酶聯(lián)免疫吸附法檢測EB病毒兩種抗體(VCA-IgM,EA-IgG)在兒童不明原因發(fā)熱診斷中的意義

趙洪秋 內(nèi)蒙古赤峰市松山醫(yī)院檢驗科 （內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

內(nèi)容提要： 目的：研究針對兒童不明原因發(fā)熱EB病毒（EBV）的兩種抗體VCA-IgM和EA-IgG的診斷價值。方法：選擇2020年2月～2021年2月本院收治的63例不明原因發(fā)熱患兒進(jìn)行研究，另選擇同期幼兒園健康體檢中的60例正常兒童作為對照組，運用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測患兒血清樣本中的EBV抗體。結(jié)果：①63例患兒的EA-IgG抗體均顯示為陰性。4例傳染性單核細(xì)胞增多癥的患兒VCA-IgM抗體均顯示為陽性，其他均為陰性；②傳染性單核細(xì)胞增多癥組患兒的異淋比例、轉(zhuǎn)氨酶活性水平升高幅度明顯高于對照組、上呼吸道感染組、其他疾病組，組間差異顯著（P＜0.05）；急性肝炎組轉(zhuǎn)氨酶活性水平明顯高于其他四組，組間差異顯著（P＜0.05）；③傳染性單核細(xì)胞增多癥組、上呼吸道感染組、急性肝炎組和其他疾病組的白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、EOS水平與對照組相近，組間比較無顯著差異（P＞0.05）；各組間比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：EBV的兩種抗體均能夠動態(tài)反映出EB感染后的抗體水平，具有高度敏感性和特異性，且檢測實操方便簡單，可將其作為診斷兒童不明原因發(fā)熱的重要診斷方式。

傳染性單核細(xì)胞增多癥是一種單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)急性增生性傳染病，它主要是由于EB病毒感染以后造成的臨床表現(xiàn)，表現(xiàn)為疲勞、高燒、咽喉疼痛、頭痛、淋巴結(jié)腫大、皮疹等，是導(dǎo)致兒童長期發(fā)熱的主要原因[1]。傳染性單核細(xì)胞增多癥通常需根據(jù)臨床典型表現(xiàn)、外周血異型淋巴細(xì)胞的增多和嗜異性抗體凝集試驗的陽性結(jié)果進(jìn)行判定。而抗EBV衣殼抗原IgM抗體為陽性始終是EBV相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥的主要診斷依照[2]。但臨床發(fā)現(xiàn)部分患者會出現(xiàn)抗EBV-CA-IgM的延遲現(xiàn)象，其在感染EBV后EBV-CAIgM仍顯示陰性。因此，臨床在僅有單份檢測血清情況時，只將抗EBV-CA-IgM陽性作為判定EBV相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥的標(biāo)準(zhǔn)并不嚴(yán)謹(jǐn)。因VCA-IgM抗體、EA-IgG抗體會在EBV急性感染的晚期和復(fù)發(fā)性感染的早期出現(xiàn)，所以將VCA-IgM和EA-IgG兩種抗體進(jìn)行聯(lián)合檢測能夠顯著提升EBV感染的敏感性和特異性?；诖?，筆者選取院內(nèi)診治的不明原因發(fā)熱患兒63例，采用酶聯(lián)免疫吸附檢測患兒血清樣本中抗體，以此為依據(jù)診斷EBV感染，現(xiàn)將具體報告展示如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

本組研究對象共計63例，均為本院2020年2月～2021年2月間就診的不明原因發(fā)熱患兒，所有患兒均符合傳染性單核細(xì)胞增多癥的判定標(biāo)準(zhǔn)，其中男性41例，女性22例，患兒年齡4個月～11歲，平均（3.12±1.01）歲，3歲以下患兒33例，3～7歲18例，8歲及以上的患兒12例。其中，48例上呼吸道感染，占比76.19%（48/63）；4例傳染性單核細(xì)胞增多癥，占比6.35%（4/63）；3例支原體感染性肺炎，占比4.76%（3/63）；此外出現(xiàn)1例淋巴結(jié)炎1.59%（1/63）；2例肺癌3.17%（2/63）；2例肝炎3.17%（2/63）；2例腎病綜合癥3.17%（2/63）；1例急性化膿性扁桃體炎1.59%（1/63）。對照組選自幼兒園健康體檢中的60例兒童，其中男性36例，女性24例，年齡3個月～6歲。兩組患兒基本資料組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

