牛尾草根中二萜類成分及其細胞毒活性研究

廖紫柔，梁昕然，李偉昌，張宏麗，余茜

（1.廣東藥科大學臨床藥學院，廣東廣州 510006；2.云南省紅河州哈尼族彝族自治州衛(wèi)生健康委員會，云南蒙自 661100）

牛尾草Isodon ternofolius（D.Don）Kudo 為唇形科（Labiatae）香茶菜屬（Isodon）多年生粗壯草本或半灌木、灌木，又名三葉香茶菜、四楞草、龍膽草、三叉金、三姊妹、傷寒頭、蟲牙藥等。主要分布于我國的云南南部、西南部及東南部，貴州南部，廣西及廣東等地區(qū)。生長于空曠坡上或疏林下[1]。全草入藥，是廣西壯族民間常用的中草藥[2]。牛尾草具有清熱解毒、利濕消腫的功效，主要用于治療痢疾腸炎、黃疸性肝炎、咽喉炎、扁桃腺炎、毒蛇咬傷、牙疼等。牛尾草是復方三葉香茶菜片的主要成分，用于肝膽濕熱所引起的脅痛、嘔吐、惡心等癥的輔助治療?，F(xiàn)代研究表明牛尾草中含有萜類[3-7]、黃酮類[7]、木脂素類[8]、苯乙醇苷[8]、不飽和內酯等化學成分[9]?，F(xiàn)代藥理學研究表明牛尾草具有抗腫瘤[7]、保肝[10-11]、抗炎[8]等活性。

本課題組前期抗腫瘤活性篩選研究結果表明牛尾草根的乙酸乙酯部位具有較強的細胞毒活性。本研究在細胞毒活性的指導下，對牛尾草根的乙酸乙酯部位進行了系統(tǒng)的化學成分研究。分離得到9 個二萜類化合物，應用質譜和核磁等波譜方法進行結構鑒定，分別鑒定為(+)-脫氫松香烷[(+)-dehydroabietane，1]、(+)-7-羰基-松香烷-8,11,13-三烯[(+)-7-dehydroabietanone，2]、(4αS,10αS)-1,2,3,4,4α,10α-hexahydro-1,1,4α-trimethyl-7-(1-methylethyl)-phenanthrene (3)、ent-16β-H-3-oxokauran-17-ol (4)、ent-3S,16S,17-trihydroxy-kauran-2-one (5)、ent-16S,17-dihydroxykauran-3-one(6)、對映-3β,(13S)-二羥基阿替生烷-16烯-14酮(ent-3β,(13S)-dihydroxyatis-16-en-14-one，7)、ent-16S,17-dihydroxyatisan-3-one(8)、ent-atisane-3β,16α,17-triol (9)?；衔?～3 為松香烷型二萜類化合物，化合物4～6 為貝殼杉烷型二萜類化合物，化合物7～9 為阿替生烷型二萜類化合物?；衔?～9 為首次從該植物中分離得到（圖1）。此外，還采用MTT 法對分離鑒定的9 個二萜類化合物的體外細胞毒活性進行了測試，結果表明化合物1～4 對3 株腫瘤細胞（MCF-7，A549 和HCT116）的增殖具有一定的抑制活性，IC50值的范圍在28～83 μmol/L。該研究進一步豐富了牛尾草中二萜類化合物的結構類型，為合理地開發(fā)利用牛尾草資源提供實驗依據。

圖1 化合物1～9的結構Figure 1 Structures of compound 1-9

1 儀器與材料

1H-NMR、13C-NMR 采用Bruker Advance III?400和Bruker Advance III?500 型核磁共振儀（德國Bruker 公司），溶劑為CDCl3和CD3OD（美國Cam‐bridge Isotope Laboratories，Inc.）；島 津LC-20AT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）；ESI 數據由儀器MDS SCIEX API 3200 LC/MS/MS 采集；EYELA N-1200A 型旋轉蒸發(fā)器（日本東京理化）；CKX41 型倒置顯微鏡（日本Olympus 公司）；PowerWave XS2 型全波長酶標儀（美國Biotek 公司）；MCO-15AC 型CO2培養(yǎng)箱（日本Sanyo 公司）；薄層色譜硅膠GF254和柱層析硅膠（100～200 目和300～400 目，青島海洋化工有限公司）；MCI 吸附樹脂（CHP20P，75～150 μm，日本三菱化工）；RP-C18（150～200 目，德國Merck 公司）；羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（瑞典Amersham Biosciences 公司）；噻唑藍（MTT，德國BIOFROX 公司）；胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶、DEME 培養(yǎng)基和RPMI-1640 培養(yǎng)基（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；順鉑（cisplatin，大連美侖生物）；人乳腺癌細胞（MCF-7）、人非小細胞肺癌細胞（A549）和人結腸癌細胞（HCT116）均購買自中國科學院上海細胞庫。95%乙醇，甲醇，乙酸乙酯和二氯甲烷（AR，天津市致遠化學試劑有限公司）。

