基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討紅花治療缺血性腦卒中的機(jī)制

張玉東 吳仁愿 趙怡 滕飛 何毅 陳沖 王亮 王忠誠(chéng)

(1徐州醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 徐州 221004；2中國(guó)礦業(yè)大學(xué)安全工程學(xué)院；徐州醫(yī)科大學(xué)；3影像學(xué)院；4醫(yī)學(xué)信息學(xué)院；5基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

缺血性腦卒中是由于各種原因引起的腦組織局部供血減少或中斷導(dǎo)致的缺血缺氧性改變，缺血組織出現(xiàn)相應(yīng)區(qū)域神經(jīng)功能缺損癥狀的臨床表現(xiàn)。該病好發(fā)于老年人，男性多于女性。在全球范圍內(nèi)，缺血性腦卒中約占腦卒中總發(fā)生率的84%〔1〕，而腦卒中則是導(dǎo)致死亡的疾病及導(dǎo)致殘疾的主要因素〔2〕。臨床上缺血性腦卒中的治療方案有改善腦血循環(huán)(包括靜脈溶栓、血管內(nèi)治療、抗血小板、抗凝、降纖等)、他汀藥物、神經(jīng)保護(hù)及行為康復(fù)治療，目的是迅速恢復(fù)缺血區(qū)的血供，挽救缺血半暗帶，緩解腦組織缺血缺氧引起的神經(jīng)功能損害癥狀和體征。

中藥在缺血性腦卒中的臨床治療中發(fā)揮重要作用。一些復(fù)方注射液具有活血化瘀、抗血小板聚集、擴(kuò)張血管改善腦微循環(huán)和清除氧自由基等功效，對(duì)缺血性腦卒中治療、預(yù)防及改善患者的神經(jīng)功能損傷〔3〕均有一定的作用。紅花作為一味重要的傳統(tǒng)中藥材，味辛性溫，歸心經(jīng)、肝經(jīng)，具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛等功效，常用于治療痛經(jīng)閉經(jīng)、跌打損傷和缺血性心血管疾病〔4,5〕。紅花含有多種化學(xué)成分，如槲皮素、木脂素、β-谷甾醇、豆甾醇、山奈酚、黃芩苷、羥基紅花黃色素A等。近年來(lái)，對(duì)紅花、羥基紅花黃色素A及紅花黃色素等有效成分的效用、作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制進(jìn)行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)紅花及其有效成分羥基紅花黃色素A具有抗炎癥〔6〕、抗凝〔5，7〕、抗氧化〔8〕、抗腫瘤〔9〕、抗腦缺血再灌注損傷及保護(hù)神經(jīng)元〔10〕等藥理作用，且紅花黃色素被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于治療心絞痛等缺血性心臟病。雖然，臨床上已將紅花注射液應(yīng)用于治療缺血性腦卒中，但總體的機(jī)制還不是很明確。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)構(gòu)建多層次網(wǎng)絡(luò)模型，從整體角度對(duì)中藥進(jìn)行解析，已成為一種科學(xué)解釋中藥有效性和科學(xué)性的新策略。因此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，探討紅花治療缺血性腦卒中的作用靶點(diǎn)和相關(guān)信號(hào)通路，為精確探討其作用機(jī)制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1紅花活性成分及作用靶點(diǎn)篩選 聯(lián)合應(yīng)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php)、中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(BATMAN-TCM，http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/)檢索紅花的所有活性成分，篩選出符合條件〔口服生物利用度(OB)≥30%和類藥性(DL)≥0.18〕的候選化學(xué)成分及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)；結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的紅花有效成分，在有機(jī)小分子生物活性數(shù)據(jù)庫(kù)(PubChem)和中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(BATMAN-TCM)查找羥基紅花黃色素A、紅花黃色素A、紅花黃色素B、紅花醌苷A、紅花醌苷B、脫水紅花黃色素B、紅花素、紅花酮和6-羥基山奈酚等成份的化學(xué)結(jié)構(gòu)和預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。最后，借助 UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.uniprot.org)查詢靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)基因名的簡(jiǎn)稱。

1.2缺血性腦卒中疾病靶點(diǎn)篩選 GeneCards(https：//www.genecards.org)和OMIM(https：//www.omim.org)數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)置檢索詞為“ischemic stroke”和“ischemia reperfusion injury”，檢索缺血性腦卒中疾病相關(guān)靶點(diǎn)，并應(yīng)用 Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.uniprot.org)對(duì)疾病靶點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，獲得 Swiss-Prot ID。