于清晨空腹采集患兒靜脈血5mL，普通采血管抽取3mL，EDTA-K2管抽取2mL，馬上拌勻。兩種抗體均采用ELISA法進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。EDTA-K2管的血清樣本需在2h內(nèi)完成血液的常規(guī)分析。血常規(guī)的儀器選擇的是日本sysmex XE-2100型號的全自動血細(xì)胞分析儀和血涂片顯微鏡進(jìn)行異型淋巴細(xì)胞的比例計算，而檢測肝功能的儀器為日本OLMPUS AU-640型號的全自動生化分析儀。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患者兩種抗體VCA-IgM和EA-IgG檢測結(jié)果，分析各類型發(fā)熱患兒異淋比例、谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶水平及血常規(guī)檢驗結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

運用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS21.0對本研究進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用%來表示，行χ2檢驗；計量數(shù)據(jù)以x±s的形式體現(xiàn)，行t檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 EB病毒的抗體檢測結(jié)果

63例患兒的EA-IgG抗體均顯示為陰性。4例傳染性單核細(xì)胞增多癥的患兒VCA-IgM抗體均顯示為陽性，其他均為陰性。

2.2 異型淋巴細(xì)胞比例、轉(zhuǎn)氨酶活性水平比較

傳染性單核細(xì)胞增多癥組患兒的異淋比例、谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶升高幅度明顯高于對照組、上呼吸道感染組、其他疾病組，組間差異顯著（P＜0.05）；急性肝炎組谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶水平明顯高于其他四組，組間差異顯著（P＜0.05）；正常對照組、上呼吸道感染組、其他疾病組患兒谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶水平相近，組間比較無顯著差異（P＞0.05），見表1。

表1. 各類型患兒異淋比例、谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶水平比較

2.3 血常規(guī)檢驗結(jié)果

傳染性單核細(xì)胞增多癥組、上呼吸道感染組、急性肝炎組和其他疾病組的白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、EOS水平與對照組相近，組間比較無顯著差異（P＞0.05）；各組間比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2. 各組的血常規(guī)結(jié)果比較

3.討論

EB病毒感染是一種常見的兒科病毒性疾病，病情程度大不相同，癥狀也十分多變，即會表現(xiàn)為典型傳染性單核細(xì)胞增多癥，也會出現(xiàn)其他臨床復(fù)雜表現(xiàn)或隱性的感染[3]。EB病毒感染主要通過密切接觸進(jìn)行傳播，臨床表現(xiàn)為發(fā)燒、咽峽炎、皮疹、淋巴結(jié)腫大以及肝脾腫大。EB病毒感染可以通過檢測EB病毒的VCA-IgM抗體、EA-IgG抗體進(jìn)行診斷，也可以通過檢測EB病毒的DNA確診。急性EB病毒感染通常病程較短且可以治愈，治療方式以對癥支持治療為主。如延誤治療，可轉(zhuǎn)為慢性感染，此時需要給予相應(yīng)的抗病毒藥物進(jìn)行抗病毒治療，否則難以治愈。研究顯示[4]，慢性EB病毒感染還會引發(fā)鼻咽癌和淋巴瘤，臨床危害性較大。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[5]，發(fā)展中國家的EB病毒感染的高發(fā)期兒童年齡普遍在2～6歲，而一些發(fā)達(dá)國家的EB病毒感染高峰期在10～20歲，以青少年最為常見。本次研究結(jié)果顯示，患兒年齡范圍在4個月～11歲，年齡＜3歲的33例（52.38%），3～7歲的18例（28.57%），年齡≥8歲12例（19.05%），符合相關(guān)研究結(jié)論。分析其原因可能與發(fā)展中國家衛(wèi)生條件有關(guān)。