牛尾草干燥根在2018 年6 月采集于廣西壯族自治區(qū)玉林市，由中山大學唐貴華副教授鑒定為唇形科植物牛尾草Isodon ternofolius（D.Don）Kudo 的干燥根。植物標本（2018121101）存放于廣東藥科大學藥學院。

2 提取與分離

牛尾干燥根25 kg，粉碎，過60目的篩，加入20 L的95%乙醇熱回流提取，提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮得到900 g。濃縮液用2 L 水混懸，用乙酸乙酯（EtOAc，3×5 L）進行萃取。減壓濃縮得到乙酸乙酯部位600 g。將乙酸乙酯部位（600 g）經MCI吸附樹脂柱色譜分離（1 800 g，10×100 cm），用MeOH/H2O（3∶7～10∶0）梯度洗脫，薄層色譜檢測合并為9 個組分（Fr.A～I）。Fr.F（80 g）經Sephadex LH-20 柱分離（80 g，3×100 cm），用MeOH 洗脫，薄層色譜檢測合并得到3 個組分（Fr.F1～Fr.F3）。其中Fr.F1（20 g）依次經硅膠柱色譜純化（160 g，5×60 cm），用CH2Cl2/MeOH 150∶1 洗脫，RP-C18柱色譜純化（50 g，3×40 cm），用MeOH/H2O（7∶3～10∶1）梯度洗脫，再經硅膠柱色譜進一步純化（10 g，1×20 cm），用CH2Cl2/MeOH（100∶1）洗脫，得到化合物1（7 mg）和化合物3（12 mg）。Fr.G（134 g）經膠柱色譜分離（400 g，6×100 cm），用CH2Cl2/MeOH（200∶1～50∶1）梯度洗脫，得到2 個組分（Fr.G1 和Fr.G2）。Fr.G1（24 g）經Sephadex LH-20 純化（80 g，3×100 cm），用MeOH 洗脫，得到2 個組分（Fr.G1a和Fr.G1b）。Fr.G1a（0.1 g）經過硅膠柱色譜進一步純化（10 g，1×20 cm），用CH2Cl2/MeOH（200∶1）洗脫，得到化合物5（10 mg）。Fr.G1b（40 mg）經過硅膠柱色譜進一步純化（8 g，1 × 20 cm），用CH2Cl2/MeOH（100∶1）洗脫，得到化合物2（6 mg）。Fr.G2（34 g）經RP-C18柱色譜純化(170 g，5 × 60 cm)，用MeOH/H2O（6∶4～10∶1）梯度洗脫，得到2 個組分（Fr.G2a 和Fr.G2b）。Fr.G2a（12 g）經硅膠柱色譜純化（150 g，5×60 cm），用CH2Cl2/MeOH（100∶1）洗脫和Sephadex LH-20 進一步純化（80 g，3×60 cm），用MeOH 洗脫，得到化合物4（23 mg）和化合物6（13 mg）。Fr.I（185 g）經硅膠柱色譜純化（400 g，6×100 cm），用CH2Cl2/MeOH 梯度洗脫，得到4 個組分（Fr.I1～Fr.I4）。Fr.I3（13 g）經Sephadex LH-20 分離（150 g，5×60 cm），用MeOH 洗脫，再經硅膠柱色譜進一步純化（10 g，1×20 cm），用CH2Cl2/MeOH（100∶1）洗脫，得到化合物9（8 mg）。Fr.I4（36 g）經RP-C18柱色譜純化（160 g，5×60 cm），用MeOH/H2O（6∶4～1∶0）洗脫，分離得到4個組分（Fr.I4a～Fr.I4d）。Fr.I4b（7 g）經硅膠柱色譜純化（150 g，5×60 cm），用CH2Cl2/MeOH（100∶1）洗脫，再經Sephadex LH-20柱進一步純化（80 g，3×100 cm），用MeOH 洗脫，得到化合物7（6 mg）。Fr.I4c（0.6 g）經Sephadex LH-20 柱純化（80 g，3×100 cm），用MeOH 洗脫，再經硅膠柱色譜進一步純化（10 g，1×20 cm），用CH2Cl2/MeOH（80:1）洗脫，得到化合物8（7 mg）。化合物1～9的純度驗證均通過在三種不同極性展開系統(tǒng)中展開為單一斑點的方法進行驗證?；衔?～9 的結構鑒定應用質譜和核磁等波譜方法進行鑒定。