1.3紅花活性成分作用靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)的交集篩選 應(yīng)用 R 語(yǔ)言軟件(版本3.6.1)及 Perl 語(yǔ)言程序(版本5.34.0)將疾病靶點(diǎn)與藥物靶點(diǎn)取交集，得到紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)。

1.4紅花活性成分-缺血性腦卒中-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用Cytoscape3.7.1軟件的merge功能構(gòu)建紅花活性成分-缺血性腦卒中-靶點(diǎn)(基因)網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)圖中“node”代表活性成分和靶點(diǎn)，“edge”代表活性成分-缺血性腦卒中-靶點(diǎn)之間的相互關(guān)系。基于構(gòu)建的網(wǎng)絡(luò)探討紅花治療缺血性腦卒中的潛在機(jī)制。

1.5蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將1.3中得到的紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)導(dǎo)入 String(https：//string-db.org/)數(shù)據(jù)平臺(tái)，構(gòu)建共同靶點(diǎn)蛋白相互作用(PPI) 網(wǎng)絡(luò)，將蛋白種類設(shè)置為“Homo sapiens”，Settings設(shè)為“high confidence：0.4”，去除離散的結(jié)點(diǎn)，其他參數(shù)保持默認(rèn)設(shè)置，獲得 PPI 網(wǎng)絡(luò)。利用R 語(yǔ)言軟件的插件count.R對(duì)獲得的PPI 網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋白靶點(diǎn)出現(xiàn)頻次的分析。

1.6GO分析和KEGG通路富集分析 應(yīng)用R語(yǔ)言軟件插件(clusterProfilerGO.R)及 Perl 語(yǔ)言對(duì)紅花活性成分與缺血性腦卒中的共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析；應(yīng)用插件 (clusterProfilerKEGG.R)進(jìn)行 KEGG 通路富集分析，并利用R 語(yǔ)言軟件對(duì)其分析結(jié)果進(jìn)行可視化。根據(jù)富集因子值分析富集程度，探究紅花治療缺血性腦卒中可能的生物功能及信號(hào)通路機(jī)制。

2 結(jié) 果

2.1紅花活性成分及作用靶點(diǎn)篩選結(jié)果 通過(guò)TCMSP、BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)紅花組成藥物已報(bào)道的活性成分進(jìn)行檢索、并以O(shè)B≥30%和DL≥0.18為條件進(jìn)行篩選；同時(shí)，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的成分在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行結(jié)構(gòu)查找并在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，去掉重復(fù)成分后最終得到22個(gè)有效活性成分，靶點(diǎn)共220個(gè)。紅花的22個(gè)活性成分和分子編號(hào)分別為：木脂素(MOL002695)、除蟲(chóng)菊酯Ⅱ(MOL002710)、6-羥基山奈酚(MOL002712)、黃芩素(MOL002714)、qt_紅花醌苷(MOL002717)、7,8-二甲基-1H-嘧啶并〔5,6-g〕喹喔啉-2,4-二酮(MOL002757)、六羥基黃酮(MOL002721)、黃芩苷(MOL002776)、β-谷甾醇(MOL000358)、山奈酚(MOL000422)、豆甾醇(MOL000449)、木犀草素(MOL000006)、CLR(MOL000953)、 槲皮素(MOL000098)、紅花紅色素(MOL002780)、β-胡蘿卜素(MOL002773)、羥基紅花黃色A (MOL002690)、Saffloquinoside A(45276863)、Saffloquinoside B(101501319)、Kinobeon-A(MOL002694)、紅花黃色素B( 101241647)、 脫水紅花黃色素B (102240413)。對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)數(shù)目較多的活性成分依次為：槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、黃芩素、羥基紅花黃色素A、紅花紅色素、紅花黃色素B和紅花醌苷B。

2.2缺血性腦卒中靶點(diǎn) 通過(guò)檢索GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)并設(shè)置Relevance score≥5.0篩選，刪去重復(fù)靶點(diǎn)，共得到1 072個(gè)缺血性腦卒中的治療靶點(diǎn)。

