穴位埋線通過 SIRT1/NF-κB信號通路對潰瘍性結(jié)腸炎腸道屏障功能的影響

李玎玎,劉朝霞

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,哈爾濱 150040)

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)以結(jié)腸黏膜慢性非特異性炎癥為特征,臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛和膿血便,病情呈逐漸進展,極易反復(fù)發(fā)作,為消化內(nèi)科常見的難治性疾病[1]。UC腸黏膜反復(fù)的炎癥反應(yīng)不僅加重患者病情,也是導(dǎo)致其癌變的危險因素,緩解和控制炎癥是UC臨床治療的重要方向[2]。目前常規(guī)的治療方案包括抗生素、消炎藥、糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑等,這些藥物在 UC急性期具有較好療效,而長期使用可導(dǎo)致嚴重不良反應(yīng)和感染風(fēng)險[3]。穴位埋線是在傳統(tǒng)針刺基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種中醫(yī)外治方法,能夠通過對穴位的持久刺激發(fā)揮對機體的整體調(diào)節(jié)效果,受到了臨床醫(yī)師的廣泛關(guān)注[4]。在臨床試驗和動物模型中發(fā)現(xiàn)穴位埋線對UC具有較好的治療效果,能夠有效恢復(fù)腸黏膜炎性損傷[5-6]。核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)介導(dǎo)的炎癥信號在UC的發(fā)病機制中扮演重要角色,近年研究發(fā)現(xiàn)沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1, SIRT1)的表達和激活可抑制 NF-κB信號的活化,降低腸黏膜炎癥反應(yīng)[7]。本研究通過葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate, DSS)法進行UC大鼠造模,通過SIRT1/NF-κB通路探討穴位埋線療法對大鼠腸黏膜炎癥和屏障功能的影響,探究其發(fā)揮治療作用的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與方法

選取SPF級遠交群(Sprague Dawley, SD)雄性大鼠42只,體質(zhì)量180～220 g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)提供,動物許可證號SYXK黑2021-010。于溫度(23±3)℃,相對濕度40%～70%,光照和黑暗12 h交替的SPF級實驗動物房中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。所有動物實驗均經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院實驗動物福利倫理委員會審核通過(倫理審批號20210203)。

1.2 主要試劑、材料與儀器

柳氮磺胺吡啶(Salazosulfapyridine, SASP)腸溶片(上海福達制藥有限公司,批號 990608),葡聚糖硫酸鈉(DSS)(美國MPBiomedicals公司,批號M8669);大鼠髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme- linked immunosorbnent assay,ELISA)檢測試劑盒(深圳達科為生物技術(shù)有限公司,批號 20210522),抗 SIRT1、核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB) p65 、 磷 酸 化 核 因 子 -κB p65(phosphorylated NF-κB p65)、核因子κB 抑制因子α(inhibitor kappa B alpha, IκBα)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor kappa B alpha, p-IκBα)、IκB 激酶β(IκB kinaseβ, IKKβ)、磷酸化 IκB 激酶β(phosphorylated IκB kinaseβ,p-IKKβ)、乙?；艘蜃应蔅-p65(acetylated nuclear factor- κB p65, AC-p65)一抗(美國 Santa Cruz 公司,批號 072301、051907、059208、052860、054061、053157),RNA提取、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司,批號DR060A、D543A),基因上下游引物(上海捷瑞生物工程有限公司,貨號 S0415);7號無菌埋線針(鎮(zhèn)江高冠醫(yī)療器械有限公司),可吸收外科縫線(山東博達醫(yī)療有限公司);生物組織切片機(德國Leica公司,型號RM 2235),光學(xué)顯微鏡(德國Leica公司,型號DM750),酶標儀(瑞士 Tecan 公司,型號 GENIOSPLOS),電泳儀和蛋白轉(zhuǎn)膜儀(美國 Bio-Rad公司,型號 EC3型),RCR儀(美國ABI公司,型號9902)。

