SLCO1B1、ApoE 基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀治療血脂異常超高危動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病患者的影響

謝東德 周思婕 黃杰 陳冠群 黃澤棋 吳劍弟

(1佛山市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528000；2海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院；3佛山市第二人民醫(yī)院心內(nèi)科)

目前，心血管相關(guān)疾病逐漸成為世界上死亡率最高，且致殘率最高的疾病。在心血管相關(guān)疾病的危險(xiǎn)因素探究中發(fā)現(xiàn)，其危險(xiǎn)因素已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)200種，其中血脂異常與心血管疾病密切相關(guān)，也導(dǎo)致了血脂水平異常的發(fā)病率增加〔1，2〕。研究報(bào)道，在中國(guó)人血清中總膽固醇(TC)水平和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平顯著低于西方國(guó)家人群，且在中老年人群中發(fā)生脂異常的概率依舊上升，可能是由于人們生活水平的逐漸提高，導(dǎo)致三高人群急速增加〔3，4〕。脂異常的預(yù)防顯著差于高血壓和糖尿病，脂異常防治的知曉率、治療率、控制率均較低〔5〕。目前，脂異常是國(guó)民暴露率最高的心血管病危險(xiǎn)因素，會(huì)引發(fā)超高危動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)，在超高危ASCVD治療中，血脂管理尤為重要〔6〕。研究顯示，降低LDL-C是治療脂異常所致的超高危ASCVD的有效手段，而他汀類藥物能夠顯著降低LDL-C〔7〕。他汀類藥物中常用的且適宜ASCVD的藥物包括瑞舒伐他汀。載脂蛋白(Apo)E是降低LDL-C等血脂水平的重要因素〔8〕，SLCO1B1與他汀類藥物的毒副作用密切相關(guān)〔9〕。突變型基因會(huì)影響藥物的療效〔10〕。SLCO1B1和ApoE基因多態(tài)性與血脂水平及治療療效的影響暫不明確。本文旨在探討SLCO1B1和ApoE 基因多態(tài)性對(duì)脂異常所致超高危ASCVD患者瑞舒伐他汀治療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集佛山市第二人民醫(yī)院2020年6月至2021年6月收治的268例血脂異常的超高危ASCVD患者，年齡(64.37±3.44)歲；男148例，女120例；冠心病201例，高血壓125例，糖尿病64例，體重指數(shù)(25.22±2.79)kg/m2。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有入選患者行ApoE及SLCO1B1基因型檢查，ApoE 基因型結(jié)果分為E2/B2、E2/B3、E3/E3、 E2/E4、 E3/E4和E4/EB4組，SLCO1B1 521T>C基因型結(jié)果分為TT、TC和CC組，SLCO1B1 388A>G基因型結(jié)果分為AA、AG和GG組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合超高危ASCVD患者的標(biāo)準(zhǔn)〔11〕；②發(fā)生過(guò)2次或以上嚴(yán)重ASCVD事件；③患者及其家屬均簽署知情同意書；④病歷資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)本研究使用的藥品過(guò)敏者；②肌?。虎廴朐呵?4 d內(nèi)已服用降脂藥物者；④肝腎功能損害者；⑤患者并發(fā)惡性腫瘤，且預(yù)期壽命不足半年者。

1.2治療方法 所有患者進(jìn)行瑞舒伐他汀鈣片治療，藥品的國(guó)藥準(zhǔn)字為HJ20160545，生產(chǎn)于阿斯利康藥業(yè)(中國(guó))有限公司，10 mg×7片，口服，1片/次，1次/d，治療半年。

1.3基因檢測(cè) 用PCR熒光探針?lè)▽?duì)患者SLCOIBl基因的388A>G、521T>C位點(diǎn)和ApoE基因的526C>T、388T>C位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)。所有患者進(jìn)行瑞舒伐他汀治療，10 mg，1片/d，治療半年?；蛐蜋z測(cè)：使用上海宏石醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)熒光定量PCR儀(型號(hào)：SLAN-96P)，上海萊楓生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒、武漢友芝醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的SLCO1B1和ApoE基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?進(jìn)行基因分型：①在Nunc 96孔深孔板中各加入20 μl蛋白酶K及 Mag Bind Particles；②轉(zhuǎn)移200 μl血漿至深孔板中；③加入200 μl緩沖液AL至樣品中，且貼上封口膜，1 000～1 400 r/min振蕩混勻3 min。70℃水浴10 min；④短暫離心收集管壁的液滴，撕去封口膜；⑤加入400 μl緩沖液BD至樣品中。1 000～1 200 r/min振蕩混勻3 min；⑥轉(zhuǎn)移至96孔磁力架吸附10 min;⑦加入600 μl緩沖液BW1至孔中，1 000～1 200 r/min振蕩混勻2 min打散磁珠；轉(zhuǎn)移至磁力架上吸附3 min，重復(fù)⑤和⑥1次；⑧加入600 μl 70%乙醇，1 000～1 200 r/min振蕩混勻2 min打散磁珠，轉(zhuǎn)移至磁力架上吸附3 min，重復(fù)⑧1次，37～100 μl預(yù)熱至70℃洗脫緩沖液，1 000 r/min振蕩混勻10 min，轉(zhuǎn)移至磁力架上吸附3 min，把 DNA轉(zhuǎn)移至新的96孔板中；⑨將DNA、弱陽(yáng)性對(duì)照組、空白對(duì)照分別加入已裝有4種 PCR液的反應(yīng)管中，進(jìn)行 PCR擴(kuò)增；⑩反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)擴(kuò)增曲線，劃定合適基線和熒光閾值，得出不同通道Ct值，進(jìn)行結(jié)果判定。