2.3紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)篩選結(jié)果 應(yīng)用R語(yǔ)言軟件及Perl語(yǔ)言程序分析1 072個(gè)缺血性腦卒中治療靶點(diǎn)與220個(gè)紅花活性成分作用靶點(diǎn)，共篩選出100個(gè)共同靶點(diǎn)。

2.4紅花-活性成分-靶點(diǎn)-缺血性腦卒中網(wǎng)絡(luò) 通過(guò)Cytoscape 3.7.1 軟件構(gòu)建“紅花-活性成分-作用靶點(diǎn)-缺血性腦卒中”網(wǎng)絡(luò)，如圖1所示。有效化學(xué)成分中，按作用靶點(diǎn)數(shù)從高到低排序依次為：槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇、β-胡蘿卜素、黃芩苷、羥基紅花黃色素A、紅花紅色素、紅花黃色素B和紅花醌苷B。這些可能是紅花治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵化學(xué)成分。其中，羥基紅花黃色素A、紅花紅色素、紅花黃色素B和紅花醌苷B的作用靶點(diǎn)都基本相似，包括谷胱甘肽還原酶(GSR)、腺苷A2A受體(ADORA2A)、微管相關(guān)蛋白(MAP)2、單胺氧化酶(MAO)B、短鏈?；o酶A脫氫酶(ACADS)、MAOA、微管相關(guān)tau蛋白(MAPT)、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP)1、黃嘌呤脫氫酶(XDH)和一氧化氮合酶(NOS)1等。

2.5PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建結(jié)果 運(yùn)用 String 在線數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)進(jìn)行分析，在“high confidence：0.4”模式下構(gòu)建出的PPI 網(wǎng)絡(luò)。應(yīng)用 count.R 插件統(tǒng)計(jì)出現(xiàn)頻次居前 30 位的蛋白靶點(diǎn)(頻次)依次為：絲氨酸/蘇氨酸激酶(AKT)1(76次)、白蛋白(ALB，75次)、白細(xì)胞介素(IL)-6(68次) 、腫瘤壞死因子(TNF，67次)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)A(62次)、胱天蛋白酶(CASP)3(61次)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)8(60次)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)1(55次)、環(huán)加氧酶(PTGS)2(54次)、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體 (EGFR，53次)、FOS(53次)、NOS3(51次)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)9(50次)、MYC(47次)、IL-10(45次)、MMP2(45次)、血紅素加氧酶(HMOX)1(44次)、雌激素受體(ESR)1(42次)、過(guò)氧化物酶體增殖激活受體γ(PPARG,42次)、細(xì)胞周期蛋(CCN)D1(41次)、胱天蛋白酶(CASP8,40次)、細(xì)胞間黏附分子(ICAM)1(40次)、IL-4(40次)、APP(38次)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)B1(38次)、Bcl2樣蛋白(Bcl2L)1(37次)、髓過(guò)氧化物酶(MPO,37次)、RELA(37次)、小窩蛋白(CAV)1(36次)和干擾素γ(IFNG,36次)。出現(xiàn)頻次較高的有ALB、AKT、IL6、TNF、VEGFA、FOS、CASP3、EGF、MAPK8和NOS3等，可作為紅花治療缺血性腦卒中的潛在靶點(diǎn)。

圖1 紅花-有效成分-作用靶點(diǎn)-IS網(wǎng)絡(luò)

2.6紅花治療缺血性腦卒中GO分析及核心通路篩選共同靶點(diǎn) 對(duì)100個(gè)紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)基因進(jìn)行生物學(xué)過(guò)程富集(GO)分析，分別選取P值較小的前20位作可視化展示，得到的氣泡圖見(jiàn)圖2。其中，主要富集過(guò)程涉及蛋白磷酸酶2A結(jié)合、細(xì)胞因子受體結(jié)合、磷酸酶結(jié)合、蛋白磷酸酶結(jié)合、黃素腺嘌呤二核苷酸結(jié)合、G蛋白耦聯(lián)胺受體活性、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、兒茶酚胺結(jié)合、血紅素結(jié)合、半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性參與細(xì)胞凋亡過(guò)程、四吡咯結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、信號(hào)受體激活劑活性、生長(zhǎng)因子活性、氧化還原酶活性(分子氧的摻入或還原)、抑制轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、內(nèi)肽酶活性、激活轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、細(xì)胞因子活性和腫瘤壞死因子受體超家族結(jié)合等。這表明紅花可能通過(guò)調(diào)控多個(gè)復(fù)雜的生物過(guò)程治療缺血性腦卒中。

