添淞， 馬帥， 張淼

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)教務(wù)科，黑龍江哈爾濱 150040；3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院針灸十診室，黑龍江哈爾濱 150001）

血管性癡呆（vascular dementia，VD）好發(fā)于腦卒中后，且與反復(fù)發(fā)作的腦卒中關(guān)系更為密切，腦卒中發(fā)生后的3 個(gè)月，VD 發(fā)病率可高達(dá)13.6%，臨床表現(xiàn)主要有學(xué)習(xí)記憶能力下降、失語、空間定向力障礙以及情感障礙等[1]。VD 致病因素多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未明確。炎癥機(jī)制廣泛參與VD 病理改變，抑制炎癥反應(yīng)可緩解VD 產(chǎn)生的一系列損傷[2]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，針刺“情感區(qū)”可改善癡呆患者的認(rèn)知功能狀態(tài)[3]，本研究采用改良的兩血管阻斷（2-VO）法建立VD 大鼠模型，觀察電針“情感區(qū)”對VD大鼠炎癥反應(yīng)的影響，進(jìn)一步探討電針“情感區(qū)”對VD大鼠的治療作用及機(jī)制，以期為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用清潔級SD 雄性大鼠64 只，8 ～12周齡，體質(zhì)量160 ～200 g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心[生產(chǎn)許可證號：SCXK（黑）2018-003]，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 腫瘤壞死因子α（TNF-α）免疫組織化學(xué)抗體、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）免疫組織化學(xué)抗體、兩步法免疫組織化學(xué)試劑盒（武漢博士德生物生物工程有限公司）；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗兔IgG、DAB 顯色試劑盒（武漢博士德生物生物工程有限公司）；TNF-α Western Blot 抗體（美國Proteinch 公司）；TGF-β Western Blot 抗體（美國Abcam公司）；Super-GL ECL 超敏發(fā)光液、裂解液（上海艾博思生物科技有限公司）；TNF-α ELISA抗體（美國Proteinch 公司）；TGF-β ELISA 抗體（美國Abcam公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 0.35 mm×13 mm 針灸針（貴州安迪藥業(yè)有限公司）；英迪牌KWD-8001脈沖針灸治療儀（廣州康哲醫(yī)療器械有限公司）；Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（上海欣欣信息科技有限公司）；高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；石蠟切片機(jī)（德國萊卡公司）；VE-180 垂直電泳槽（上海天能公司）；DY-B1脫色搖床（上海青浦滬西儀器公司）；生物顯微鏡（德國蔡司公司）；多功能酶標(biāo)儀（美國Thermo Fisher 公司）。

1.4 分組與模型 將64 只SD 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分為空白組、假手術(shù)組、模型組和治療組，共4 組，每組16 只。采用改良兩血管阻斷（2-VO）法，即雙側(cè)頸總動(dòng)脈近端與遠(yuǎn)端結(jié)扎，并將雙側(cè)結(jié)扎之間剪斷，構(gòu)建VD 模型[4]。具體方法：麻醉大鼠，碘伏消毒，剔毛備皮。外科剪刀沿頸部正中作一長1.5 ～2 cm的縱行切口，鈍性分離肌肉組織，暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈。利用玻璃分針小心分離雙側(cè)的頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，避免對動(dòng)脈、氣管以及神經(jīng)造成損傷，用不可吸收縫合線結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的遠(yuǎn)端與近段，系死結(jié)。外科手術(shù)剪快速剪斷兩結(jié)中央。對側(cè)予以相同處理?？晌胀饪瓶p合線縫合皮膚，青霉素消毒傷口。暖燈37 ℃左右保溫至蘇醒，回籠繼續(xù)飼養(yǎng)。假手術(shù)組僅暴露動(dòng)脈三角后，分離頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，不進(jìn)行后續(xù)結(jié)扎。手術(shù)1 周后，對各組大鼠進(jìn)行Morris水迷宮測試，符合本實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)的大鼠繼續(xù)實(shí)驗(yàn)[5]。