1.3 造模和干預(yù)方法

在42只SD大鼠中隨機抽取10只作為空白組,其余大鼠自由飲用3% DSS水溶液7 d以進行UC造模[8]。觀察大鼠造模期間一般狀況,7 d后隨機抽取2只大鼠,解剖后取結(jié)腸組織,用蘇木精-伊紅(hematoxylineosin, HE)染色法觀察結(jié)腸組織病理學(xué)變化。以出現(xiàn)腹痛、腹瀉、膿血便等癥狀及腸黏膜糜爛、潰瘍、炎性浸潤等病理損傷為模型成功標準[9]。模型制備成功后,將UC大鼠按體質(zhì)量隨機分組為模型組、藥物組和穴位埋線組,每組10只。藥物組予柳氮磺胺吡啶(SASP)溶液(按每千克體質(zhì)量 0.5 g)灌胃給藥,每日1次,持續(xù)14 d;穴位埋線組予穴位簡易埋線療法,取雙側(cè)足三里、天樞、上巨虛和大腸俞穴,穴區(qū)脫毛備皮及常規(guī)消毒后,將0.5 cm羊腸線放入7號無菌埋線針內(nèi),推入上述腧穴(足三里和上巨虛穴采用直刺法,天樞和大腸俞穴從下方向上平刺),針刺達到皮下或肌層后退出針芯和針管,線頭不外露,消毒干棉球按壓針孔。每7 d治療1次,共3次;空白組和模型組大鼠正常喂養(yǎng),不予處理。

1.4 觀察指標

1.4.1 疾病活動度指數(shù)(disease activity index,DAI)和黏膜損傷指數(shù)(colon mucosa damage index,CMDI)評分[10]

DAI以體質(zhì)量、糞便性狀和潛血情況為評分標準。體質(zhì)量不變計0分,體質(zhì)量較前減輕1%～5%計1分,體質(zhì)量較前減輕 6%～10%計 2分,體質(zhì)量較前減輕11%～15%計3分,體質(zhì)量較前減輕＞15%計4分。糞便性狀無異常計0分,糞便松散、半稀疏狀計2分,糞便稀疏而黏稠計4分。大便無潛血計0分,大便潛血陽性計2分,肉眼可見血便計4分。DAI評分為體質(zhì)量、糞便性狀和潛血3項評分的均值。

CMDI以結(jié)腸黏膜病變程度為評分標準。腸黏膜無損傷計0分;腸黏膜輕度充血、水腫,未見糜爛和潰瘍者計1分;腸黏膜輕中度充血、水腫,可見糜爛和粘連計 2分;腸黏膜高度充血、水腫,可見壞死和潰瘍(直徑＜1 cm)計3分;腸黏膜可見較大潰瘍(直徑≥1 cm)和全腸壁壞死計4分。

1.4.2 結(jié)腸組織病理學(xué)變化

干預(yù)后,大鼠經(jīng)腹主動脈采血后處死,取大鼠部分結(jié)腸組織,于4%多聚甲醛溶液中固定48 h,經(jīng)梯度乙醇溶液脫水,二甲苯浸泡透明后采用液體石蠟包埋,切片機作5 μm組織切片,經(jīng)蘇木精染色,鹽酸乙醇分化,伊紅染色后,再置于梯度乙醇中脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片,觀察結(jié)腸組織病理形態(tài)改變并拍照,并對4組大鼠進行組織病理學(xué)評分。炎細胞浸潤分為無0分、輕度1分、重度2分,浸潤深度分為黏膜層1分、黏膜及黏膜下層2分、結(jié)腸全層3分,潰瘍深度分為無0分、上皮1分、黏膜固有層2分、黏膜肌層3分,各項相加得總評分[11]。

1.4.3 血清和結(jié)腸組織中MPO水平

4組大鼠麻醉后經(jīng)腹主動脈采血,置于無菌試管中,3 000 r·min-1速度離心(離心半徑 4 cm)15 min,取上清,分裝凍存?zhèn)溆?同時取結(jié)腸組織,加入預(yù)冷生理鹽水后勻漿機研磨制成10%組織勻漿,3 000 r·min-1速度離心15 min取上清,凍存?zhèn)溆?。血清及組織勻漿上清于室溫環(huán)境平衡 1 h,3 000 r·min-1速度離心15 min,加入待測樣品10 μL、酶標抗體100 μL和樣品稀釋劑 40 μL,同時作空白孔和標準孔,置于 37 ℃恒溫箱中孵育1 h,隨后洗板6次,加入底物溶液,37 ℃下避光孵育15 min,加入終止液,于酶標儀450 nm下檢測各反應(yīng)孔OD值。根據(jù)標準品濃度和OD值繪制標準曲線,代入樣品孔 OD值,得出血清和組織勻漿樣本中MPO的水平。