圖2 紅花-缺血性腦卒中交集基因GO功能 富集結(jié)果(氣泡圖)

通過(guò)對(duì)紅花-缺血性腦卒中交集靶點(diǎn)基因進(jìn)行 KEGG 通路富集分析的氣泡圖的結(jié)果見(jiàn)圖3。節(jié)點(diǎn)大小表示富集的靶點(diǎn)數(shù)量，節(jié)點(diǎn)顏色由紅色至深藍(lán)色表示P值由小到大，因此紅色節(jié)點(diǎn)越大表示信號(hào)通路的顯著性越高，該條信號(hào)通路越重要。篩選出富集基因數(shù)居前20 位的通路，主要分布在流體剪應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、結(jié)直腸癌、乙型肝炎、IL-17信號(hào)通路、胰腺癌、癌癥中的蛋白多糖、肺結(jié)核、松弛素信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、凋亡(多物種)、C型凝集素受體信號(hào)通路、丙型肝炎和瘧疾等多條信號(hào)通路中，提示紅花通過(guò)作用于多條信號(hào)通路治療缺血性腦卒中。

圖3 紅花-缺血性腦卒中交集基因KEGG通路富集 分析結(jié)果(氣泡圖)

3 討 論

本研究通過(guò)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)并預(yù)測(cè)潛在靶點(diǎn)，分析出紅花治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵靶點(diǎn)主 要為 ALB、AKT、IL6、TNF、VEGFA、FOS、CASP3、EGF、MAPK8和NOS3等；KEGG 富集通路分析發(fā)現(xiàn)，TNF信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路和動(dòng)脈粥樣硬化等多條關(guān)鍵通路與紅花治療缺血性腦卒中顯著相關(guān)，這表明紅花治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制呈多成分、多靶點(diǎn)、多通路且相互關(guān)聯(lián)的特點(diǎn)。

腦組織在供血減少或者中斷后，缺血缺氧是引發(fā)組織損傷的直接原因，細(xì)胞凋亡在腦卒中缺血半暗帶的細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)中起著關(guān)鍵作用。處于缺血半暗帶中的細(xì)胞由許多促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表達(dá)共同決定細(xì)胞命運(yùn)。在這些信號(hào)蛋白中，促凋亡蛋白Bax的上調(diào)和抗凋亡Bcl-2的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡。同時(shí)，Caspase-3位于Bax/Bcl-2的下游，并在凋亡發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。降低Bax/Bcl-2的比值，阻斷Caspase-3誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡能夠保護(hù)缺血性腦卒中缺血半暗帶中的神經(jīng)元〔11〕。

短暫性缺血后，腦組織恢復(fù)血液和氧氣供應(yīng)產(chǎn)生過(guò)量活性氧(ROS)和活性氮(RNS)自由基，攻擊重新獲得血液供應(yīng)的組織內(nèi)的細(xì)胞造成組織缺血再灌注損傷。自由基產(chǎn)生細(xì)胞氧化損傷的毒性，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，破壞血腦屏障，從而引起腦組織的水腫。在缺血性腦卒中的急性期，自由基觸發(fā)血管源性水腫，VEGF-A表達(dá)增高，MMP表達(dá)上調(diào)，VEGF-A誘導(dǎo)血腦屏障通透性增加；由于內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞間連接斷裂和血管滲漏，VEGF-A參與了腦水腫的發(fā)展。晚期增加的VEGF-A又促進(jìn)神經(jīng)元保護(hù)、功能恢復(fù)和血管生成〔12〕。

PI3K與生長(zhǎng)因子受體(如EGFR)結(jié)合后，可改變絲氨酸/AKT的蛋白結(jié)構(gòu)并使其活化，從而以磷酸化形式作用于下游一系列底物，如改變凋亡相關(guān)蛋白Bad、Caspase活性，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及遷移等生物學(xué)過(guò)程。黃芩素、β-胡蘿卜素、山奈酚、木犀草素等成分可作用于AKT，調(diào)節(jié)發(fā)生缺血的腦組織細(xì)胞中葡萄糖代謝、凋亡、細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞遷移等生物學(xué)功能。