1.5 治療方法 造模成功后行電針治療。根據(jù)《大鼠穴位圖譜的研制》[6]、《孫申田針灸治驗(yàn)》[7]，明確針刺選取穴位以及針刺深度。通過計(jì)算人體與大鼠骨骼比例，確定大鼠骨度分寸。采用電針針刺“情感區(qū)”（即第1 針“神庭穴”與“印堂穴”連線中點(diǎn)，其余2針在目內(nèi)眥直上，平行于正中線第1針）治療。毫針選取0.35 mm×13 mm，方向沿皮從下向上刺入所選穴位下4 ～5 mm。電針儀脈沖波型：選用疏密波，電流強(qiáng)度1 ～2 mA。每次30 min，每日1次，周期14 d。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1.6.1 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測大鼠學(xué)習(xí)記憶能力 分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)，共6 d。需注意避光，水溫控制在（26±2）℃。向水中加入可食用墨汁，將水染至看不見水下平臺。定位航行實(shí)驗(yàn)共5 d，每次訓(xùn)練大鼠分別從4 個(gè)象限圓弧中點(diǎn)入水，檢測4個(gè)象限的逃避潛伏期，取其平均值作為本次的逃避潛伏期。規(guī)定每次實(shí)驗(yàn)時(shí)間為60 s，若大鼠在規(guī)定時(shí)間內(nèi)未找到平臺，則將大鼠引導(dǎo)至隱蔽平臺之上并保證其在上面停留3 s。如大鼠可自行找到平臺，則必須保證其在平臺上站立3 s 以強(qiáng)化記憶。共記錄2 個(gè)參數(shù)，其一為逃避潛伏期（即從入水點(diǎn)到找到平臺的時(shí)間），其二為游泳總路程（即從入水點(diǎn)到找到隱蔽平臺的游泳軌跡的長度）?？臻g探索實(shí)驗(yàn)共1 d，水下的隱蔽平臺被移除水槽，設(shè)定時(shí)間為60 s。記錄大鼠在60 s內(nèi)首次抵達(dá)平臺的時(shí)間和穿越平臺次數(shù)。

1.6.2 蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察海馬CA1 區(qū)病理形態(tài) 取海馬組織切片，脫蠟水化后，蘇木素染色4 min 30 s，蒸餾水沖洗2 ～3 s。1%鹽酸乙醇分化3 min。蒸餾水沖洗2 min 返藍(lán)。伊紅染色45 s，蒸餾水沖洗2 ～3 s。脫水、透明，中性樹膠封片。顯微鏡下觀察海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.6.3 免疫組織化學(xué)法檢測海馬體TNF-α、TGF-β陽性細(xì)胞數(shù)量 取海馬組織切片，脫蠟與水化后，放入水浴鍋中15 min。滴加5%BSA 封閉液，37 ℃恒溫箱孵育30 min。滴加一抗（TNF-α、TGF-β，均按體積比1∶200 稀釋），37 ℃恒溫箱孵育1 h。PBS沖洗后，滴加聚合HRP標(biāo)記抗兔IgG，37 ℃恒溫箱孵育30 min。PBS 沖洗后，滴加DAB 顯色液，反應(yīng)1 min。蘇木素復(fù)染1 min，蒸餾水沖洗2 ～3 s返藍(lán)。固定封片。光鏡下（×400）可見TNF-α、TGF-β 在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈陽性著色，TNF-α、TGF-β陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果取其平均值。

1.6.4 ELISA 法檢測海馬體TNF-α、TGF-β含量 浸泡酶標(biāo)板后，標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔、樣本孔處理后，每孔加入抗體（TNF-α、TGF-β），加樣過程在15 min 內(nèi)完成，室溫孵育1.5 h。洗滌后，每孔加入稀釋的辣根過氧化物標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫孵育30 min。洗滌后，加顯色底物TMB，避光，室溫孵育5 ～30 min。加終止液后，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

1.6.5 Western Blot 法檢測海馬 CA1 區(qū) TNF-α、TGF-β 蛋白表達(dá) 取海馬組織裂解、離心取上清，進(jìn)行10%十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰氨凝膠電泳（PAGE）分離和PVDF 膜轉(zhuǎn)移。使用Blocking Buffer 封閉轉(zhuǎn)印膜4 ℃過夜。第2 天，用1 × TBST 洗滌后加入一抗（TNF-α、TGF-β，均按體積比1∶1 000 稀釋），37 ℃溫育2 h。用1× TBST洗滌后，加入二抗（按體積比1∶1 000稀釋），37 ℃溫育2 h。用1×TBST洗滌后，用Super-GL ECL 超敏發(fā)光液進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，并對X 光片曝光。經(jīng)顯影定影處理后，晾干的膠片最后用凝膠成像分析系統(tǒng)拍照。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。在進(jìn)行計(jì)量資料檢驗(yàn)時(shí)，當(dāng)符合正態(tài)分布且方差齊時(shí)采用組內(nèi)配對t檢驗(yàn)，組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；當(dāng)符合正態(tài)分布但方差不齊時(shí)，采用組內(nèi)配對t檢驗(yàn)，組間獨(dú)立樣本校正t檢驗(yàn)；當(dāng)不符合正態(tài)分布時(shí)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較 圖1結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠游泳軌跡路程長且繁瑣，軌跡凌亂復(fù)雜；治療組大鼠游泳路程與模型組比較明顯縮短，經(jīng)過探索可找到平臺位置。