1.4.4 結(jié)腸組織中NF-κB p65的陽性表達

干預(yù)后,大鼠經(jīng)腹主動脈采血后處死,取部分結(jié)腸組織,置于4%甲醛溶液中固定48 h,經(jīng)梯度乙醇脫水,二甲苯浸泡透明后包埋,作5 μm厚石蠟切片。切片經(jīng)脫蠟、透明和脫水后,滴加3%過氧化氫室溫孵育20 min,于pH 6.0的枸櫞酸緩沖液中加熱煮沸,進行抗原熱修復(fù),滴加BSA封閉液孵育20 min,加入一抗4 ℃過夜,加入二抗,37 ℃反應(yīng) 20 min,滴加 SABC,37 ℃反應(yīng)20 min,滴加DAB顯色,中性樹脂封片后觀察拍照,每例樣本隨機取5個視野,計數(shù)陽性表達細胞數(shù)。

1.4.5 結(jié)腸組織中SIRT1/NF-κB通路相關(guān)蛋白表達

治療結(jié)束后,大鼠經(jīng)腹主動脈采血后處死,取結(jié)腸組織100～200 mg,分裝置于﹣80 ℃冰箱凍存。4組分別選取 5例樣本,組織解凍后剪碎,勻漿機勻漿,加入RIPA裂解液,冰上裂解提取組織總蛋白,采用BCA法于562 nm波長下測定總蛋白濃度。分別上樣10 μL蛋白樣品,經(jīng)凝膠電泳分離,PVDF轉(zhuǎn)膜后加入 5%封閉液封閉 2 h,滴加 IκBα、p-IκBα、IKKβ、p-IKKβ、NF-κB p65、AC-p65和SIRT1一抗(1:1 000),于4 ℃冰箱過夜,次日 TBST清洗,滴加二抗(1:5 000),室溫環(huán)境孵育2 h, TBST洗膜,滴加ECL顯影劑,凝膠成像系統(tǒng)曝光成像,用Image J軟件分析各條帶灰度值,以GAPDH為內(nèi)參計算SIRT1/NF-κB通路蛋白的相對表達量。

1.4.6 結(jié)腸組織中上皮鈣黏附素(epithelial calcium-dependent cell adhesion molecule,E-cadherin)和緊密連接蛋白的閉合蛋白(occludin)的mRNA表達

干預(yù)后,大鼠經(jīng)腹主動脈采血后處死,取結(jié)腸組織50 mg,分裝保存于﹣80 ℃冰箱。4組分別選取5個樣本,組織解凍后剪碎成若干塊,用 Trizol一步法提取結(jié)腸組織總RNA,紫外分光光度法檢測總RNA濃度,將組織 RNA逆轉(zhuǎn)錄得到 cDNA后,以 cDNA為模板檢測E-cadherin和 occludin的 mRNA水平。E-cadherin正向引物 5’-CGTGAATGAAGCCCCCATCT-3’,反向引物3’-AAATGGCACCAGTCTCTGGG-5’。Occludin正向引物5’-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3’, 反 向 引 物5’-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3’。GAPDH正向引物5’-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3’,反 向 引 物 5’-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3’。95 ℃ 5 min預(yù)變性,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,40個循環(huán)后,72 ℃再延伸5 min,以GAPDH為內(nèi)參,mRNA相對表達量采用 2﹣ΔΔCt法分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行分析。符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標準差表示,組間兩兩比較采用 LSD-t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。采用GraphPad Prism 5.0軟件制圖。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠DAI和CMDI評分及體質(zhì)量比較

造模后,與空白組比較,其余3組大鼠DAI和CMDI評分明顯升高(P＜0.05),體質(zhì)量明顯減輕(P＜0.05)。干預(yù)后,藥物組和穴位埋線組大鼠DAI和CMDI評分與模型組比較均顯著降低(P＜0.05),體質(zhì)量明顯增加(P＜0.01)。詳見表1。