3 結構鑒定

化合物1:無色液體，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z:269[M-H]-，分子式為C20H30。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH7.18 (1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，6.99 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-12)，6.89 (1H，s，H-14)，2.90(2H，m，H2-7)，2.84 (1H，sept，J=7.0 Hz，H-15)，2.28(1H，d，J=12.3 Hz，H-1a)，1.88 (1H，m，H-6a)，1.62～1.81 (3H，m，H2-2，H-6b)，1.54 (1H，m，H-3a)，1.48(1H，d，J=12.8 Hz，H-3b)，1.42 (1H，dd，J=12.5，3.5 Hz，H-1b)，1.34 (1H，dd，J=12.5，2.1 Hz，H-5)，1.24(3H，s，H3-16)，1.22 (3H，s，H3-17)，1.19 (3H，s，H3-20)，0.95 (3H，s，H3-18)，0.93 (3H，s，H3-19)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δC147.6 (C-13)，145.4 (C-9)，135.0 (C-8)，126.8 (C-14)，124.2 (C-12)，123.8 (C-11)，50.4 (C-5)，41.8 (C-3)，38.9 (C-1)，37.5 (C-10)，33.5 (C-15)，33.3 (C-4)，30.5 (C-7)，24.9 (C-20)，24.0(C-16，17)，21.6 (C-18，19)，19.4 (C-6)，19.1 (C-2)。以上數據與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物1為(+)-脫氫松香烷[(+)-dehydroabietane]。

化合物2:白色粉末，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z: 283 [M-H]-，分子式為C20H28O。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δH7.90 (1H，s，H-14)，7.41 (1H，d，J=8.1 Hz，H-12)，7.32 (1H，d，J=8.1 Hz，H-11)，2.94(1H，sept，J=7.0 Hz，H-15)，2.75 (1H，dd，J=18.2，4.5，H-6a)，2.68 (1H，dd，J=18.2，13.5 Hz，H-6b)，2.35(1H，d，J=12.0 Hz，H-1a)，1.90(1H，dd，J=13.0，4.0 Hz，H-5)，1.80(1H，m，H-2a)，1.72(1H，m，H-2b)，1.56 (2H，m，H-1b，H-3a)，1.28 (3H，s，H3-20)，1.25(6H，s，H3-16，H3-17)，1.21 (1H，m，H-3b)，1.02 (3H，s，H3-18)，0.95 (3H，s，H3-19)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δC199.9 (C-7)，153.9 (C-9)，146.7 (C-13)，132.7 (C-14)，130.9 (C-8)，125.1 (C-11)，123.8 (C-12)，49.6 (C-5)，41.6 (C-3)，38.2 (C-1)，38.1 (C-10)，36.5 (C-6)，33.8 (C-15)，33.4 (C-4)，32.8 (C-18)，24.0(C-20，C-17)，23.6 (C-16)，21.5 (C-19)，19.1 (C-2)。以上數據與文獻報道基本一致[12]，故鑒定化合物2為(+)-7-羰基-松香烷-8,11,13-三烯[(+)-7-dehydroabietanone]。

