靈仙新苷對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡和自噬的影響

李納平 ，涂杜鑫 ，鄺高艷 ，劉鑫 ，譚旭儀 ，曾凡 ，盧敏

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410011； 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410006

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是中老年人群常見的慢性退行性關(guān)節(jié)疾病，其病理特征主要包括關(guān)節(jié)軟骨退變、滑膜炎癥、軟骨下骨硬化、大量骨贅生成等[1-2]。在OA好發(fā)部位中，膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）發(fā)病率最高，其次是手關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)炎，我國(guó)中老年人群KOA發(fā)病率為8.1%，且有不斷升高趨勢(shì)[3-4]。

關(guān)節(jié)軟骨退變被認(rèn)為是KOA發(fā)病最關(guān)鍵的機(jī)制，軟骨細(xì)胞通過維持細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）合成與降解的動(dòng)態(tài)平衡，從而在潤(rùn)滑關(guān)節(jié)、維持關(guān)節(jié)軟骨機(jī)械形態(tài)方面發(fā)揮重要作用[5]，軟骨細(xì)胞凋亡會(huì)打破關(guān)節(jié)軟骨合成與降解的穩(wěn)態(tài)平衡。自噬是細(xì)胞維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵機(jī)制，細(xì)胞通過自噬降解和再利用細(xì)胞中衰老的細(xì)胞器和大分子物質(zhì)，從而避免直接死亡。研究發(fā)現(xiàn)，軟骨細(xì)胞自噬和KOA發(fā)生密切相關(guān)，通過激活自噬可以減少軟骨細(xì)胞凋亡，延緩關(guān)節(jié)軟骨退變[6-7]。中醫(yī)藥治療KOA具有多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，且不良反應(yīng)少，能有效緩解KOA癥狀，延緩軟骨退變[8]。

中藥威靈仙為毛茛科植物威靈仙Clematis chinensisOsbeck、棉團(tuán)鐵線蓮Clematis hexapetalaPall.或東北鐵線蓮Clematis manshuricaRupr.的干燥根和根莖，具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、止痹痛作用[9]，其三萜皂苷類成分在治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和KOA方面具有一定療效[10]，能通過抑制軟骨細(xì)胞凋亡[11]，維持ECM穩(wěn)定[12]，從而延緩KOA關(guān)節(jié)軟骨退變。靈仙新苷（clematichinenoside AR，C-AR）是從威靈仙中提取的一種三萜皂苷，具有抗炎鎮(zhèn)痛作用，能將關(guān)節(jié)炎大鼠血清和尿液24種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)標(biāo)志物調(diào)至正常水平，緩解關(guān)節(jié)炎癥狀[13]，并可通過激活自噬減輕氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥[14]。但其能否治療KOA目前尚無報(bào)道。基于此，本研究觀察C-AR對(duì)KOA軟骨細(xì)胞凋亡和自噬的影響，為KOA治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

KOA關(guān)節(jié)軟骨樣本來自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院四肢關(guān)節(jié)科2021年1月－2021年12月接受全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的KOA患者。共14名患者，其中女性11名，男性3名，平均年齡（69.71±6.28）歲。本研究經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)（HNLL-2021-006-01），并獲得所有患者書面知情同意。

1.2 主要試劑與儀器

靈仙新苷，貨號(hào)L-151，成都瑞思芬；DEME/F12、胎牛血清（FBS），貨號(hào)分別為11330032、10099，美國(guó)Gibco公司；活性氧（ROS）試劑盒、胰蛋白酶，貨號(hào)分別為S0033S、C0201，上海碧云天；Ⅱ型膠原酶，貨號(hào)9001-12-1，美國(guó)Sigma公司；白細(xì)胞介素（IL）-1β，貨號(hào)200-01B，美國(guó)Peprotech公司；IL-6、IL-8 ELISA檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)分別為CSBE04638h、CSB-E04641h，武漢華美生物工程；BCA蛋白定量試劑盒，貨號(hào)10030908，長(zhǎng)沙艾碧維；PBS、RIPA裂解液，貨號(hào)分別為G4202、G2002，武漢賽維爾；CCK8試劑盒，貨號(hào)NU679，日本同仁；Trizol總RNA提取試劑，貨號(hào)15596026，美國(guó)Thermo；HiFiScript cDNA Synthesis Kit，貨號(hào)CW2569，北京康為生物；甲苯胺藍(lán)染液，貨號(hào)BL539A，北京索萊寶；DAPI染色液，貨號(hào)C02-04002，北京Bioss；Ⅱ型膠原一抗，貨號(hào)AF0135，美國(guó)Affinity Biosciences；Bax、Caspase-3、Beclin1、LC3B一抗，貨號(hào)分別為50599-2-Ig、19677-1-AP、11306-1-AP、18725-1-AP，美國(guó)Proteintech；Bcl-2一抗，貨號(hào)ab59348，英國(guó)Abcam；HRP-goat anti-mouse IgG、HRP-goat antirabbit IgG，貨號(hào)分別為SA00001-1、SA00001-2，美國(guó)Proteintech。SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)，江蘇蘇凈；HERAcell2401二氧化碳培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo；XDS-3倒置生物顯微鏡，上海奧顯；Enspire多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Perkinelmer；LSM800激光掃描共聚焦顯微鏡，德國(guó)蔡司；Aria Ⅱ流式細(xì)胞儀，美國(guó)BD；MB-530酶標(biāo)儀，深圳匯松。