表1 4組DAI和CMDI評分及體質(zhì)量比較(±s, n＝10)

表1 4組DAI和CMDI評分及體質(zhì)量比較(±s, n＝10)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與模型組比較2)P＜0.05。

組別 DAI/分 CMDI/分 體質(zhì)量/g空白組 0.00±0.00 0.45±0.12 238.69±13.85模型組 3.02±0.431) 3.37±0.581) 193.16±17.611)藥物組 1.28±0.311)2) 1.32±0.251)2) 221.96±19.171)2)穴位埋線組 1.44±0.261)2) 1.47±0.301)2) 217.85±16.431)2)

2.2 4組大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)比較

病理學(xué)檢查結(jié)果可見,空白組大鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)正常,腺體形態(tài)規(guī)則,杯狀細胞排列整齊,未見水腫、潰瘍及炎性浸潤;模型組結(jié)腸黏膜可見明顯壞死、糜爛和潰瘍形成,腺體排列不規(guī)則,杯狀細胞減少,黏膜下層較多炎性細胞浸潤,病理學(xué)組織評分明顯高于空白組(P＜0.01);藥物組和穴位埋線組經(jīng)干預(yù)后,腸黏膜糜爛、潰瘍較模型組明顯減輕,腺體和杯狀細胞數(shù)目增多,排列較規(guī)則,黏膜充血、水腫和炎性浸潤顯著改善,病理學(xué)評分明顯低于模型組(P＜0.01)。詳見圖1和圖2。

圖1 4組結(jié)腸病理組織學(xué)評分比較(±s, n＝10)

圖2 4組大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)比較

2.3 4組大鼠血清和結(jié)腸組織MPO活性比較

與空白組比較,模型組大鼠血清和結(jié)腸組織中MPO的水平明顯升高(P＜0.05);藥物組和穴位埋線組經(jīng)干預(yù)后,大鼠血清和結(jié)腸組織 MPO的水平較模型組明顯降低(P＜0.05)。詳見表2。

表2 4組血清和結(jié)腸組織MPO活性比較(±s, n＝10)單位:(ng·mL﹣1)

表2 4組血清和結(jié)腸組織MPO活性比較(±s, n＝10)單位:(ng·mL﹣1)

注:與空白組比較1)P＜0.05;與模型組比較2)P＜0.05。

組別 血清MPO 結(jié)腸MPO空白組 12.15±2.43 1.26±0.58模型組 28.30±3.651) 5.73±1.061)藥物組 16.68±1.871)2) 2.34±1.141)2)穴位埋線組 19.37±2.411)2) 2.92±0.871)2)

2.4 4組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65表達的比較

空白組大鼠結(jié)腸組織見少量 NF-κB p65表達;與空白組比較,模型組結(jié)腸組織細胞質(zhì)著色較深,NF-κB p65的陽性細胞表達數(shù)顯著增多(P＜0.05);藥物組和穴位埋線組大鼠經(jīng)干預(yù)后,結(jié)腸組織細胞質(zhì)陽性染色減弱,NF-κB p65陽性細胞表達數(shù)較模型組明顯減少(P＜0.05)。詳見圖3。

圖3 4組大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65表達(IHC×400,±s, n＝10)

2.5 4組大鼠結(jié)腸組織SIRT1/NF-κB通路蛋白表達的比較

與空白組比較,模型組大鼠結(jié)腸組織中 p-IκBα、p-IKKβ和 NF-κB p65、p-NF-κB p65 及 AC-p65 的蛋白表達顯著增多,SIRT1的蛋白表達明顯減少(P＜0.05)。與模型組比較,藥物組和穴位埋線組結(jié)腸組織中 p-IκBα、p-IKKβ、NF-κB p65、p-NF-κB p65、AC-p65的蛋白表達顯著下調(diào),SIRT1的表達明顯上調(diào)(P＜0.05)。詳見圖4。

圖4 4組大鼠結(jié)腸組織SIRT1/NF-κB通路蛋白表達(±s, n＝10)

2.6 4組大鼠結(jié)腸組織 E-cadherin和 occludin的mRNA表達的比較

與空白組比較,模型組大鼠結(jié)腸組織中E-cadherin、occludin的 mRNA表達顯著減少(P＜0.05)。與模型組比較,藥物組和穴位埋線組E-cadherin和 occludin的 mRNA表達明顯增多(P＜0.01)。詳見圖5。