圖1 各組大鼠Morris水迷宮運(yùn)動(dòng)軌跡圖Figure 1 Trajectory of the Morris water maze for each group of rats

表1結(jié)果顯示：定位航行實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的逃避潛伏期以及游泳路程延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，治療組大鼠的逃避潛伏期以及游泳路程縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？臻g探索實(shí)驗(yàn)中，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的首次抵達(dá)平臺時(shí)間明顯增長，穿越平臺次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，治療組大鼠的首次抵達(dá)平臺時(shí)間縮短，穿越平臺次數(shù)增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較Table 1 Comparison of Morris water maze scores among various groups of rats （）

表1 各組大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較Table 1 Comparison of Morris water maze scores among various groups of rats （）

注：①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與假手術(shù)組比較；③P＜0.05，與模型組比較

組別空白組假手術(shù)組模型組治療組穿越平臺次數(shù)/次8.13±3.26 6.38±0.99①2.63± 0.60①②4.31 ± 1.04①②③鼠數(shù)/只16 16 16 16逃避潛伏期/s 23.19±7.36 26.50±7.80①40.88± 7.78①②31.75 ± 5.74①②③游泳總路程/cm 207.50±38.02 210.81±51.20①804.44± 120.70①②309.19 ± 101.60①②③首次抵達(dá)平臺時(shí)間/s 4.81±1.88 5.88±2.12①24.38± 2.89①②13.25 ± 3.15①②③

2.2 各組大鼠海馬CA1 區(qū)病理形態(tài)比較 圖2 結(jié)果顯示：與空白組比較，假手術(shù)組的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)等均無明顯改變。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬CA1 區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)欠完整，邊緣不清晰，形態(tài)不規(guī)則，錐體細(xì)胞排列雜亂無章，細(xì)胞間質(zhì)水腫程度顯著，細(xì)胞核有固縮深染現(xiàn)象，海馬體細(xì)胞帶顯著增寬，神經(jīng)元丟失明顯；與模型組比較，治療組大鼠海馬CA1 區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)相對清晰完整，形態(tài)較為規(guī)則，排列相對均勻，細(xì)胞間質(zhì)水腫程度低于模型組，且細(xì)胞核固縮程度減輕，神經(jīng)元丟失減少。

圖2 各組大鼠海馬CA1區(qū)病理形態(tài)比較（HE染色，×400）Figure 2 Comparison of the pathological morphology of the CA1 region of the hippocampus among various groups of rats（HE staining，×400）

2.3 各組大鼠海馬體TNF-α、TGF-β 陽性細(xì)胞數(shù)量比較 圖3、圖4 及表2 結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬體TNF-α 陽性細(xì)胞數(shù)量增多，TGF-β 陽性細(xì)胞數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，治療組大鼠海馬體TNF-α 陽性細(xì)胞數(shù)量減少，TGF-β 陽性細(xì)胞數(shù)量增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組大鼠海馬體內(nèi)TNF-α、TGF-β陽性細(xì)胞數(shù)量比較Table 2 Comparison of the number of TNF-α-and TGF-β-positive cells in the hippocampus among various groups of rats （，個(gè)）

表2 各組大鼠海馬體內(nèi)TNF-α、TGF-β陽性細(xì)胞數(shù)量比較Table 2 Comparison of the number of TNF-α-and TGF-β-positive cells in the hippocampus among various groups of rats （，個(gè)）

注：①P＜0.05，與假手術(shù)組比較；②P＜0.05，與模型組比較

TGF-β 0 175.27±4.97 131.92±7.45①152.75± 7.50①②組別空白組假手術(shù)組模型組治療組鼠數(shù)/只16 16 16 16 TNF-α 0 1.56±0.17 36.97±4.79①12.72± 1.56①②

圖3 各組大鼠TNF-α免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果（×400）Figure 3 Immunohistochemical test results of TNF-α（×400）

圖4 各組大鼠TGF-β免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果（×400）Figure 4 Immunohistochemistry results of TGF-β（×400）

2.4 各組大鼠海馬體TNF-α及TGF-β含量比較表3結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬體TNF-α 含量增加，TGF-β 含量減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，治療組大鼠海馬體TNF-α 含量減少，TGF-β 含量增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 各組大鼠海馬體TNF-α及TGF-β含量比較Table 3 Comparison of TNF-α and TGF-β contents in the hippocampus among various groups of rats （，ng·mL-1）