1.3 細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定

參考文獻(xiàn)[15]采用二步酶消化法提取軟骨細(xì)胞，將軟骨組織剪碎，加入0.25%胰蛋白酶，放入37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱消化30 min，加入完全培養(yǎng)基（79% DMEM/F12+20% FBS+1%雙抗）終止消化。將軟骨組織轉(zhuǎn)移至離心管，1 200 r/min離心5 min，棄上清液，加入與軟骨組織等體積的0.2% Ⅱ型膠原酶，轉(zhuǎn)移至無菌玻璃瓶，置于培養(yǎng)箱消化20 h。用70 μm細(xì)胞過濾器過濾，濾液1 200 r/min離心5 min，去除上清液，沉淀即為軟骨細(xì)胞。用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至培養(yǎng)瓶，3～5 d換液1次，待細(xì)胞鋪滿瓶底80%以上后進(jìn)行傳代。取P1代細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)及Ⅱ型膠原免疫熒光染色鑒定。

1.4 分組、造模及給藥

將軟骨細(xì)胞按1×105個(gè)/孔接種至6孔板，加入完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。將細(xì)胞分為對(duì)照組、模型組和C-AR組，每組4個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組正常培養(yǎng)，模型組參考課題組前期方法[16]加入10 ng/mL IL-1β處理24 h，C-AR組參照文獻(xiàn)[17]方法，先加入30 μmol/L C-AR預(yù)處理1 h，然后加入10 ng/mL IL-1β處理24 h。

1.5 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力

將軟骨細(xì)胞以1×104個(gè)/孔接種至96孔板，使用完全培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后換成無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h，按“1.4”項(xiàng)下方法分組并進(jìn)行干預(yù)，吸去培養(yǎng)基，每孔加入100 μL CCK8工作液（用PBS按1∶9稀釋），放入培養(yǎng)箱避光孵育2 h，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)各孔吸光度（OD值）。

1.6 ELISA檢測(cè)

將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后，吸去培養(yǎng)基，加入預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入PBS，超聲破碎細(xì)胞，4 ℃、3 000 r/min離心5 min，取上清液，根據(jù)ELISA試劑盒說明書檢測(cè)細(xì)胞IL-6和IL-8含量。

1.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧含量

按“1.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞后，PBS洗滌細(xì)胞2次，加入10 μmol/L DCFH-DA，37 ℃孵育20 min，無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，收集細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS含量。

1.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

按“1.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞后，胰蛋白酶消化細(xì)胞，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，2 000 r/min離心5 min，沉淀用PBS洗滌2次，每次洗滌后2 000 r/min離心5 min，向樣品中加入結(jié)合緩沖液490 μL、Annexin V-FITC 5 μL和碘化丙啶5 μL，室溫避光反應(yīng)10 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.9 Western blot檢測(cè)

將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后，吸去培養(yǎng)基，加入RIPA裂解液提取蛋白，使用BCA蛋白試劑盒測(cè)定蛋白濃度。蛋白進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入Bax一抗（1∶5 000）、Caspase-3一抗（1∶1 000）、Bcl-2一抗（1∶500）、Beclin1一抗（1∶1 000）、LC3B一抗（1∶500），4 ℃孵育過夜。加相應(yīng)二抗，室溫孵育90 min，ECL發(fā)光液顯影，凝膠成像系統(tǒng)成像。用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.10 qRT-PCR檢測(cè)

