三種常見豬肺炎支原體疫苗的免疫效果對比試驗

胡 曉，韋學鳳

（1.四川省內江市畜牧業(yè)發(fā)展中心，四川 內江 641007；2.西南大學動物科學學院，重慶 榮昌 402460）

豬支原體肺炎是由豬肺炎支原體引發(fā)的一種慢性肺炎，俗稱喘氣?。?］。疫苗免疫是豬支原體肺炎的主要防控手段之一，目前市場上的商品化疫苗主要有滅活苗和弱毒苗，但不同廠家疫苗免疫后的抗體水平及對仔豬生長性能的影響存在差異。為篩選出適合內江豬保種場的最佳豬肺炎支原體疫苗，筆者選用市場上最常見的三種豬肺炎支原體疫苗進行了比較試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 生長情況相當、剛出生的健康哺乳仔豬60頭，由內江豬保種場提供。

1.2 疫苗 疫苗A（美國某動物保健品有限公司），批準文號：獸藥生字（2014080071090），批號：20 170623；疫苗B（南京某生物科技有限公司），批準文號：獸藥生字（2012）100991062，批號：20 180113；疫苗C（西班牙某生物藥廠），進口號：（2015）外獸藥證字28號，批號：17032509。以上三種疫苗均為市場所購。

1.3 主要試劑 豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒（批號：2017071120），購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.4 主要儀器 高速冷凍離心機，酶標儀，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱。

1.5 方法

1.5.1 試驗分組 將試驗仔豬隨機分成三組，每組各20 頭，7 日齡接種疫苗。A 組用疫苗A 免疫，B 組用疫苗B 免疫，C 組用疫苗C 免疫。免疫后所有試驗仔豬按照內江豬保種場的飼養(yǎng)管理規(guī)程飼喂，仔豬于30 日齡斷奶，60 日齡轉入育肥舍。

1.5.2 生長性能觀察 稱取并記錄各試驗組仔豬的7日齡體重、30日齡體重、60日齡體重，統(tǒng)計并記錄各組試驗仔豬斷奶后的飼料消耗、呼吸道發(fā)病率、死亡率等情況。

1.5.3 被檢血清的采集 各組隨機選擇試驗仔豬10頭，分別在7、30、60日齡采血，分離血清，冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.4 豬肺炎支原體ELISA抗體的檢測

（1）樣品準備：將待檢血清從－20 ℃冰箱中拿出靜置30 min，用試劑盒樣本稀釋液作5 倍稀釋。對照血清不稀釋。洗滌緩沖液準備：用蒸餾水作20倍稀釋。

（2）操作步驟：嚴格按豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒說明書進行。

（3）結果判斷：嚴格按豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒說明書進行。

1.5.5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析。

2 試驗結果

2.1 各組仔豬的生長性能 三組試驗仔豬分別在7日齡、30日齡、60日齡進行空腹稱重，統(tǒng)計仔豬的飼料消耗量、呼吸道發(fā)病率（表1）。7日齡和30 日齡時，三組仔豬的體重差異不顯著（P＞0.05）；60日齡時，B組仔豬體重顯著高于A組和C組（P＜0.05），A 組和C 組間的體重差異不顯著（P＞0.05）。30～60 日齡時，B 組料肉比最低，呼吸道發(fā)病率最低，C組次之，A組最高。

表1 各組仔豬的生長性能統(tǒng)計 頭、kg

2.2 免疫后各組仔豬的ELISA 抗體OD 值 7日齡時，A、B、C三組產(chǎn)生的抗體水平差異不顯著（P＞0.05）；30 日齡時，A 組和C 組的抗體水平顯著高于B 組（P＜0.05），A組和C組之間差異不顯著（P＞0.05）；60 日齡時，C 組的抗體水平顯著高于A 組（P＜0.05），A 組抗體水平顯著高于B 組（P＜0.05），A 組和C 組的抗體水平極顯著高于B組（P＜0.01）。詳見表2。

表2 免疫后各組仔豬的抗體OD值

2.3 各組仔豬的ELISA 抗體陽性率 7 日齡時，A、B、C 三組的抗體陽性率均為0；30 日齡時，A、B、C 三組的抗體陽性率分別為80%、20%、90%；60 日齡時，A、B、C 三組的抗體陽性率分別為90%、20%、100%。詳見表3。

表3 免疫后各組仔豬的抗體陽性率

3 討論

3.1 抗體水平分析 目前，防治豬肺炎支原體的主要手段是接種疫苗，雖然不能凈化豬場的豬肺炎支原體，但是一般情況下能使豬場的生產(chǎn)效能提高，呼吸道疾病發(fā)病率降低。但因不同廠家疫苗的菌株、佐劑和接種方式等不同，導致疫苗的免疫效果也不一樣。為了篩選出適合內江豬保種場使用的性價比最高的豬肺炎支原體疫苗，本試驗選用了市場上出售的三種豬肺炎支原體疫苗進行效果對比，其中A、C組為豬肺炎支原體滅活苗，B 組為豬肺炎支原體弱毒疫苗。結果在30日齡時，A組和C組的抗體水平差異不明顯，但均顯著高于B 組（P＜0.05）；60 日齡時，C 組的抗體水平顯著高于A 組（P＜0.05），A 組和C 組的抗體水平極顯著高于B組（P＜0.01），表明C組抗體水平最好，B 組抗體水平最差。陳財［2］用豬支原體肺炎活疫苗（168 株）和四種滅活苗免疫仔豬，結果滅活苗免疫組的抗體陽性率、抗體水平均高于弱毒苗免疫組。與本試驗結果相符。A組和C組在60 日齡時抗體水平差異顯著，可能與苗的質量、個體差異有關。B 組弱毒苗與A、C 組滅活疫苗的抗體水平差異極顯著，究其原因可能是滅活苗通過肌肉注射產(chǎn)生的抗體主要為IgG，弱毒苗肺內注射產(chǎn)生的抗體主要為IgA，而血清中ELISA檢測的抗體為IgG，故檢測顯示A、C 組的抗體水平顯著高于B組。

3.2 生長性能分析 免疫后60 日齡觀測到B 組增重顯著高于A 組和C 組（P＜0.05），B 組的料肉比、呼吸道發(fā)病率均低于A組和C組，但A、C滅活疫苗組的抗體水平均高于B 弱毒疫苗組，表明免疫弱毒苗的仔豬在增重、料肉比、呼吸道發(fā)病率、肺部病變等方面優(yōu)于滅活苗。從另一方面反映了抗體水平只能作為評價疫苗整體免疫效果的參考指標之一。由于弱毒苗的免疫為肺內注射，要求操作熟練，否則容易導致免疫失敗，這加大了免疫注射的難度，因此，豬場應根據(jù)自身的專業(yè)素質水平和實際情況進行選擇。

4 結論

本試驗選用市售常見的三種豬肺炎支原體疫苗進行免疫效果對比，結果顯示：30日齡時，A、C組ELISA抗體陽性率明顯比B組高；60日齡時，C 組ELISA 抗體陽性率高于A 組，表明用C 廠家滅活疫苗免疫后的抗體水平最高。

在疫苗免疫后的30～60日齡，B組體重明顯高于A、C兩組，料肉比和呼吸道發(fā)病率也低于A、C 兩組，表明用B 組弱毒疫苗免疫后仔豬的生長性能最好。