基因TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1在小兒腎母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義

侯玉玲 豆秀娟 李 壹

腎母細(xì)胞瘤是小兒實(shí)體腫瘤中常見(jiàn)的惡性腎臟腫瘤，發(fā)病率約占所有腫瘤的6%[1]。腎母細(xì)胞瘤早期無(wú)典型臨床癥狀，且大部分患兒年齡較小，無(wú)法準(zhǔn)確且自主描述體征，致使就醫(yī)時(shí)已錯(cuò)過(guò)最佳時(shí)機(jī)。目前，CT、超聲、磁共振等影像學(xué)檢查是診斷腎母細(xì)胞瘤的常用手段，但早期缺乏特異性癥狀，行影像學(xué)檢查時(shí)大部分患兒病情已發(fā)展至中晚期，治療難度增加，大大影響了患兒的生存時(shí)間[2]?，F(xiàn)階段，手術(shù)及放化療治療是改善腎母細(xì)胞瘤患兒預(yù)后的重要方法，但于治療前明確患兒具體的病變類型，對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有重要的作用。拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(TOPO Ⅱα)、3型β微管蛋白編碼基因(TUBB3)、核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCC1)的mRNA異常表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤間存在密切的聯(lián)系，故對(duì)不同基因表達(dá)的患兒給予積極干預(yù)，有助于改善患兒預(yù)后[3]。鑒于此，本研究旨在探究TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1基因表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月至2020年3月我院收治的40例腎母細(xì)胞瘤患兒的病理組織標(biāo)本，另同期采集距離腫瘤組織2～3 cm的癌旁組織標(biāo)本作為對(duì)照。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有組織均經(jīng)術(shù)后病理、影像學(xué)檢查及實(shí)驗(yàn)室檢查明確診斷，且所有患兒均為首次發(fā)??；既往無(wú)放化療治療史；病歷資料完整；患兒家屬均自愿參與本次研究，簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：癌細(xì)胞已發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移；參與本研究前已接受其他治療；耐受性差，無(wú)法配合完成本次研究者。40例患兒中男24例，女16例；年齡2～8歲，平均年齡(4.86±0.94)歲。

1.2 方法

(1)樣本制備：腎母細(xì)胞瘤組織及癌旁組織標(biāo)本均使用100 ml/L的甲醛溶液固定24 h，24 h后使用乙醇充分沖洗。(2)TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)檢測(cè)：依據(jù)分支-DNA液相芯片技術(shù)測(cè)定各組織標(biāo)本中的TOPO Ⅱα mRNA、TUBB3 mRNA、ERCC1 mRNA水平。操作方法如下：在56 ℃環(huán)境下使用裂解液對(duì)標(biāo)本行裂解操作3 h，加入緩沖液，在56 ℃環(huán)境下充分震蕩，孵育過(guò)夜。將孵育板置于磁力架上，靜置1 min，舍棄上層清液，使用洗滌液充分震蕩清洗3 min，置于磁力架上60 s，舍棄上層清液，重復(fù)操作3次。于52 ℃環(huán)境下震蕩后反應(yīng)60 min，并放置于磁力架上1 min，舍棄上層清液后重復(fù)洗滌3次。使用洗滌液震蕩洗滌3 min，獲得最終熒光值。當(dāng)TOPO Ⅱα≥40%，TUBB3≥60%，ERCC1 ≥60%時(shí)，為高表達(dá)；當(dāng)TOPO Ⅱα<40%，TUBB3<60%，ERCC1<60%時(shí)，為低表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

分析TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)情況；另分析TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1與腎母細(xì)胞瘤患兒病理特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)情況比較

癌組織中TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1高表達(dá)率均高于癌旁組織，中低表達(dá)率低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)情況比較(例，%)

2.2 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤患兒病理特征的關(guān)系

TOPO Ⅱα高表達(dá)患者病理分期Ⅲ～Ⅳ占比率高于中低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ERCC1高表達(dá)患者病理分期Ⅲ～Ⅳ占比率高于中低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤患兒病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

手術(shù)及術(shù)后放化療是治療腎母細(xì)胞瘤的常用方法，在改善患兒預(yù)后中意義重大。大量數(shù)據(jù)顯示[4]，腎母細(xì)胞瘤患兒術(shù)后5年生存率可達(dá)87%。在臨床治療中不僅僅需要確保臨床療效，還需減輕放化療產(chǎn)生的毒副作用，以提高患兒的生存及生活質(zhì)量。既往傳統(tǒng)治療易引起患兒全身性或中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性反應(yīng)，加之腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性，使得化療效果受到影響[5]。此外，不同基因在不同過(guò)程中產(chǎn)生的作用是導(dǎo)致多重耐藥性的主要因素，也是引發(fā)腎母細(xì)胞瘤發(fā)生及發(fā)展的重要原因[6]。故治療前明確基因表達(dá)對(duì)指導(dǎo)臨床治療、評(píng)估治療效果意義重大。

TOPO Ⅱα基因通過(guò)編碼DNA TOPO Ⅱ在DNA中的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯中意義重大，并可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。研究顯示[7]，TOPO Ⅱα低表達(dá)者對(duì)化療藥物中的蒽環(huán)類及依托泊苷類均存在較強(qiáng)的耐藥性，但高表達(dá)者對(duì)上述兩種藥物較為敏感。TUBB3基因具有編碼-tubulin-Ⅲ蛋白的作用，其異常表達(dá)與抗微管類藥物及腫瘤的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[8]。ERCC1水平高低在DNA的修復(fù)中影響較大，其異常表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展聯(lián)系密切，如肝癌、肺癌、結(jié)直腸癌等。ERCC1高表達(dá)及低表達(dá)在鉑類藥物治療中受益較大[9]。本研究結(jié)果顯示，癌組織中TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1高表達(dá)率均高于癌旁組織，中低表達(dá)率低于癌旁組織；TOPO Ⅱα高表達(dá)者病理分期Ⅲ～Ⅳ發(fā)生率高于中低表達(dá)者，ERCC1高表達(dá)者病理分期Ⅲ～Ⅳ發(fā)生率高于中低表達(dá)者，提示TOPO Ⅱα與患兒病理分期有關(guān)。究其原因可知TOPO Ⅱα表達(dá)水平隨著病理分期的加重而升高，由此可推測(cè)晚期的腎母細(xì)胞瘤患兒對(duì)依托泊苷類及蒽環(huán)類藥物較為敏感。另TUBB3表達(dá)有助于促進(jìn)及維持細(xì)胞的正常生理活動(dòng)，其異常表達(dá)在腎母細(xì)胞瘤的發(fā)生及發(fā)展中具有重要作用；ERCC1的高表達(dá)率與腎母細(xì)胞瘤病理分期密切相關(guān)[10]。由此可見(jiàn)，腎母細(xì)胞瘤患兒機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)大量的DNA受損，腫瘤惡性程度越高，DNA損傷越多，基因組織表達(dá)穩(wěn)定性越差。

綜上所述，TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1在腎母細(xì)胞瘤患兒中表達(dá)水平高于癌旁組織，其中TOPO Ⅱα、ERCC1高表達(dá)與疾病病理分期相關(guān)。