圖5 4組大鼠結(jié)腸組織E-cadherin和occludin的mRNA表達(±s, n＝10)

3 討論

隨著近年生活節(jié)奏的加快和膳食結(jié)構(gòu)的改變,UC發(fā)病率逐年攀升,其病程遷延,難以治愈,且伴有一定癌變風(fēng)險,嚴重影響患者的身心健康[12]。目前西醫(yī)對UC尚無理想治療方案,針對其臨床癥狀,常采用抗感染、免疫抑制劑等藥物進行治療,但西藥治療存在不良反應(yīng)多、停藥后易復(fù)發(fā)等缺點[13]。穴位埋線作為中醫(yī)特色的外治療法,通過對特定腧穴的持久刺激來激發(fā)經(jīng)絡(luò)氣機,達到調(diào)和氣血陰陽,疏通經(jīng)脈的作用,且價格低廉,副作用少,在 UC的非手術(shù)療法中具有較大優(yōu)勢[14]。

中醫(yī)學(xué)將UC歸屬為“腸癖”“痢疾”等范疇,認為其病位在大腸,發(fā)病與脾、胃密切相關(guān),以脾虛濕蘊為本,血瘀凝滯為標,治宜化瘀活血,溫陽通絡(luò)[15]。穴位埋線療法是一種以經(jīng)絡(luò)理論為基礎(chǔ)的中醫(yī)外治手段,通過將羊腸線埋入穴位并放置一定時間,以產(chǎn)生較常規(guī)針刺更為持久的針感刺激,起到激發(fā)經(jīng)絡(luò)氣機,疏通經(jīng)脈的作用;羊腸線在體內(nèi)分解和吸收的過程亦可增強人體免疫功能,提高機體應(yīng)激能力[16]。在臨床應(yīng)用中對慢性胃炎、腸炎、UC等慢性病均有顯著療效[17]。根據(jù)UC的病因病機,臨床取穴主要以足陽明胃經(jīng)、足太陽膀胱經(jīng)腧穴為主。足陽明經(jīng)屬胃絡(luò)脾,多氣多血,與脾胃功能和能量代謝關(guān)系密切,為治療 UC的根本所在;足太陽經(jīng)屬“陽中之陽”,可參與經(jīng)脈氣血循環(huán),振奮脾陽[18]。溫淑婷等[19]通過梳理近 15年穴位埋線治療UC的選穴規(guī)律發(fā)現(xiàn),選擇經(jīng)脈以足陽明經(jīng)和足太陽經(jīng)居多,腧穴使用頻次以足三里、天樞和大腸俞最高。

SASP是治療UC的常用藥物,該藥進入結(jié)腸后經(jīng)細菌分解為 5-氨基水楊酸和磺胺吡啶,5-氨基水楊酸可通過影響腸黏膜組織花生四烯酸的代謝,清除自由基等發(fā)揮抗炎作用,緩解腸道炎癥[20]。本研究選取足太陽經(jīng)大腸俞及足陽明經(jīng)足三里、上巨虛、天樞穴,通過DSS自由飲用法復(fù)制UC大鼠模型,同時選擇SASP作為陽性對照藥物,觀察埋線治療對 UC腸黏膜的修復(fù)效果。足三里為胃的下合穴,針刺有疏調(diào)陽明經(jīng)氣、調(diào)理腸胃運化之效;天樞為大腸之募穴,主調(diào)暢腸腑氣機,化瘀活血;上巨虛為大腸之下合穴,與天樞穴合募配伍,可起到調(diào)腸和胃作用,與足三里合用,又可提高機體免疫機能;大腸俞為大腸之背俞穴,與天樞穴俞募相配,有理氣降逆、調(diào)和大腸腑氣之功用[21]。UC大鼠經(jīng)穴位埋線治療后,DAI和CMDI評分較模型組顯著降低,體質(zhì)量顯著增長,結(jié)腸黏膜潰瘍、糜爛和炎性浸潤等病理表現(xiàn)得到有效改善,同時顯著降低了大鼠血清和結(jié)腸組織中炎癥指標 MPO的活性,提示埋線療法能夠顯著減輕UC大鼠結(jié)腸組織中性粒細胞浸潤程度,促進腸黏膜損傷愈合。