將細(xì)胞按“1.4”項(xiàng)下方法處理后，吸去培養(yǎng)基，用總RNA提取試劑盒提取總RNA，根據(jù)HiFiScript cDNA Synthesis Kit，以總RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，SYBR法對(duì)樣品進(jìn)行qRT-PCR。以β-actin為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析。引物序列見表1。

表1 各基因PCR引物序列

1.11 免疫熒光檢測(cè)

將爬片放入6孔板中，以1×105個(gè)/孔接種細(xì)胞，按“1.4”項(xiàng)下方法處理。4%多聚甲醛固定30 min，加入0.3%Triton X-100，37 ℃通透15 min，5% BSA 37 ℃封閉10 min，加入LC3B一抗（1∶100），4 ℃孵育過夜。滴加山羊抗兔IgG（1∶100），室溫避光孵育20 min，DAPI工作溶液染細(xì)胞核，抗熒光淬滅封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察并拍照，用Image-Pro Plus 6.0軟件計(jì)算熒光強(qiáng)度。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Graphpad Prism 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 軟骨細(xì)胞鑒定

初期軟骨細(xì)胞呈不規(guī)則多角形或短梭形，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，形態(tài)多呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，細(xì)胞間有偽足相連，形態(tài)似成纖維細(xì)胞。甲苯胺藍(lán)染色可見胞漿呈淺藍(lán)色，細(xì)胞核為深藍(lán)色。Ⅱ型膠原免疫熒光染色顯示，胞漿及胞膜呈綠色熒光，表明培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)特征性Ⅱ型膠原，細(xì)胞核被DAPI復(fù)染，呈藍(lán)色。見圖1。

圖1 人KOA軟骨細(xì)胞形態(tài)觀察及鑒定（×200）

2.2 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞活力的影響

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞活力顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞活力顯著升高（P<0.05）。結(jié)果見表2。

表2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞活力比較（±s）

表2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞活力比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05

組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4細(xì)胞活力1.60±0.07 0.97±0.04**1.31±0.04#

2.3 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞IL-6和IL-8含量顯著增加（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞IL-6和IL-8含量顯著減少（P<0.05）。結(jié)果見表3。

表3 各組軟骨細(xì)胞IL-6和IL-8含量比較（±s，pg/mL）

表3 各組軟骨細(xì)胞IL-6和IL-8含量比較（±s，pg/mL）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05

組別對(duì)照組模型組C-AR組n4 4 4 IL-6 23.87±4.62 44.01±3.68**33.25±6.10#IL-8 57.79±5.48 97.10±6.26**83.92±3.68#

2.4 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞活性氧含量及凋亡率的影響

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞ROS含量顯著增加，凋亡率顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞ROS含量顯著減少，凋亡率顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見圖2、圖3、表4。

圖2 各組軟骨細(xì)胞ROS檢測(cè)

圖3 各組軟骨細(xì)胞凋亡率檢測(cè)

表4 各組軟骨細(xì)胞ROS含量和凋亡率比較（±s）

表4 各組軟骨細(xì)胞ROS含量和凋亡率比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01

組別對(duì)照組模型組C-AR組n4 4 4 ROS熒光強(qiáng)度1 292±241.7 6 197±154.3**3 410±135.7##凋亡率/%4.19±0.26 25.86±0.59**17.35±0.97##

2.5 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01）。結(jié)果見圖4、表5。

表5 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)比較（±s）

表5 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01

組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4 Bax/β-actin 0.24±0.03 0.57±0.03**0.32±0.03##Bcl-2/β-actin 0.55±0.03 0.15±0.03**0.30±0.03##Caspase-3/β-actin 0.19±0.02 0.54±0.06**0.32±0.05##

圖4 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白免疫印跡

2.6 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)mRNA表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞Bax和Caspase-3 mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.01），Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞Bax和Caspase3 mRNA表達(dá)顯著降低（P<0.01），Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.01）。結(jié)果見表6。

表6 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表達(dá)比較（±s）

表6 各組軟骨細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表達(dá)比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01

組別對(duì)照組模型組C-AR組n 4 4 4 Bax 1.00±0.06 5.33±0.29**2.84±0.35##Bcl-2 1.00±0.06 0.26±0.01**0.55±0.06##Caspase-3 1.00±0.07 3.49±0.21**2.12±0.21##

