PEAR1、PTGS1基因多態(tài)性與缺血性腦卒中患者復(fù)發(fā)的相關(guān)性

繆 陽 孟中如 卞海林 王紅霞

江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院藥學部，江蘇鹽城 224000

缺血性腦卒中是我國致死率最高的疾病之一，復(fù)發(fā)率高達17.7%，極大的威脅人民健康[1]。目前各國循證指南[2-3]均推薦阿司匹林等抗血小板藥物作為缺血性卒中二級預(yù)防的重要策略，然而實踐發(fā)現(xiàn)阿司匹林抵抗（aspirin resistance，AR）會顯著降低抗血小板治療的療效，提高缺血性卒中復(fù)發(fā)的風險[4]。血小板內(nèi)皮聚集受體1（platelet-endothelial aggregation receptor 1，PEAR1）和前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1（prostaglandin-endoperoxide synthase 1，PTGS1）等 基因多態(tài)性不僅是導致AR的重要因素，還會引起抗血小板療效的差異[5-6]，但其與缺血性腦卒中復(fù)發(fā)的直接關(guān)聯(lián)尚不完全清楚[7]。為此，本研究回顧性分析我院缺血性腦卒中患者中PEAR1、PTGS1基因型的分布情況，并探討基因多態(tài)性與腦卒中復(fù)發(fā)之間的關(guān)聯(lián)性，以期能通過開展用藥前藥物基因組學檢測，指導臨床用藥決策，預(yù)防或減少腦卒中復(fù)發(fā)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇鹽城市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2018年7月至2021年6月315例住院患者進行單中心、回顧性病例對照研究。以入院時既往是否發(fā)生過腦卒中將患者分為兩組：首發(fā)缺血性腦卒中組243例、復(fù)發(fā)缺血性腦卒中組72例。復(fù)發(fā)缺血性腦卒中組病例為既往有缺血性腦卒中病史，規(guī)律服用阿司匹林預(yù)防（每天1片，100 g/片，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國藥準字J20171021），再次出現(xiàn)遺留神經(jīng)功能缺損癥狀加重或新發(fā)神經(jīng)功能缺損癥狀，此次入院頭顱CT或MRI顯示存在新病灶的患者（CT結(jié)果有臨床影像一致的描述；MRI有責任病灶DWI高信號/ADC低信號的證據(jù)）。本研究經(jīng)鹽城市第一人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會通過。

納入標準：患者年齡≥18 歲，具有缺血性腦卒中相應(yīng)體征，且經(jīng)腦CT或MRI確診符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》[8]中診斷標準；均接受PEAR1和PTGS1基因型檢測。排除標準：心源性或出血性腦梗死患者；阿司匹林過敏患者；接受免疫抑制劑、抗凝藥物治療或服用影響血小板功能類藥物者；有惡性腫瘤，血液疾病，癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病或消化性潰瘍病史者；有急慢性感染性疾病以及嚴重心、肝、腎等多臟器功能障礙或衰竭者。收集年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史、既往史以及并發(fā)癥等資料。

1.2 檢測方法

采集2 ml患者靜脈外周血，置于EDTA抗凝管中進行檢測（PCR-熒光探針法）。取適量通用樣本稀釋液加入待測樣本中充分混合后備用。取2 μl待測樣本的稀釋液、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品，分別加入裝有3種PCR反應(yīng)液的反應(yīng)管中，37℃溫浴3 min后6000 rpm離心40 s，再次渦旋3 s混勻，然后6000 rpm離心5 s后將反應(yīng)管放置在Fascan48E儀器上進行測序。基因檢測采用西安天隆科技有限公司的Fascan 48E多通道熒光定量分析儀及配套測序反應(yīng)通用試劑盒。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布的計量資料采用均值±標準差（）表示，不符合者采用中位數(shù)及四分位數(shù)間距[M（P25，P75）]表示；計數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料比較符合正態(tài)分布者采用獨立樣本t檢驗，不符合者采用秩和檢驗；采用logistic回歸模型進行多因素分析。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床資料單因素分析

兩組組比較，BMI、性別、高血壓病、糖尿病、冠心病、吸煙及飲酒史、TC、TG、HDL-C、Hcy、血小板等比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。但復(fù)發(fā)組平均年齡和D-二聚體顯著高于首發(fā)組，LDL-C顯著小于首發(fā)組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 兩組患者單因素分析表

2.2 PEAR1和PTGS1基因的分布特征

315例缺血性腦卒中患者中， PEAR1等位基因變異發(fā)生率為34.92%；PTGS1等位基因變異發(fā)生率為25.87%。經(jīng)χ2檢驗，發(fā)現(xiàn)各基因型分布頻率均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞ 0.05），說明樣本具有群體代表性。見表2。