表3 各組大鼠海馬體TNF-α及TGF-β含量比較Table 3 Comparison of TNF-α and TGF-β contents in the hippocampus among various groups of rats （，ng·mL-1）

注：①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與假手術(shù)組比較；③P＜0.05，與模型組比較

TGF-β 248.02±44.17 203.54±79.86①73.89± 26.56①②125.76 ± 30.38①②③組別空白組假手術(shù)組模型組治療組鼠數(shù)/只16 16 16 16 TNF-α 205.92±22.92 205.85±27.98①677.93± 223.42①②331.70 ± 93.65①②③

2.5 各組大鼠海馬 CA1 區(qū) TNF-α、TGF-β 蛋白相對表達(dá)量比較 圖5、表4 結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬CA1 區(qū)TNF-α 蛋白相對表達(dá)量升高，TGF-β 蛋白相對表達(dá)量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，治療組大鼠海馬CA1 區(qū)TNF-α 蛋白相對表達(dá)量降低，TGF-β 蛋白相對表達(dá)量升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 各組大鼠海馬CA1區(qū)TNF-α、TGF-β蛋白相對表達(dá)量比較Table 4 Comparison of the relative expressions of TNF-α and TGF-β proteins in the CA1 region of the hippocampus among various groups of rats （）

表4 各組大鼠海馬CA1區(qū)TNF-α、TGF-β蛋白相對表達(dá)量比較Table 4 Comparison of the relative expressions of TNF-α and TGF-β proteins in the CA1 region of the hippocampus among various groups of rats （）

注：①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與假手術(shù)組比較；③P＜0.05，與模型組比較

TGF-β/GAPDH 1.30±0.27 1.19±0.35①0.42± 0.11①②0.69 ± 0.06①②③組別空白組假手術(shù)組模型組治療組鼠數(shù)/只16 16 16 16 TNF-α/GAPDH 0.56±0.04 0.68±0.03①1.07± 0.03①②0.76 ± 0.04①②③

圖5 各組大鼠TNF-α、TGF-β的Western Blot電泳條帶圖Figure 5 Western Blot electrophoretic band of TNF-α and TGF-β

3 討論

按照國際血管性行為與認(rèn)知障礙學(xué)會的聲明，血管性癡呆（VD）的診斷主要考慮以下2 個(gè)方面：一方面，保證表面效度，即明確存在認(rèn)知功能障礙且與人類表現(xiàn)的認(rèn)知障礙狀態(tài)相類似；另一方面，保證結(jié)構(gòu)效度，即明確血管性疾病是引起認(rèn)知障礙的主要病因但不是唯一病因，所建立的VD 模型能較好地模擬人類的生理與病理改變[8]。較為常用的VD 造模方法主要有兩血管阻斷（2-vessel occusion，2-VO）法、三血管阻斷（3-vessel occusion，3-VO）法和四血管阻斷（4-vessel occusion，4-VO）法。改良的2-VO 阻斷法可對海馬及大腦皮層的神經(jīng)元造成創(chuàng)傷，形成學(xué)習(xí)記憶障礙和情感障礙，適合認(rèn)知等方面的研究，與臨床患者的發(fā)病機(jī)制相似[8]。此方法易于操作，且大鼠存活率較高，符合本實(shí)驗(yàn)納入的輕中度VD大鼠條件[9]，故本次實(shí)驗(yàn)選擇改良的2-VO 方法進(jìn)行VD 造模。

VD 歸屬于中醫(yī)學(xué)“呆病”“善忘”等范疇，現(xiàn)代又有“中風(fēng)癡呆病”的定義，將其與其他呆病區(qū)分開來。清·沈金鰲《雜病源流犀燭》即提到“中風(fēng)后善忘”，以及清·葉天士《臨證指南醫(yī)案》 記載“中風(fēng)初起，神呆遺溺”。清代王清任在《醫(yī)林改錯(cuò)》中首先明確了癡呆病位在大腦。國醫(yī)大師孫申田在臨床治療中依據(jù)“凡刺之法，先必本于神”“用針之要，勿忘其神”的理論，倡導(dǎo)防病治病應(yīng)先調(diào)神[10]。腦為“元神之府”，主管人體精神思維活動(dòng)。因此，在調(diào)神治療時(shí)，孫申田常選取“情感區(qū)”進(jìn)行針刺，對焦慮、抑郁及各種認(rèn)知功能障礙均有較好的療效[7，11]。“情感區(qū)”是孫申田教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，開創(chuàng)的特定功能區(qū)?！扒楦袇^(qū)”在解剖學(xué)上的體表投影位于大腦額極，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，該部位與神志疾病有密切聯(lián)系，其中包括記憶力、精神狀態(tài)、情感表達(dá)、定向力、注意力等[7]。