化合物3:白色粉末，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z: 267 [M-H]-，分子式為C20H28。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δH7.09 (1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，7.04(1H，dd，J=7.9，1.5 Hz，H-12)，6.91 (1H，d，J=1.5 Hz，H-14)，6.53 (1H，dd，J=9.5，2.2 Hz，H-7)，6.00(1H，dd，J=9.5，2.2 Hz，H-6)，2.85 (1H，sept，J=7.0 Hz，H-15)，2.16(1H，d，J=13.0 Hz，H-5)，2.12(1H，t，J=2.6 Hz，H-1a)，1.77 (1H，brd，J=13.0 Hz，H-2a)，1.69 (1H，d，J=3.0 Hz，H-2b)，1.65 (1H，m，H-1b)，1.62(1H，m，H-3a)，1.52(1H，brd，J=13.5 Hz，H-3b)，1.23 (6H，d，J=7.0，1.2 Hz，H3-16，H3-17)，1.05 (3H，s，H3-18)，1.04 (3H，s，H3-20)，0.96 (3H，s，H3-19)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δC146.2 (C-13)，145.9(C-9)，132.9 (C-8)，130.4 (C-6)，127.9 (C-7)，125.7(C-12)，124.6 (C-14)，121.9 (C-11)，51.3 (C-5)，41.2(C-3)，37.7 (C-10)，36.1 (C-1)，33.7 (C-15)，33.0 (C-4)，32.7(C-18)，24.1(C-16，17)，22.6(C-19)，20.5(C-20)，19.1 (C-2)。以上數據與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物3 為(4αS,10αS)-1,2,3,4,4α,10α-hexahydro-1,1,4α-trimethyl-7-(1-methylethyl)-phenanthrene。

化合物4:黃色粉末，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z: 303 [M-H]-，分子式為C20H32O2。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δH3.68～3.76(2H，m，H2-17)，2.47(2H，dd，J=8.5，6.5 Hz，H2-2)，2.14～2.25(2H，m，H-11a，H-13)，1.96～2.02 (2H，m，H-1a,H-14a)，1.55～1.59 (3H,m,H-11b，H-12a，H-15a)，1.45～1.52 (4H，m，H-1b，H-5，H-12b，H-15b)，1.36～1.44 (4H，m，H2-6，H2-7)，1.26（1H，d，J=7.0 Hz，H-9），1.10（1H，m，H-14b），1.08(3H，s，H3-18)，1.06(3H，s，H3-20)，1.03(3H，s，H3-19)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δC218.3 (C-3)，64.2 (C-17)，56.2(C-9)，54.6(C-5)，47.3(C-4)，44.2(C-8)，43.5(C-15)，43.3 (C-16)，41.2 (C-10)，40.2 (C-7)，39.5 (C-1)，38.7 (C-14)，37.1 (C-13)，34.2 (C-2)，27.4 (C-18)，26.0 (C-12)，21.9 (C-6)，21.1 (C-19)，19.6 (C-11)，17.9(C-20)。以上數據與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物4為ent-16β-H-3-oxokauran-17-ol。

化合物5:黃色粉末，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z:335 [M-H]-，分子式為C20H32O4。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δH3.85 (1H，d，J=4.0 Hz，3-OH)，3.50(1H，d，J=4.0 Hz，H-3)，3.46 (1H，d，J=11.5 Hz，H-17a)，3.37(1H，d，J=11.5 Hz，H-17b)，2.69(1H，d，J=12.5 Hz，H-1a)，2.08 (1H，m，H-11a)，2.03 (1H，brd，J=12.0 Hz，H-13)，1.88(1H，brd，J=12.0 Hz，H-12a)，1.79 (1H，brd，J=10.5 Hz，H-14a)，1.65 (1H，brd，J=12.4 Hz，H-1b)，1.55 (1H，d，J=3.5 Hz，H-15a)，1.50(1H，m，H-6a)，1.47 (1H，d，J=3.5 Hz，H-12b)，1.38～1.45 (4H，m，H2-7，H-11b，H-6b)，1.34 (1H，dd，J=13.5,3.5 Hz,H-15b)，1.15 (3H，s，H3-18)，1.03 (1H，m，H-5)，1.00 (1H，m，H-14b)，0.96 (3H，s，H3-20)，0.92(1H，d，J=7.5 Hz，H-9)，0.67(3H，s，H3-19)。13CNMR (100 MHz，CDCl3)δC211.3 (C-2)，83.0 (C-3)，79.6 (C-16)，69.7 (C-17)，56.3 (C-9)，54.4 (C-5)，53.5(C-1)，52.1 (C-15)，45.6 (C-4)，45.4 (C-10)，43.6(C-8)，41.2 (C-7)，40.7 (C-13)，37.7 (C-14)，29.7(C-18)，26.5 (C-12)，20.1 (C-6)，19.0 (C-11)，18.7(C-20)，16.4 (C-19)。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物5 為ent-3S,16S,17-trihydroxykauran-2-one。