PI3K/Akt下游靶點(diǎn)是雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，而mTOR的下游轉(zhuǎn)錄因子則包括了HIF1α、c-Myc等分子。PI3K/AKT/mTOR信號(hào)途徑能夠促進(jìn)HIF-1α的表達(dá)及穩(wěn)定。HIF-1α在體內(nèi)普遍表達(dá)，在多種腫瘤、炎癥及缺血缺氧性疾病的細(xì)胞中過(guò)表達(dá)。腦組織對(duì)低氧十分敏感，氧濃度降低可誘導(dǎo)腦組織中HIF-1α表達(dá)顯著增加，從而促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，加重腦組織的損傷，這可能與HIF-1α過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)了促凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bcl2的表達(dá)有關(guān)。HIF-1α表達(dá)水平增高還會(huì)促進(jìn)BNIP3的表達(dá)，調(diào)控自噬體的形成與成熟，介導(dǎo)了非Caspase依賴性細(xì)胞凋亡〔13〕。在發(fā)生缺氧或炎癥時(shí)，HIF-1α水平增加，啟動(dòng)下游基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，如VEGF〔14〕，并激活HIF-1α/VEGF信號(hào)通路，從而誘導(dǎo)血管生成。VEGF的產(chǎn)生能夠負(fù)反饋調(diào)節(jié)HIF-1α。有研究表明，缺氧能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生大量的TNFα，而通過(guò)下調(diào)TNF的受體阻斷TNFα/NF-κB/HIF/VEGF通路減輕缺氧誘導(dǎo)的血管生成〔15〕。

缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中也會(huì)出現(xiàn)明顯的炎癥和免疫反應(yīng)。大鼠永久性中腦動(dòng)脈栓塞(MCAO)可誘導(dǎo)缺血半球IL-6 mRNA表達(dá)和IL-6生物活性〔16〕；缺血損傷也增加了大腦皮質(zhì)TNFα mRNA的表達(dá)，是缺血性神經(jīng)炎癥反應(yīng)的一部分。Aliena-Valero等〔17〕在小鼠缺血性腦卒中的模型中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性 IL-6能夠促進(jìn)STAT3磷酸化，從而可以通過(guò)激活神經(jīng)元中的IL-6/STAT3途徑、抑制VEGF-A/MMP-9信號(hào)的來(lái)保護(hù)神經(jīng)，減輕腦損傷〔18〕。作為一種促炎細(xì)胞因子，IL-17在缺血性腦卒中的急性期其mRNA和蛋白表達(dá)均上調(diào)，過(guò)度表達(dá)可能與治療效果較差相關(guān)，表達(dá)降低與小鼠運(yùn)動(dòng)功能改善有關(guān)〔19〕，IL-17作為預(yù)后不良的重要指標(biāo)。Sun等通過(guò)敲除小鼠IL-17有助于上調(diào)PI3K/AKT通路，激活神經(jīng)干細(xì)胞，促進(jìn)缺血性腦卒中后的神經(jīng)再生，但梗死面積增加；通過(guò)上調(diào)AKT/GSK-3β和Wnt/β-catenin通路，從而對(duì)神經(jīng)發(fā)生起到保護(hù)作用〔20〕。

缺血性腦卒中的病理機(jī)制十分復(fù)雜，涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體損傷、細(xì)胞凋亡和興奮性氨基酸的毒性等許多生物學(xué)過(guò)程。而紅花的有效成分較多，可作用于AKT、IL6、TNF、VEGFA、CASP3和NOS等多靶點(diǎn)。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)紅花的有效成分通過(guò)PI3K/AKT、IL-6/STAT3、HIF-1α/VEGF、AKT/GSK-3β和Wnt/β-catenin信號(hào)通路及多通路間相互交叉、關(guān)聯(lián)，是以多成分、多靶點(diǎn)、多通路特點(diǎn)的藥理機(jī)制網(wǎng)絡(luò)模式抑制細(xì)胞凋亡、保護(hù)神經(jīng)元、促進(jìn)神經(jīng)元再生，減輕腦損傷、改善神經(jīng)功能缺損及降低腦卒中復(fù)發(fā)率，達(dá)到疾病治療和二級(jí)預(yù)防的效果。既往的研究對(duì)羥基紅花黃色素A的關(guān)注較多，有關(guān)槲皮素、山奈酚、木犀草素等活性成分與缺血性腦卒中的相關(guān)性研究還很少，這為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探討提供了新方向。