EB病毒容易通過呼吸道進(jìn)行傳播。EB病毒是一群有包膜的DNA病毒，B淋巴細(xì)胞是EB病毒在感染人體后的主要侵入的細(xì)胞，在B淋巴細(xì)胞受EB病毒感染后會表達(dá)一系列的EB病毒特異性抗原分子，從而誘發(fā)機體產(chǎn)生防御反應(yīng)。遭受EB病毒感染之后，最先形成的抗體是EBV殼抗原IgM抗體，然后是IgG類抗體。通常情況下，VCA-IgM抗體在發(fā)病時已然是最高濃度，約1～2周消失，而EA-IgG抗體在發(fā)病時才開始出現(xiàn)，3～5周左右會達(dá)到一個高峰值，然后經(jīng)過3～5周消失。本次研究結(jié)果顯示，63例患兒的EA-IgG抗體均顯示為陰性。4例傳染性單核細(xì)胞增多癥的患兒VCA-IgM抗體均顯示為陽性，其他均為陰性。與相關(guān)研究[6]結(jié)論具有一致性。EBV感染后，VCA-IgM抗體和EA-IgG抗體是按照先后順序出現(xiàn)，因此并不能因為VCA-IgM抗體陰性就否定EBV感染，特別是針對4歲以下的兒童來說，多為初次感染，兩種抗體會在其體內(nèi)2～3個月產(chǎn)生抗體反應(yīng)，從而使不明原因發(fā)熱的相關(guān)性疾病，像傳染性單核細(xì)胞增多癥、腎炎綜合征、肝炎、呼吸道感染等能夠及時得到診斷，制定合理治療方案。

本次研究采用ELISA檢測兩組患兒血清樣本中的EBV抗體水平。ELISA作為一種基本的酶免疫分析方法，開始產(chǎn)生是基于堿性磷酸酯酶標(biāo)記的3 gG測定1gG，后期該方法被逐漸完善。ELISA是基于光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡對抗原定位和進(jìn)行結(jié)構(gòu)的研究，通過酶標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合免疫擴(kuò)散，提高檢測的敏感性，可直接對體液中的可溶性抗原進(jìn)行測定。近年來廣泛應(yīng)用于抗原、抗體以及半抗原檢測。在抗原和半抗原檢查中，如涉及內(nèi)分泌方面檢查則主要進(jìn)行雌性激素，黃體素檢測；如涉及血液學(xué)方面檢查則主要進(jìn)行凝固因子檢測；如涉及腫瘤方面檢查則主要進(jìn)行甲胎蛋白檢測。雖然該檢測方法還無法進(jìn)行常規(guī)診斷，但近年來在傳染病診斷方面顯現(xiàn)巨大優(yōu)勢，如乙型肝炎表面抗原檢測。ELISA具有良好選擇性和較高的靈敏度，能獲得更為客觀、準(zhǔn)確結(jié)果，其快速性、特異性特點已經(jīng)得到臨床醫(yī)學(xué)廣泛認(rèn)可。因此，已經(jīng)廣泛用于兒童不明原因發(fā)熱診斷。

相關(guān)研究顯示[7]，發(fā)熱患兒的外周血異型淋巴細(xì)胞的比例都會出現(xiàn)程度不一的升高，特別是針對患兒本身外周血中的淋巴細(xì)胞的占比相對較高，但僅根據(jù)外周血的形態(tài)鑒別異淋以此作為診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥并不全面，其所表現(xiàn)的敏感性和特異性并不高。有研究顯示[8]，EB病毒感染的血常規(guī)檢測也可以是正常的，不一定會出現(xiàn)明顯的白細(xì)胞或淋巴細(xì)胞升高，或明顯的貧血及血小板減少的情況，特別是針對慢性EB病毒感染而言，鼻咽部或血細(xì)胞中的B淋巴細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞都可以感染EB病毒，此時并未出現(xiàn)明顯的EB病毒血癥，外周血的血象正常，所以血常規(guī)在正常范圍內(nèi)。本次研究結(jié)果顯示，傳染性單核細(xì)胞增多癥組、上呼吸道感染組、急性肝炎組和其他疾病組的白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、EOS水平與對照組相近，組間比較無顯著差異（P＞0.05）；各組間比較差異也無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。因此，臨床中對外周血異淋比例超過6%的患兒，可將ALT或AST檢查、血常規(guī)以及VCA-IgM抗體、EA-IgG抗體結(jié)合進(jìn)行檢測，以此提高診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，EBV兩種抗體（VCA-IgM抗體、EA-IgG抗體）能反映出EB病毒感染后不同時間段的抗體水平，不易造成漏診、誤診事件。而針對8歲以下的患兒，特別是4歲以下，臨床在衡量病毒感染類疾病的同時也要考慮是否為EB病毒感染。EBV兩種抗體對EB病毒感染抗體水平的動態(tài)變化具有較高的敏感性和特異性，且實際操作簡便。