化合物6:黃色粉末，溶于三氯甲烷，ESI-MSm/z:319 [M-H]-，分子式為C20H32O3。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δH3.45 (1H，d，J=10.9 Hz，H-17a)，3.36(1H，d，J=10.9 Hz，H-17b)，2.45(2H，dd，J=6.5，2.0 Hz，H2-2)，2.08 (1H，m，H-11a)，1.98～2.04 (2H，m，H-13，H-12a)，1.92 (1H，dd，J=12.5，2.0 Hz，H-1a)，1.77 (1H，m，H-14a)，1.54～1.59 (2H，m，H2-15)，1.35～1.52(9H，m，H-1b，H-11b，H-12b，H2-6，H2-7，H-9，H-14b)，1.18(1H，brd，J=8.7 Hz，H-5)，1.06(3H，s，H3-18)，1.05(3H，s，H3-19)，1.00(3H，s，H3-20)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δC218.6 (C-3)，79.6 (C-16)，69.8(C-17)，55.6(C-5)，54.1(C-9)，52.1(C-15)，47.3(C-4)，43.4 (C-8)，40.9 (C-14)，40.7 (C-13)，39.3 (C-7)，38.6(C-10)，37.9 (C-1)，34.1 (C-2)，27.4 (C-18)，26.7(C-12)，21.3 (C-6)，21.0 (C-19)，19.3 (C-11)，17.7(C-20)。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物6為ent-16S,17-dihydroxykauran-3-one。

化合物7: 白色粉末，溶于甲醇，ESI-MSm/z:317 [M-H]-，分子式為C20H30O3。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δH4.95 (1H，d，J=1.4 Hz，H-17a)，4.81 (1H，d，J=1.4 Hz，H-17b)，3.83 (1H，d，J=3.0 Hz，H-13)，3.18 (1H，d，J=8.0 Hz，H-3)，2.69 (1H，q，J=3.0 Hz，H-12)，2.23～2.34 (3H，m，H-7a，H2-15)，1.91 (1H，m，H-1a)，1.78 (1H，m，H-11a)，1.52～1.68(5H，m，H2-2，H-9，H2-6),1.36～1.47 (1H，m，H-11b)，1.06 (1H，s，H-5)，0.99 (3H，s，H3-18)，0.97～0.96(2H，m，H-1b，H-7b)，0.77(3H，s，H3-19)，0.71(3H，s，H3-20)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δC219.1 0(C-14)，145.0 (C-16)，110.6 (C-17)，79.5 (C-3)，76.0(C-13)，55.8 (C-5)，53.2 (C-9)，49.2 (C-8)，47.3(C-12)，44.4 (C-15)，39.7 (C-4)，38.9 (C-10)，37.7(C-1)，32.2(C-7)，28.8(C-18)，27.3(C-2)，26.5(C-11)，19.8 (C-6)，16.2 (C-19)，14.3 (C-20)。以上數據與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物7 為對映-3β,(13S)-二羥基阿替生烷-16 烯-14 酮[ent-3β,(13S)-di‐hydroxyatis-16-en-14-one]。

化合物8: 白色粉末，溶于氯仿，ESI-MSm/z:319[M-H]-，分子式為C20H32O3。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH3.51 (1H，d，J=11.1 Hz，H-17a)，3.38 (1H，d，J=11.1 Hz，H-17b)，2.51～2.60 (1H，m，H-2a)，2.26～2.34(1H，m，H-2b)，1.95～2.01(1H，m，H-11a)，1.78～1.86 (3H，m，H-1a，H-12，H-14a)，1.55～1.62(1H，m，H-13a)，1.34～1.57 (5H，m，H-1b，H2-6，H2-7)，1.12～1.33 (6H，m，H-5，H-9，H-11b，H-13b，H2-15)，1.07 (3H，s，H3-18)，1.04 (3H，s，H3-19)，1.01 (3H，s，H3-20)，0.73～0.81 (1H，m，H-14b)。13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δC218.0 (C-3)，74.2 (C-16)，68.9 (C-17)，55.6 (C-5)，52.3 (C-15)，50.9 (C-9)，47.7 (C-4)，38.8 (C-7)，38.0 (C-1)，37.2 (C-10)，34.1 (C-2)，32.9(C-8)，32.0 (C-12)，27.2 (C-14)，26.2 (C-18)，23.3(C-13)，23.0 (C-11)，21.7 (C-19)，19.7 (C-6)，13.5(C-20)。以上數據與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物8為ent-16S,17-dihydroxyatisan-3-one。