1.4觀察指標(biāo) 檢測(cè)治療前后患者體內(nèi)TC、三酰甘油(TG)、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，血清肌酐(Cr)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)水平。統(tǒng)計(jì)研究期間患者肌痛發(fā)生情況。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS26.0軟件進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳學(xué)平衡檢測(cè)、t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1超高危ASCVD患者的SLCO1B1基因頻率 SLCO1B1基因型、等位基因頻率符合Hardy-Weinberg 平衡定律(P>0.05)，表明本研究中超高危ASCVD患者具有群體代表性。見(jiàn)表1。

表1 超高危ASCVD患者的基因分布頻率〔n(%),n=268〕

2.2SLCO1B1 521T>C各基因型攜帶者血脂水平及肝腎功能變化比較 治療前，TC+CC組與TT組各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，TC+CC組LDL-C水平顯著低于TT組(P<0.05)，TC+CC組CK水平顯著高于TT組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3SLCO1B1 388A>G各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較 治療前后，AA、AG與GG組血脂及肝腎功能指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

2.4ApoE>G各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較 治療前，e2、e3與e4組血脂及肝腎功能指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，e2、e3與e4組LDL-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.5不同基因型組肌痛發(fā)生率比較 SLCO1B1 521T>C：TT、TC+CC組肌痛發(fā)生率分別為4.21%(8/190)、11.54%(9/78)，不同基因型患者肌痛發(fā)生率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.998，P=0.025)。SLCO1B1 388A>G：AA、AG及GG肌痛發(fā)生率分別為12.5%(1/8)、6.0%(6/100)及6.3%(10/160)，不同基因型患者肌痛發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.533，P=0.766)。ApoE>G：e2、e3及e4組肌痛發(fā)生率分別為4.2%(1/24)、7.5%(15/201)及2.4%(1/42)，不同基因型患者肌痛發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.765，P=0.414)。

表2 治療前后sLCO1B1 521T>C各基因型攜帶者血脂及肝腎功能比較

表3 治療前后SLCO1B1 388A>G各基因型攜帶者組間血脂及肝腎功能比較

表4 治療前后ApoE>G各基因型攜帶者組間血脂及肝腎功能比較

3 討 論

超高危ASCVD是由多種原因引起，此類患者需要嚴(yán)格控制血脂〔12～14〕。保持血脂水平的正常能夠有效降低脂異常的超高危ASCVD患者死亡率，提高治愈率。超高危ASCVD的治療手段包括他汀類降脂藥控制血脂。超高危ASCVD患者可使用瑞舒伐他汀降脂且療效不錯(cuò)〔15〕。有報(bào)道顯示〔16〕，SLCO1B1、ApoE 基因多態(tài)性可能會(huì)影響他汀類藥物的降脂效果，且可能引發(fā)藥物毒副作用。

ApoE 是一種多態(tài)性載脂蛋白，其部分存在于HDL中，ApoE是LDL和肝細(xì)胞CM殘粒受體的配體，ApoE多態(tài)性能夠決定機(jī)體的血脂水平〔17〕，且在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中，也有ApoE的參與〔18〕。SLCO1B1能夠轉(zhuǎn)運(yùn)他汀類藥物。SLCO1B1通過(guò)從血液中將他汀類藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟進(jìn)行代謝〔19〕。當(dāng)SLCO1B1發(fā)生基因突變時(shí)，會(huì)損害其轉(zhuǎn)運(yùn)功能〔20〕。ApoE、SLCO1B1基因多態(tài)性會(huì)對(duì)瑞舒伐他汀的降脂療效及安全性有一定影響〔21〕。本研究將所有患者進(jìn)行ApoE、SLCO1B1基因多態(tài)性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，ApoE等位基因分布中e3患者最多，E3/E3 最多，E4/E4最少。在SLCO1B1中521T>C位點(diǎn)基因型中TT 最多，CC最少；SLCO1B1中388A>G位點(diǎn)基因型中GG最多，AA最少，且ApoE、SLCO1B1基因型與基因頻率符合Hardy-Weinberg 平衡定律。

本研究結(jié)果說(shuō)明，SLCO1B1 388A>G中TC+CC基因型可能升高了瑞舒伐他汀的血藥濃度，提高瑞舒伐他汀的降脂療效。與王婧等〔22〕研究一致。

有研究顯示，他汀類藥物對(duì)ApoE基因e2等位基因攜帶者的降脂作用較強(qiáng)，在e4等位基因攜帶者中效果不佳〔23〕。且ApoE e4攜帶者與辛伐他汀療效降低有關(guān)。本研究結(jié)果與上述結(jié)論一致。

他汀類降脂藥中瑞舒伐他汀在臨床上應(yīng)用廣泛，也具有良好療效。其能夠降低LDL-C水平并提高HDL-C水平，改善內(nèi)皮功能，從而穩(wěn)定斑塊，但其可能引起肌痛等副作用〔24〕。本研究還提示，在瑞舒伐他汀使用中，應(yīng)當(dāng)注重SLCO1B1 521T>C基因型特別是CC基因型的檢測(cè)。

綜上，ApoE 基因中e2等位基因與E3/E3基因型有效降低脂異常所致的超高危ASCVD患者LDL-C水平，e4等位基因的ASCVD者服用瑞舒伐他汀的療效欠佳，SLCO1B1 521T>C基因多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致瑞舒伐他汀引起肌痛，SLCO1B1 521T>C中CC基因型會(huì)更加容易出現(xiàn)肌痛現(xiàn)象。瑞舒伐他汀治療期間應(yīng)當(dāng)注重SLCO1B1、ApoE 基因多態(tài)性的檢測(cè)。