RET指樣蛋白3在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展

孫程妍，杭曉朦，程凱，陳政華，馬維昌，李文杰

濱州醫(yī)學(xué)院煙臺附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，山東煙臺 264100

惡性腫瘤是威脅人類健康的主要疾病，其復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍是困擾臨床醫(yī)生的主要難題［1］。隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，尋找惡性腫瘤新的分子標(biāo)志物以及治療靶點，避免腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移則顯得尤為重要。RET指樣蛋白3（RFPL-3）作為RET 指樣蛋白（RFPL）家族的主要成員，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和分化中具有重要作用。研究顯示，RFPL-3同源的RFP 蛋白存在于不同的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，并通過ERK 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與細(xì)胞周期的調(diào)控［2-3］。與此同時，RFPL-3可提高1 型人免疫缺陷病毒（HIV-1）的預(yù)整合復(fù)合物（PIC）的整合活性［4］。值得注意的是，RFPL-3 在不同惡性腫瘤中的表達(dá)有差異，其在乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌中呈高表達(dá)，而在睪丸生殖細(xì)胞腫瘤中呈低表達(dá)［5］。因此，RFPL-3 可能在不同腫瘤中所發(fā)揮的作用不同。本文對RFPL-3 在乳腺癌、肺癌、睪丸生殖細(xì)胞腫瘤（TGCT）、甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用作一綜述，為治療惡性腫瘤的新靶點研究提供依據(jù)。

1 RFPL-3在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用

乳腺癌是嚴(yán)重威脅女性健康的一種疾病，RFPL-3 在正常乳腺組織及乳腺癌組織內(nèi)均呈高表達(dá)，提示其在乳腺癌的發(fā)病中扮演重要角色。研究顯示，RFPL-3 可以與CREB 結(jié)合蛋白（CBP）協(xié)同促進脂肪干細(xì)胞（ASCs）誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖，其機制是ASCs 分泌的干細(xì)胞因子（SCF）可觸發(fā)乳腺癌細(xì)胞中MEK/ERK 通路的激活，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP 的核募集，隨后通過乙?；M蛋白與RFPL-3協(xié)同促進人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶基因（hTERT）轉(zhuǎn)錄和端粒酶活性上調(diào)，從而誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞增殖［7-10］。雖然RFPL-3 和CBP 均可調(diào)控hTERT 的活性，但RFPL-3蛋白不能完全調(diào)節(jié)hTERT 表達(dá)，這表明其他因素可能參與了細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)［11］。例如，轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白2（AP-2）在許多人乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)，可以激活C-erbB-2 和雌激素受體啟動子，并促進細(xì)胞增殖，或者其他因素干擾RFPL-3 的功能［12］。此外，Importin13（IPO13）可以通過RFPL-3 內(nèi)的功能性核定位信號（NLS）和隨后的hTERT 表達(dá)上調(diào)，來介導(dǎo)RFPL-3的核導(dǎo)入［13］。

RFPL-3不但可以通過促進hTERT轉(zhuǎn)錄和上調(diào)端粒酶活性來介導(dǎo)乳腺癌的發(fā)生，而且一旦當(dāng)其環(huán)指結(jié)構(gòu)上的位點與RET受體酪氨酸激酶發(fā)生融合時，也會介導(dǎo)腫瘤進展；其具體機制是RFPL-3中富含半胱氨酸的鋅結(jié)合結(jié)構(gòu)域，可以介導(dǎo)蛋白質(zhì)之間相互結(jié)合；當(dāng)其與RET受體酪氨酸激酶發(fā)生融合時，就會促使原癌基因RET激活，從而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖［14］。

同樣，RFPL-3因其具有RING 結(jié)構(gòu)域，并且每一環(huán)指結(jié)構(gòu)域連有兩個鋅離子，所以具有E3泛素酶的作用，這也是其促使乳腺癌細(xì)胞增殖的重要因素。研究顯示，RING E3 作為骨架可使泛素E2 轉(zhuǎn)移到底物特定位點進行修飾，從而使抑癌蛋白p53 泛素化及降解，導(dǎo)致p53蛋白保持在較低水平，達(dá)到負(fù)調(diào)控作用，從而參與乳腺癌的生長和增殖［15］。

因此，RFPL-3高表達(dá)是促進乳腺癌細(xì)胞增殖的重要因素，未來可將RFPL-3作為臨床上乳腺癌治療的重要靶點，以進一步提高患者的生存率，改善患者預(yù)后。

2 RFPL-3在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用

目前，RFPL-3可以通過 MAPK 通路和轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）/Smad 通路參與肺癌的病情進展［16］。一項關(guān)于RFPL-3 在MAPK 通路中作用機制的研究顯示，當(dāng)表皮細(xì)胞生長因子（EGF）與細(xì)胞膜上的表皮細(xì)胞生長因子受體（EGFR）結(jié)合時，EGFR 接收細(xì)胞外生長、增殖信號，通過下游MAPK/ERK 信號通路傳遞到細(xì)胞核，激活下游MEK 信號蛋白（RAS/RAF/MEK/ERK），進而增加ERK 表達(dá)，上調(diào)RFPL-3和hTERT 蛋白表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞RFPL-3 蛋白表達(dá)升高［17］。過表達(dá)的RFPL-3 蛋白還會增加MEK 信號通路上游分子（Ras、Raf）表達(dá)，具有Ras 激活劑的功能，繼而升高ERK 表達(dá)，激活癌蛋白表達(dá)。在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中，由于RFPL-3 距離端粒較近，所以RFPL-3 的乙?；菀渍{(diào)控hTERT 活性和促進肺癌細(xì)胞增殖［18］。除此之外，RFPL-3 能夠與TGF-β 受體結(jié)合，從而促進TGF-β 信號通路活性，導(dǎo)致Smad 依賴的信號通路激活，上調(diào)p-Smad2 蛋白表達(dá)，從而促進肺腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲［19］。