化合物9:白色粉末，溶于甲醇、三氯甲烷，ESIMSm/z: 321 [M-H]-，分子式為C20H34O3。1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δH3.50 (1H，d，J=11.2 Hz，H-17a)，3.36 (1H，d，J=11.2 Hz，H-17b)，3.17 (1H，dd，J=12.0，4.0 Hz，H-3)，1.95～2.00 (1H，m，H-2a)，1.82～1.87 (1H，m，H-2b)，1.79 (1H，t，J=2.8 Hz，H-11a)，1.55～1.67 (4H，m，H-9，H-12，H-13a，H-14a)，1.44～1.51 (2H，m，H-5，H-13b)，1.37～1.42 (2H，m，H2-6)，1.20～1.35 (2H，m，H2-7)，1.14～1.19 (2H，m，H2-1)，1.05 (2H，m，H2-15)，1.00 (1H，m，H-11b)，0.98(3H，s，H3-18)，0.97 (3H，s，H3-19)，0.80 (1H，m，H-14b),0.79 (3H，s，H3-20)。13C-NMR (125 MHz，CD3OD)δC79.3 (C-3)，74.7 (C-16)，69.2 (C-17)，56.1(C-5)，52.7(C-15)，52.5(C-9)，40.1(C-7)，39.3(C-4)，38.3 (C-1)，38.0 (C-8)，33.3 (C-10)，32.5 (C-12)，28.4(C-18)，27.9 (C-2)，27.0 (C-14)，23.8 (C-13)，23.6(C-11)，19.1 (C-6)，15.9 (C-19)，14.4 (C-20)。以上數據與文獻報道基本一致[17]，故鑒定化合物9 為ent-atisane-3β,16α,17-triol。

4 MTT法檢測細胞毒活性

根據文獻的方法[18]，采用MTT 法檢測化合物1～9的體外細胞毒活性。選用人乳腺癌細胞（MCF-7）、人結腸癌細胞（HCT116）和人非小細胞肺癌細胞（A549）。以順鉑為陽性對照，每個樣品平行測試3次，結果表明化合物1～4對這3株腫瘤細胞的增殖具有一定的抑制活性，其余化合物對這3 株腫瘤細胞增殖無顯著影響（表1）。

表1 牛尾草根中二萜類化合物的細胞毒活性Table 1 The cytotoxic activities of diterpenes from the roots of I.ternofolius

5 討論

本實驗對牛尾草根乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進行了系統(tǒng)的分離純化，得到9 個二萜類化合物?；衔?～3 為松香烷型二萜，化合物4～6 為貝殼杉烷型二萜，化合物7～9 為阿替生烷型二萜?；衔?～9 首次從該植物中分離得到。體外細胞毒活性實驗表明，化合物1～4 對三株腫瘤細胞（MCF-7，A549 和HCT116）的增殖具有一定的抑制活性。

松香烷型二萜具有三環(huán)二萜結構，主要存在于唇形科（Labiatae）、松科（Pinaceae）、菊科（Composi‐tae）、大戟科（Euphorbiaceae）和豆科（Fabaceae）等植物，具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒等活性。松香酸是從松香中發(fā)現(xiàn)首個松香烷二萜類化合物[19]。貝殼杉烷型二萜類化合物從天然產物中已分離鑒定超過1 500 種，多數來自唇形科（Labiatae）香茶菜屬（Isodon）、菊科（Compositae）、鳳尾蕨科（Pterida‐ceae）和大戟科（Ephorbiaceae）等植物。這類四環(huán)二萜分子可以通過分子內氧化反應，切斷反應以及重排反應，展現(xiàn)出復雜多樣性。大量藥理活性研究表明這類化合物具有較強的抗菌和抗腫瘤活性[20]。阿替生烷型二萜類化合物主要存在于大戟科（Ephorbiaceae）植物，具有抗腫瘤、抗HIV、抗炎等生物活性[16,21]。本研究豐富了牛尾草中二萜類化合物的結構類型，為后續(xù)二萜類化合物在抗腫瘤活性方面的研究提供了相關的科學依據，同時也為二萜類化合物的提取、分離提供了方法借鑒。