NF-κB作為一條經(jīng)典的炎癥通路,在促進炎性細胞因子表達,誘發(fā)機體炎癥反應(yīng)方面具有重要作用[22]。在靜息狀態(tài)下,NF-κBp50/p65通過與IκB結(jié)合在細胞質(zhì)中保持非活性狀態(tài);當機體受到外部刺激時,IKK發(fā)生磷酸化,并促使IκB磷酸化和降解,降解的IκB進入細胞核后激活 NF-κB,進而促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生和持續(xù)[23]。以往研究表明[24-25],在 UC動物模型和患者中存在 NF-κB通路的過度激活,而通過靶向抑制其活化能夠緩解結(jié)腸組織炎癥損傷,對UC起到治療作用。本研究發(fā)現(xiàn),UC大鼠結(jié)腸組織中NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IKKβ、p-IκBα及 AC-p65的蛋白水平均顯著上調(diào),p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ的比值明顯增加,經(jīng)穴位埋線治療后,NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IKKβ、p-IκBα及 AC-p65 的 表 達 顯 著 減 少 ,p-IκBα/IκBα 和p-IKKβ/IKKβ比值明顯降低,表明穴位埋線能夠作用于 NF-κB通路,通過抑制 NF-κB磷酸化和乙?；l(fā)揮對UC的抗炎修復(fù)作用。SIRT1是從酵母中分離的一類去乙?；?在炎癥性腸病中,活化并處于高水平的SIRT1能通過調(diào)節(jié)腸道菌群、抑制炎癥來維持腸黏膜屏障功能,保護腸上皮細胞[26]。此外,高表達的 SIRT1還可使 NF-κB去乙?；?通過抑制 NF-κB的活性以減輕炎癥程度。SIRT1表達的降低可減少對NF-κB 信號通路的抑制作用,導(dǎo)致炎癥因子表達升高[27]。陳銳等[28]研究證實,SIRT1可通過抑制NF-κB的表達來降低壞死性小腸結(jié)腸炎中炎癥因子的水平。在本實驗中,UC大鼠結(jié)腸 SIRT1的蛋白表達顯著減少,而埋線治療明顯上調(diào)了 SIRT1的水平,提示穴位埋線可能通過促進SIRT1的表達,抑制NF-κB及其下游炎癥因子生成以保護UC腸黏膜損傷。

腸黏膜屏障可抵御有害物質(zhì)的侵襲,在腸道中具有重要的防御功能。UC患者腸鏡檢查可見黏膜屏障的破壞,腸屏障功能的受損可引起機體免疫異常,使炎癥反應(yīng)和腸上皮細胞損傷進一步加重,導(dǎo)致 UC遷延反復(fù)[29]。研究[30]證實,NF-κB的過度活化將導(dǎo)致腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)等炎癥介質(zhì)的過度表達,引起腸黏膜炎癥反應(yīng),從而造成屏障的損傷。NF-κB阻斷劑能夠通過上調(diào) occludin、E-cadherin的水平以改善腸屏障功能[31]。熊興軍等[32]發(fā)現(xiàn),木瓜總?cè)瓶赏ㄟ^調(diào)節(jié)SIRT1/NF-κBp65通路上調(diào)Occludin、E-cadherin等腸黏膜屏障保護因子的表達以減輕腸黏膜屏障損傷,發(fā)揮對 UC小鼠的治療作用。本研究檢測大鼠結(jié)腸組織occludin和E-cadherin的mRNA表達發(fā)現(xiàn),UC大鼠E-cadherin、occludin的mRNA表達明顯降低,應(yīng)用埋線治療后,明顯上調(diào)了其表達水平。提示穴位埋線能夠促進腸上皮緊密連接蛋白的表達,恢復(fù)UC受損的腸屏障功能。

綜上所述,本研究表明穴位埋線療法可顯著改善大鼠腸黏膜的炎癥,降低DAI、CMDI及病理組織學(xué)評分,其作用機制可能與調(diào)控SIRT1/NF-κB信號通路、上調(diào)黏膜屏障保護因子水平及修復(fù)黏膜上皮屏障功能相關(guān)。