RFPL-3 調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖的另一個重要機制是，RFPL-3與p53重要的負(fù)調(diào)控因子雙微體同源基因2（MDM2）在p53的N端轉(zhuǎn)激活結(jié)構(gòu)域（TAD）的結(jié)合位點重疊，從而競爭MDM2與p53的結(jié)合，促進p53的泛素化降解，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖和遷移能力增強［20］。此外，除了在肺癌中發(fā)揮主要的促細(xì)胞增殖作用，RFPL-3蛋白還能夠通過螺旋結(jié)構(gòu)域的自我結(jié)合形成多聚化，作為多蛋白復(fù)合體的組裝支架，識別亞細(xì)胞區(qū)，協(xié)同HDAC1抑制E2F3和E2F4轉(zhuǎn)錄，從而在肺癌發(fā)展過程中發(fā)揮抗增殖活性［20］。但總體來說，RFPL-3在肺癌發(fā)生發(fā)展的作用以促進腫瘤細(xì)胞增殖為主。

以上研究表明，RFPL-3是NSCLC細(xì)胞增殖和遷移的重要調(diào)控因子，可作為治療靶點，進一步提高NSCLC患者的治療效果，延長其生存時間。

3 RFPL-3在TGCT發(fā)生發(fā)展中的作用

最新研究顯示，TGCT發(fā)病率呈上升趨勢，并且其中15%～30%的患者仍會在治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，而用于診斷TGCT 和判斷其預(yù)后的臨床方法仍然不足［21］。與正常睪丸組織相比，TGCT中RFPL-3表達(dá)降低，且與患者腫瘤分期、淋巴結(jié)分期、轉(zhuǎn)移分期呈負(fù)相關(guān)關(guān)系［22］。TGCT組織中存在高甲基化和低拷貝數(shù)的RFPL-3，而沉默RFPL-3 可增強TGCT 淋巴細(xì)胞的增殖和侵襲能力，提示其作用機制是受遺傳因素（拷貝數(shù)變異）和表觀遺傳因素（DNA甲基化）控制的。下游信號通路分析研究顯示，RFPL-3表達(dá)下調(diào)促進了腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)通路的激活，包括細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）-受體相互作用、黏著斑信號通路、黏附連接信號通路以及PI3K/Akt 信號、Wnt 信號和Hippo 信號。當(dāng)RFPL-3下調(diào)時，可引起以下改變：①促進ECM與細(xì)胞表面膜整合素受體相連，細(xì)胞的形狀及細(xì)胞分化、遷移能力也隨之發(fā)生變化；②促進局灶黏附激酶激活，而局灶黏附激酶可通過多種信號通路，在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、生長調(diào)節(jié)、黏附、細(xì)胞骨架組裝、運動和存活中發(fā)揮重要作用。研究顯示，局灶黏附激酶在多種腫瘤組織中呈高表達(dá)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中具有重要作用［23］。此外，免疫獲益人群中可能存在較高水平的RFPL-3表達(dá)，而且RFPL-3與B細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等免疫激活細(xì)胞的浸潤呈正相關(guān)關(guān)系，與Th17、Th2等免疫抑制細(xì)胞的浸潤呈負(fù)相關(guān)關(guān)系［24-25］。因此，睪丸特異性RFPL-3在TGCT的發(fā)生發(fā)展中具有腫瘤抑制作用，可用作TGCT的預(yù)后預(yù)測因子，以及評估TGCT免疫治療效果的分子標(biāo)志物。

4 RFPL-3在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用

甲狀腺癌作為最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，占所有內(nèi)分泌惡性腫瘤的90%以上［26］。研究顯示，導(dǎo)致惡性腫瘤細(xì)胞增殖的重要原因在于RFPL-3 對YAP的修飾，從而激活Hippo信號通路所導(dǎo)致［27］。具體機制是：RFPL-3 的RING 結(jié)構(gòu)域通過與YAP 的WW 結(jié)構(gòu)域發(fā)生蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用，從而影響YAP蛋白的穩(wěn)定性，并促進YAP 的單泛素化，從而抑制YAP蛋白的k11和k48連鎖多泛素化，促進YAP介導(dǎo)的Hippo信號通路激活，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化和甲狀腺癌的發(fā)生與發(fā)展［28-29］。也就是說，RFPL-3 介導(dǎo)的YAP 單泛素化修飾是導(dǎo)致甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展的主要機制。

綜上所述，RFPL-3 作為一種特殊的蛋白，因其特有結(jié)構(gòu)而具有很多功能，賦予泛素連接酶活性的RING 結(jié)構(gòu)域，以及能夠進行自我結(jié)合的螺旋結(jié)構(gòu)域，均在乳腺癌、肺癌、TGCT、甲狀腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生中具有重要作用。隨著全球惡性腫瘤發(fā)病率的逐年升高，以及精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，臨床上對惡性腫瘤治療精準(zhǔn)性及靶向性需求日益增加，尋找有效的惡性腫瘤治療靶點并研發(fā)相關(guān)的靶向藥物則顯得尤其重要。RFPL-3 有望成為惡性腫瘤的潛在治療靶點，并為患者的治療提供更多選擇，從而改善患者的治療效果和預(yù)后。