本研究通過水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：定位航行實(shí)驗(yàn)中，治療組大鼠的逃避潛伏期以及游泳路程較模型組明顯縮短（P＜0.05）；在空間探索實(shí)驗(yàn)中，治療組大鼠跨越平臺次數(shù)及穿越目標(biāo)象限時(shí)間較模型組明顯增加（P＜0.05）。Morris 水迷宮主要針對大腦皮層和海馬記憶為主，屬于海馬依賴式記憶范疇[12]。這表明電針一定程度上改善了VD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。HE染色結(jié)果亦表明，電針“情感區(qū)”治療可以改善VD大鼠海馬區(qū)受損細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)，起到改善VD病情的作用。

正虛為本，邪實(shí)為標(biāo)，清竅閉塞，神志失常為本病的主要病機(jī)。中風(fēng)后氣血逆亂，病理產(chǎn)物堆積，邪阻腦絡(luò)，絡(luò)損神傷，易“諸邪蒙竅”，如炎癥因子。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，隨著缺血性腦卒中的面積逐漸增加，抗炎因子分泌逐漸減少，促炎因子分泌增多[13]。相關(guān)研究[14-15]發(fā)現(xiàn)，TNF-α和TGF-β在VD所引起的認(rèn)知功能減退中起重要作用。TNF-α 是一種單核細(xì)胞因子，主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，是激活細(xì)胞因子級聯(lián)反應(yīng)的主要物質(zhì)，較早產(chǎn)生于大量感染或非感染性炎癥性疾病中并誘發(fā)“次級”細(xì)胞因子如IL-1、IL-6、 IL-8 等的產(chǎn)生，由此誘發(fā)炎癥連鎖反應(yīng)[16]。Belkhelfa 等[17]通過研究 VD 患者大腦海馬組織發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IL-1β的水平明顯高于健康對照組，而且這些促炎因子的產(chǎn)生是由β-淀粉樣蛋白與小膠質(zhì)細(xì)胞表面的Toll-樣受體4 結(jié)合所觸發(fā)。這些細(xì)胞因子又會反過來作用于小膠質(zhì)細(xì)胞，使其具有細(xì)胞毒性，誘導(dǎo)神經(jīng)退行性改變[18]。

TGF-β 是一種多功能蛋白質(zhì)，在哺乳動(dòng)物中有3 個(gè)亞型（TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3），可影響多種細(xì)胞的生長、分化、細(xì)胞凋亡及免疫調(diào)節(jié)[17]。TGF-β1 具有調(diào)節(jié)免疫與炎癥反應(yīng)、保護(hù)神經(jīng)元，抗細(xì)胞凋亡、促進(jìn)受損神經(jīng)細(xì)胞修復(fù)等作用[19]。在神經(jīng)元缺血性疾病中，TGF-β可激發(fā)神經(jīng)元活性，刺激炎癥介質(zhì)釋放與合成[20]。Tarkowski等[21]研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，在阿爾茨海默?。ˋD）及VD 患者中TGF-β 水平明顯升高，且腦脊液中TNF-α與TGF-β水平顯著相關(guān)，表明TGF-β的產(chǎn)生可能在某種程度上是由TNF-α 引發(fā)的，TGF-β發(fā)揮抗炎作用。Chen等[22]研究表明，TGF-β1可抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和T 細(xì)胞介導(dǎo)神經(jīng)炎癥反應(yīng)，從而減輕AD相關(guān)的神經(jīng)退化程度。本研究通過免疫組織化學(xué)、ELISA 和Western Blot 不同實(shí)驗(yàn)方法檢測了TNF-α 和TGF-β 水平，發(fā)現(xiàn)與模型組比較，治療組海馬體內(nèi)TNF-α 表達(dá)水平降低，TGF-β 表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明電針“情感區(qū)”可以一定程度上下調(diào)TNF-α 及上調(diào)TGF-β 的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)。在一定程度上體現(xiàn)了祛邪通絡(luò)、調(diào)神開竅的功效。

綜上所述，本研究從多角度證實(shí)電針“情感區(qū)”可以改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力以及減輕神經(jīng)元損傷，保護(hù)CA1 區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)，減少海馬體TNF-α 蛋白表達(dá)，增加TGF-β 蛋白表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，起到保護(hù)腦神經(jīng)元的作用。