表2 PEAR1和PTGS1基因多態(tài)性頻率分布

2.3 PEAR1和PTGS1基因多態(tài)性比較

PEAR1基因多態(tài)性的分布在兩組之間差異有統(tǒng)計學意義（P=0.031），復(fù)發(fā)組中野生型GG占比29.16%，雜合突變性GA占比54.17%，純合突變型AA占比16.67%；首發(fā)組中GG占比44.03%，GA占比47.33%，AA占比8.64%。野生型GG/突變型（GA+AA）在兩組間分布差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.089，P=0.024）。見表3。PTGS1基因多態(tài)性的分布在兩組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05），復(fù)發(fā)組中野生型AA占比51.39%，雜合突變型AG占比38.89%，純合突變型GG占比9.72%；首發(fā)組中AA占比58.44%，AG占比33.33%，GG占比8.23%。

表3 PEAR1和PTGS1基因型分布及等位基因比較

2.4 相關(guān)因素分析

以是否再發(fā)缺血性腦卒中為因變量，以單因素分析中有顯著差異的3個因素（年齡、D-二聚體、LDL-C）及PEAR1突變（GA+AA）為自變量，進行相關(guān)因素的logistic回歸分析，得到年齡（OR=1.028）、D-二聚體（OR=1.170）、LDL-C（OR=0.642）是缺血性卒中復(fù)發(fā)的獨立相關(guān)因素，見表4。

表4 再發(fā)缺血性腦卒中相關(guān)因素的logistic回歸分析

3 討論

根據(jù)文獻報道，年齡、性別、有吸煙或飲酒史、冠心病、遺傳因素以及血壓、血糖、血脂、同型半胱氨酸水平升高等都是影響缺血性腦卒中復(fù)發(fā)的相關(guān)因素[9]。本研究分析結(jié)果表明年齡、D-二聚體、LDL-C是缺血性腦卒中患者復(fù)發(fā)的獨立相關(guān)因素。但復(fù)發(fā)組低LDL-C水平與既往研究中缺血性腦卒中復(fù)發(fā)的已知危險因素相矛盾[10]，這可能由于本研究中復(fù)發(fā)組患者入院前大多服用降脂藥進行卒中二級預(yù)防有關(guān)。

近年來研究證實再發(fā)缺血性腦卒中的獨立危險因素之一就是AR，而PEAR1、PTGS1等基因多態(tài)性會影響蛋白的結(jié)構(gòu)或構(gòu)象，使得阿司匹林抗血小板作用在不同個體間產(chǎn)生差異，誘發(fā)AR，進而導致患者再發(fā)缺血性腦卒中[4-6]。PEAR1是一種血小板跨膜蛋白，參與血小板激活及血栓形成，其磷酸化加強了GPIIb/IIIa纖維蛋白原受體的激活，從而促進血小板聚集。研究表明，PEAR1基因與血小板功能及抗血小板藥物的作用都有很強的相關(guān)性[11]，突變基因型GG是AR的危險因素[12]。本研究結(jié)果顯示復(fù)發(fā)的缺血性腦卒中患者中PEAR1突變型（GA+AA）比例顯著高于首發(fā)患者（P＜ 0.05），但多因素回歸分析結(jié)果顯示PEAR1突變對缺血性腦卒中復(fù)發(fā)的影響無統(tǒng)計學意義（P＞ 0.05）。一方面可能由于本研究納入的樣本量有限，另一方面原因可能是PEAR1基因多態(tài)性會影響AR發(fā)生，但與缺血性腦卒中復(fù)發(fā)并無直接關(guān)聯(lián)。

阿司匹林通過抑制環(huán)氧合酶-1（COX-1）的作用，而COX-1主要由PTGS1基因編碼，從而減少花生四烯酸轉(zhuǎn)化為血栓素（TX）A2，阻斷血小板的聚集?；诩韧鵓TGS1基因的研究，其突變與AR發(fā)生相關(guān)[13-14]，也與心肌梗死的復(fù)發(fā)有顯著關(guān)聯(lián)性[15]。本研究通過比較首發(fā)及復(fù)發(fā)腦卒中患者的PTGS1各基因型的分布，結(jié)果表示兩組間無顯著差異，且分布頻率均符合Hardy-Weinberg平衡，說明樣本具有群體代表性，所以PTGS1基因多態(tài)性與缺血性卒中復(fù)發(fā)無關(guān)聯(lián)性。腦卒中復(fù)發(fā)是多種危險因素交互作用下的結(jié)果，各因素相互之間有協(xié)同或拮抗作用。PTGS1突變對AR的作用可能為其他因素拮抗，導致其與腦卒中復(fù)發(fā)不相關(guān)。

總之，本研究中缺血性腦卒中患者基因多態(tài)性發(fā)現(xiàn)大部分患者PEAR1和PTGS1基因為野生型，且復(fù)發(fā)患者中PEAR1基因突變型（GA+AA）顯著高于首發(fā)患者。但PEAR1和PTGS1基因突變與缺血性腦卒中復(fù)發(fā)無統(tǒng)計學相關(guān)性，可能由于導致缺血性腦卒中的再發(fā)因素較為復(fù)雜，未來需要大規(guī)模的研究進一步驗證。