2.7 靈仙新苷對(duì)軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞Beclin1蛋白表達(dá)和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞Beclin1蛋白表達(dá)和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值顯著升高（P<0.01）。免疫熒光結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞LC3B表達(dá)顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，C-AR組細(xì)胞LC3B蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01）。結(jié)果見圖5、圖6、表7。

圖5 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白免疫印跡

圖6 各組軟骨細(xì)胞LC3B陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，標(biāo)尺＝25 μm）

表7 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白表達(dá)比較（±s）

表7 各組軟骨細(xì)胞Beclin1、LC3B蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01，與模型組比較，##P<0.01

組別對(duì)照組模型組C-AR組Beclin1/β-actin 0.43±0.04 0.24±0.03**0.38±0.02##LC3BⅡ/LC3BⅠ2.22±0.06 0.42±0.03**0.93±0.04##LC3B熒光強(qiáng)度67 452±2 138 44 023±2 371**57 225±1 563##

3 討論

威靈仙是治療風(fēng)濕痹痛的要藥。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，威靈仙提取物及有效成分在治療KOA方面均能發(fā)揮積極作用[18]。馬勇等[19]運(yùn)用威靈仙提取物對(duì)體外培養(yǎng)的兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)其能促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 mRNA的表達(dá)，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨產(chǎn)生保護(hù)作用，從而延緩KOA發(fā)展。此外，威靈仙提取物還能促進(jìn)軟骨細(xì)胞ECM合成，維持軟骨細(xì)胞表型穩(wěn)定[20]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在獨(dú)活寄生湯基礎(chǔ)上加入威靈仙、黃芩等藥物能降低KOA兔血清及關(guān)節(jié)液炎癥因子表達(dá)，緩解軟骨退變[21]。體外實(shí)驗(yàn)?zāi)芡ㄟ^調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡[22]。

C-AR作為威靈仙中一種三萜皂苷類成分，在抗炎、抗氧化應(yīng)激方面具有一定作用。炎癥反應(yīng)貫穿KOA發(fā)病過程，促炎因子如IL-1β、腫瘤壞死因子（TNF）-α等在KOA發(fā)病過程中大量釋放，導(dǎo)致產(chǎn)生疼痛。軟骨細(xì)胞異常的氧化應(yīng)激狀態(tài)也會(huì)誘發(fā)炎癥因子產(chǎn)生[10]，從而進(jìn)一步加速軟骨細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，C-AR能降低TNF-α刺激下MH7A細(xì)胞IL-6和IL-8分泌，減少基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生，有效拮抗TNF-α誘導(dǎo)的炎癥和細(xì)胞毒性[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，IL-1β刺激導(dǎo)致軟骨細(xì)胞活力降低，細(xì)胞IL-6和IL-8含量明顯增加，氧化應(yīng)激水平也隨之升高，細(xì)胞凋亡率明顯升高。C-AR處理后，軟骨細(xì)胞活力升高，細(xì)胞IL-6和IL-8含量明顯減少，氧化應(yīng)激水平和細(xì)胞凋亡率明顯降低，促凋亡Bax、Caspase-3基因和蛋白表達(dá)下調(diào)，抗凋亡Bcl-2基因和蛋白表達(dá)上調(diào)。提示C-AR可減輕體外培養(yǎng)的KOA軟骨細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡。

自噬可恢復(fù)受損軟骨細(xì)胞功能，減少軟骨細(xì)胞凋亡，延緩KOA發(fā)生發(fā)展[23]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，牛膝多糖能促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)，抑制凋亡相關(guān)蛋白Fadd、Caspase-3/9表達(dá)，降低軟骨細(xì)胞凋亡率[24-25]，提示可通過促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬抑制軟骨細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，C-AR組軟骨細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3B表達(dá)及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值升高，表明C-AR能促進(jìn)自噬發(fā)生。結(jié)合細(xì)胞凋亡率可見，軟骨細(xì)胞凋亡與自噬水平呈負(fù)相關(guān)，隨著自噬增強(qiáng)，凋亡進(jìn)一步減弱。

綜上所述，C-AR可減輕體外培養(yǎng)的KOA軟骨細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制軟骨細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與激活自噬有關(guān)。本研究初步觀察了C-AR對(duì)KOA軟骨細(xì)胞自噬和凋亡的影響，對(duì)其通過哪些途徑激活自噬、抑制細(xì)胞凋亡及量效關(guān)系尚未明確，今后我們將繼續(xù)深入研究，為防治KOA提供更多依據(jù)。